一种发酵制备依克多因的方法技术

技术编号：43198091 阅读：10 留言：0更新日期：2024-11-01 20:17

本发明专利技术公开了一种发酵制备依克多因的方法，包括如下步骤：将大肠杆菌工程菌种子液按照10‑15％的接种量接种于发酵培养基，发酵得到含有依克多因的发酵液；所述发酵培养基的成分为：葡萄糖30‑35g/L，番茄提取物5‑10g/L，氨基葡萄糖1‑2g/L，益生元组合物8‑16g/L，酵母浸粉3‑9g/L，蛋白胨6‑12g/L，硫酸镁0.5‑1.5g/L，磷酸二氢钾1‑1.5g/L，玉米浆1‑2g/L，柠檬酸1‑2g/L；所述益生组合物由水苏糖、低酯果胶和棉籽糖按照1：(0.5‑1)：(1‑1.5)的重量比组成。本发明专利技术在现有发酵培养基的基础上，添加了番茄提取物和益生元，能够提高大肠杆菌工程菌发酵制备所得依克多因的产量和纯度。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，涉及一种发酵制备依克多因的方法。

技术介绍

1、依克多因又称四氢嘧啶，是一种广泛存在于好氧、化学异养及嗜盐微生物中的一种小分子物质，这些微生物通过胞内依克多因的大量合成和富集，能够保护自身免受高温、高盐浓度和极端温度等恶劣环境的影响。

2、依克多因是一种氨基酸衍生物，属于极端酶组分，极端酶是具有很小应力的保护分子，可以保护极端微生物和植物免受盐湖、温泉、冰块、深海或沙漠等有害环境的危害。目前，依克多因已被应用于保健、生命科学和化妆品等领域。

3、现有技术中，依克多因的制备方法主要为微生物发酵，如：

4、申请号为201911272352.1的中国专利公开了一种喜盐芽孢杆菌及其工业化生产依克多因的生产方法，该专利使用喜盐芽孢杆菌发酵12h所得依克多因的浓度为16g/l；

5、申请号为202310688230.0的中国专利公开了一种使用大肠杆菌的工程菌发酵制备依克多因的方法，该专利在发酵44h时，依克多因的浓度为51.7g/l；

6、申请号为201710012845.6的中国专利公开了利用木糖诱导产生四氢嘧啶的基因工程菌及其应用，该专利在发酵40h时，所得依克多因的含量为50g/l。

7、以上专利技术专利的依克多因的浓度均不超过55g/l，产量较低，而目前市场对依克多因的需求量较大，因此如何开发一种能够提高依克多因产量成为了当下研究的热点。

技术实现思路

1、针对上述现有技术的不足，本专利技术

2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：

3、一种发酵制备依克多因的方法，包括如下步骤：

4、将大肠杆菌工程菌种子液按照10-15％的接种量接种于发酵培养基，发酵得到含有依克多因的发酵液；

5、所述发酵培养基的成分为：葡萄糖30-35g/l，番茄提取物5-10g/l，氨基葡萄糖1-2g/l，益生元组合物8-16g/l，酵母浸粉3-9g/l，蛋白胨6-12g/l，硫酸镁0.5-1.5g/l，磷酸二氢钾1-1.5g/l，玉米浆1-2g/l，柠檬酸1-2g/l；

6、所述益生组合物由水苏糖、低酯果胶和棉籽糖按照1：(0.5-1)：(1-1.5)的重量比组成。

7、优选的，所述发酵的条件为：在35-40℃条件下发酵40-48h。

8、优选的，所述番茄提取物的制备方法为：

9、将新鲜番茄去梗、破碎、打浆，加入蛋白酶和纯碱，调节果浆ph值至5.8-6.5，然后在110-120℃下杀菌5-10min，冷却、过滤干燥得到番茄提取物。

10、优选的，所述发酵培养基的ph值为6.5-7.5，初始溶氧量为100％，发酵过程中溶氧量为10-50％。

11、优选的，所述大肠杆菌工程菌种子液的培养方法为：

12、将大肠杆菌工程菌接种至种子培养基，在35-40℃条件下发酵6-15h，得到种子液；

13、所述种子培养基的成分为：葡萄糖30-35g/l，酵母浸粉3-9g/l，蛋白胨6-12g/l，硫酸镁0.5-1.5g/l，磷酸二氢钾1-2g/l，玉米浆1-2g/l，柠檬酸1-2g/l。

14、优选的，所述种子培养基的ph值为6.5-7，溶氧量为40-50％。

15、优选的，当发酵至8h时，向发酵培养基中添加木糖，使培养基中的木糖浓度为5-20g/l。

16、本专利技术的有益效果：

17、本专利技术在现有发酵培养基的基础上，添加了番茄提取物和益生元，能够提高大肠杆菌工程菌发酵制备所得依克多因的产量。其中，番茄在经过蛋白酶酶解后，添加至培养基能够提高大肠杆菌工程菌的活菌数，益生元则能够增强大肠杆菌工程菌的生长繁殖能力，番茄提取物和益生元同时加入培养基，起到了协同增效的作用，明显提高了依克多因的产品浓度和发酵效率。

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【技术保护点】

1.一种发酵制备依克多因的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为：在35-40℃条件下发酵40-48h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述番茄提取物的制备方法为：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的pH值为6.5-7.5，初始溶氧量为100％，发酵过程中溶氧量为10-50％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌工程菌种子液的培养方法为：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的pH值为6.5-7，溶氧量为40-50％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当发酵至8h时，向发酵培养基中添加木糖，使培养基中的木糖浓度为5-20g/L。

【技术特征摘要】

1.一种发酵制备依克多因的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵的条件为：在35-40℃条件下发酵40-48h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述番茄提取物的制备方法为：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的ph值为6.5-7.5，初始溶氧量为100％，发...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏东亮，马洪雪，苏廷星，
申请(专利权)人：山东兰束生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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