【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及hpv检测，特别涉及一种可分级检测hpv感染程度的方法。
技术介绍
1、hpv是人类乳头瘤病毒的简称，它能引起人类及动物的感染，主要感染宿主的上皮细胞和组织内层。依感染组织形态可区分为表皮型和黏膜型两种：1.表皮型主要是引起手、脚上皮感染；2.黏膜型则造成口腔、喉咙、呼吸道及生殖泌尿道感染。hpv引起手、脚皮肤疣的产生，其机制主要是引起皮肤角质增生，通常一到五年后患处会自然缓解，但部份受感染的脸部也会引起皮肤癌，有些也会引起口腔鳞状细胞癌。
2、大约有30到40种类型的hpv透过性行为传染到生殖器及周边皮肤，其中又有些hpv会引起性器疣。若反复感染某些高危险性且又没有疣等症状的hpv类型，将可能发展成为癌前病变，甚至是侵袭性癌症。hpv的感染是造成子宫颈癌的主要原因之一，其感染途径普遍是通过性行为引起，然而经由母体的垂直感染也是造成hpv感染的途径之一。经研究，99.7％的子宫颈癌都是因感染hpv所造成。
3、目前，常见的检测hpv感染的方法包括pcr；聚合酶链式反应(pcr)在体外实现核酸分子快速扩增，具有良好的特异性和灵敏度,同时伴随着pcr仪器的出现，聚合酶链式反应可以通过控制反应的样本达到热变性、引物退火和引物延伸三个步骤所需要的温度来实现扩增；为了保证pcr反应的准确性和重复性，需要控制反应体系的质量、引物的有效性、反应温度和时间等关键参数，以确保pcr反应的准确性和稳定性，并消除可能存在的杂交等干扰；pcr仪样本实际温度和温度传感器测量的温度之间存在着滞后，导致试管中样本温度达不
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种可分级检测hpv感染程度的方法，能够实时有效地控制pcr扩增过程中的温度和时间，提高检测的准确性和效率。
2、本专利技术提出的一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述方法包括：
3、s1、采集患者的样本并提取样本中的dna；
4、s2、用特定的hpv基因序列进行pcr扩增，得到扩增后的dna片段；
5、s3、将扩增得到的dna片段与荧光标记的探针混合反应，通过光学检测技术来检测与之匹配的荧光信号，从而判断是否存在感染；
6、s4、对荧光信号数据进行采集和分析，利用计算机处理荧光信号数据，建立感染程度与荧光信号幅度之间的关系模型，根据荧光信号的幅度水平，进行感染程度的分级。
7、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述s2包括：
8、将pcr反应体系中所需的试剂按比例混合；
9、根据pcr反应的具体引物和所需扩增片段的长度，设置并控制pcr反应的温度和时间；
10、按照设置好的pcr反应条件在pcr仪中进行pcr扩增反应。
11、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述设置并控制pcr反应的温度和时间包括：
12、设定pcr反应的预变性、退火和延伸三个步骤的温度和时间参数并实时进行调整，其中，调整的步骤为：
13、获得根据实际样本温度和监测温度的差值；
14、实时获取将扩增效果曲线并与标准曲线对照；
15、根据样本温度和监测温度的差值以及根据对照调整曲线，实时调整温度设定参数；
16、其中，温度调整的最小时间间隔为：va为当前扩增速率，v为平均扩增速率，c为循环周期。
17、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，其特征在于，所述获得实际样本温度和监测温度的差值包括：
18、设管内样本初始温度为初始监测温度为t0；t时间后，监测温度为t1，管内样本温度为
19、
20、p为pcr循环系统内总的热容量；r为样本管的热阻；
21、实际样本温度和监测温度的差值为
22、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述设置并控制pcr反应的温度和时间还包括：
23、采用pid控制算法，实时监测pcr反应过程中的温度，
24、根据设定温度和扩增效果实时进行调节加热和/或制冷设备功率；其中，
25、u(t)＝kp*e(t)+ki*∫e(t)dt+kd*de(t)/dt；
26、其中，u(t)是控制器的输出，用于调节加热或制冷设备的功率，e(t)是偏差，即设定温度与实际监测温度之间的差值；kp、ki和kd分别是比例、积分和微分环节的系数，范围为0～1；t是时间；
27、采用计时器，实时监测pcr反应过程中的时间，并根据扩增效果实时进行调节；
28、在pcr反应完成后，记录实际反应时间和温度，与设定初始温度和时间进行比较，评估反应效果。
29、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述s3包括：
30、将扩增得到的dna片段与荧光标记的探针进行荧光标记混合反应；在混合反应中，探针与目标片段结合产生荧光信号。
31、通过光学检测技术来检测与荧光标记的探针匹配的荧光信号，并判断是否存在感染；
32、根据检测结果和标准曲线数据分析，判断样本是否感染和病毒载量。
33、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述s3包括：
34、利用样本进行建模，在pcr反应过程中，定期记录荧光信号数据，并绘制荧光信号随时间的变化曲线；
35、确定荧光信号阈值和线性增长量；
36、根据荧光信号阈值的线性增长量或翻倍时间，推算pcr反应期结束的时间点；
37、根据推算pcr反应期结束的时间点，选择待测样品荧光信号检测的最佳时间点；
38、所述最佳时间点为
39、其中，o为推算的pcr反应期结束的时间点，va为当前扩增速率，va为当前扩增速率，vmax为最大扩增速率，c为循环周期。
40、进一步的，一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述s4包括：
41、利用已知感染程度的样品和阴性对照样品，进行pcr反应和荧光信号检测，在得到的荧光信号数据和感染程度数据之间建立特定的关系模型；
42、根据荧光信号幅度对感染程度进行分级：
43、通过荧光信号数据和所建立的关系模型，计算出样品中病毒的感染程度，并将感染程度分级。
44、根据权利要求1所述的一种可分级检测hpv感染程度的方法，所述s4包括：
45、通过用线性回归建立感染程度与荧光信号幅度之间的关系模型；
46、
47、其中s为荧光信号，g感染程度；利用拟合模型计算处α、β、
48、本专利技术有益效果：通过本专利技术所述一种可分级检测hpv感染程度的方法，该方法采用荧光标记探针进行检测，通过光学检测技术的检测结果可以较准确地判断是否存在hpv本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述S2包括：
3.根据权利要求2所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述设置并控制PCR反应的温度和时间包括：
4.根据权利要求3所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述获得实际样本温度和监测温度的差值包括：
5.根据权利要求3所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述设置并控制PCR反应的温度和时间还包括：
6.根据权利要求1所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述S3包括：
7.根据权利要求1所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述S3包括：
8.根据权利要求1所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述S4包括：
9.根据权利要求1所述的一种可分级检测HPV感染程度的方法，其特征在于，所述S4包括：
【技术特征摘要】
1.一种可分级检测hpv感染程度的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一种可分级检测hpv感染程度的方法，其特征在于，所述s2包括：
3.根据权利要求2所述的一种可分级检测hpv感染程度的方法，其特征在于，所述设置并控制pcr反应的温度和时间包括：
4.根据权利要求3所述的一种可分级检测hpv感染程度的方法，其特征在于，所述获得实际样本温度和监测温度的差值包括：
5.根据权利要求3所述的一种可分级检测h...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿磊，刘惠，
申请(专利权)人：杭州阿克索生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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