【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，特别是涉及生物医药，更为具体的说是涉及trim15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途。
技术介绍
1、骨关节炎（osteoarthropathy，简称oa）是一种在全世界广泛流行的退行性慢性疾病，主要症状为关节疼痛和僵硬，晚期致残率极高，长期影响患者的生活质量，也给国家和社会带来了沉重的负担。随着全球人口老龄化进一步加剧，骨关节炎的发病率和患病率也逐年提升。
2、目前骨关节炎的主要治疗手段还依赖于以镇痛为主的对症治疗和晚期的关节置换手术，尚无能有效延缓和逆转病情的药物。骨关节炎的核心病理特征是关节软骨退化。随着研究者们对细胞衰老的探索和理解不断深入，越来越多的观点认为软骨细胞衰老实际上并不是完全年龄匹配的，而更像是细胞的一种特殊状态。
3、泛素化是一种蛋白质翻译后修饰的重要机制。泛素化调控蛋白质的活性及生物学功能，影响蛋白和蛋白，蛋白和核酸的相互作用，同时通过蛋白酶体途径介导细胞内大部分蛋白质的降解过程，进而参与调控细胞的生理和病理过程，包括细胞衰老、dna修复、细胞凋亡、炎症反应等。同时，泛素化修饰的目标蛋白可通过泛素连接酶和去泛素酶（dub）的竞争作用实现动态调控。
4、trim家族属于最经典的环指（ring-finger）结构e3泛素化连接酶家族（rnf）之一，是哺乳动物中最大的e3泛素化连接酶家族。trim家族的蛋白有着共通的结构，特征是由一个ring（really interesting new gene）结构，一个或两个bb（b-box）结构域和一个c
5、本专利技术的专利技术人通过大量的研究发现trim15在骨关节炎患者的软骨组织中也存在着明显的升高。同时，trim15为端粒相关基因，在端粒维持的平衡中扮演着重要的角色，并参与细胞的衰老和细胞命运的转归。但目前尚未有研究对trim15如何调控软骨细胞衰老和骨关节炎进展的机制进行深入探讨。
6、基于上述原因，本研究选择以trim15作为研究对象，进一步深入探究trim15在软骨细胞衰老和oa进展中的机制，并以此为基础，积极推进针对骨关节炎治疗的药物研发，满足患者用药需求。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是针对目前在针对骨关节炎的治疗中仍以镇痛为主，在晚期通过关节置换手术进行治疗，尚无能有效延缓和逆转病情的药物。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术在前期研究的基础上，选择trim15作为研究对象，通过临床样本研究、构建细胞oa模型，动物oa模型（dmm和自然衰老），结合构建的trim15基因软骨组织特异性敲除的条件性敲除小鼠，利用western blot、pcr、组织学染色、免疫荧光、免疫共沉淀、质谱分析等技术，同时采用新兴的生物研究技术如分子对接，分子动力学模拟等，明确trim15与 oa 病变严重程度的关系，探索为trim15在oa发生、发展中的所扮演的角色，为研发骨关节炎新的药物治疗靶点提供新的理论依据和新的临床转化可能。
3、经过研究和实施例证实，在软骨细胞中敲除了trim15后，yap1和wwtr1的表达较对照组呈现了明显的升高，而gsea和kegg富集分析均显示，hippo通路在差异表达的基因中富集。其中yap是信号转导通路hippo通路的核心分子，因此我们进一步深入且全面的对yap在骨关节炎中所扮演的角色进行探索。
4、通过本专利技术进行的实施例可以证实，trim15介导的yap泛素化会影响其磷酸化和核易位，进而调控yap蛋白的功能，进而促进软骨衰老相关基因的转录表达，导致骨关节炎发生、发展。
5、在此过程中，trim15通过spry结构域和yap相互作用，使yap蛋白的ww结构域内的赖氨酸位点泛素化，由此阻断amot和yap的相互作用，最终导致yap的磷酸化水平降低，核易位增加。
6、因此，本专利技术公开了trim15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途。
7、所述的trim15表达抑制剂为由腺相关病毒搭载的trim15 shrna（aav5-trim15shrna）的小分子核酸药物。
8、本专利技术通过临床样本研究发现trim15在骨关节炎患者的软骨组织中高表达，并以此展开进一步的深入研究，首先发现并公开trim15和软骨退变的严重程度之间的关系，以明确其调控软骨细胞衰老及骨关节炎的进展的进程，从而为骨关节炎的治疗提供了新的药物靶点；并进一步通过实例证实trim15能够通过促进yap的泛素化影响其亚细胞定位调控其功能，揭示了骨关节炎发病过程中的深层次分子机制，为后续的相关研究提供了理论基础和研究范式；在此基础上我们公开了trim15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途，特别是由腺相关病毒搭载的trim15 shrna（aav5-trim15 shrna）的小分子核酸药物作为trim15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途。经证实，以trim15蛋白为靶点的小分子核酸药物aav5-trim15 shrna通过关节腔注射给药，可以有效治疗骨关节炎，从而为骨关节炎的临床治疗提供了新的思路，有望在未来转化获得有效延缓和逆转病情的骨关节炎药物。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1. TRIM15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征是，所述的TRIM15表达抑制剂是由腺相关病毒搭载的TRIM15 shRNA（AAV5-TRIM15 shRNA）的小分子核酸药物。
【技术特征摘要】
1. trim15表达抑制剂在制备用于治疗骨关节炎药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征是，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：季明亮，陆军，李壮，
申请(专利权)人：东南大学附属中大医院，
类型：发明
国别省市：
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