【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于检测磷酸吡哆醛浓度的可视化生物传感器，属于生物传感器。
技术介绍
1、磷酸吡哆醛(磷酸吡哆醛)，化学名称为2-甲基-3-羟基-5(-磷酰氧基)甲基-4-吡啶甲醛，是一种重要的维生素b6族化合物，是维生物素b6的一种磷酸化形式，不仅是氨基酸代谢中的转氨酶及脱羧酶的辅酶，还能促进谷氨酸脱羧，增进γ-氨基丁酸生成。磷酸吡哆醛还大量应用在合成β-羰基酰胺类药物、生物活性研究等领域，如在临床上主要用于治疗帕金森综合症，促进转氨酶进行转氨作用提高体内多巴胺的含量。目前现有的检测方法主要为高效液相色谱检测法(hplc)，该方法虽然准确度高但检测所需时间较长、样品处理较麻烦，无法实时监测plp浓度变化情况，因此无法做到根据发酵环境中plp含量实时调整添加量。所以急需一种能实时、直观、简便、较为准确的检测方法监测plp变化情况的方法。
技术实现思路
1、一种响应磷酸吡哆醛浓度的生物传感器，含有启动子pylch、标记物基因、核糖体结合位点rbsb0030、表达阻遏蛋白的基因arac和具有arac阻遏蛋白结合位点的启动子parabad；所述启动子pylch调控阻遏蛋白的基因arac的表达；所述启动子pylch和基因arac之间具有核糖体结合位点rbsb0030；所述启动子parabad位于基因arac的下游，并调控荧光标记物基因的表达。
2、在一种实施方式中，所述启动子pylch、核糖体结合位点rbsb0030、标记物基因位于载体pbad质粒上。
3、在一种
4、在一种实施方式中，所述标记物基因为深红色荧光蛋白基因mkate。
5、在一种实施方式中，所述生物传感器构建在pbad质粒上。
6、在一种实施方式中，启动子pylch的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述核糖体结合位点rbsb0030的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述荧光蛋白基因mkate的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述阻遏蛋白的基因arac的核苷酸序列如seq id no.19所示；所述启动子parabad的核苷酸序列如seq id no.18所示。
7、本专利技术还提供所述生物传感器的构建方法，将seq id no.1所示的启动子pylch、seq idno.2所示的核糖体结合位点rbsb0030和seq id no.19所示的arac基因依次连接到质粒pbad上，并在所述arac基因的下游依次连接seq id no.18所示启动子parabad和seq idno.3所示的标记物基因mkate。
8、本专利技术还提供含有所述生物传感器的重组微生物细胞。
9、在一种实施方式中，所述微生物包括但不限于大肠杆菌。
10、在一种实施方式中，所述大肠杆菌为大肠杆菌jm109。
11、本专利技术还提供所述生物传感器在检测重组微生物细胞培养环境中磷酸吡哆醛浓度中的应用。
12、在一种实施方式中，所述检测包括但不限于定性检测或定量检测。
13、有益效果：上述响应磷酸吡哆醛吸收速率的生物传感器，以来源于大肠杆菌(escherichia coli)mg1655的启动子pylch，红色荧光蛋白基因mkate，将其组装到pbad质粒上构建了特异性检测磷酸吡哆醛浓度的生物传感器，建立了磷酸吡哆醛浓度与荧光强度的有效关系；该生物传感器满足对细菌发酵环境中磷酸吡哆醛浓度检测的需求，在监测辅因子浓度领域及筛选高产或代谢磷酸吡哆醛的菌株方面具有重要的应用前景。
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1.一种响应磷酸吡哆醛浓度的生物传感器，其特征在于，含有启动子PylcH、标记物基因、核糖体结合位点RBSB0030、表达阻遏蛋白的基因araC和具有araC阻遏蛋白结合位点的启动子ParaBAD；所述启动子PylcH调控阻遏蛋白的基因araC的表达；所述启动子PylcH和基因araC之间具有核糖体结合位点RBSB0030；所述启动子ParaBAD位于基因araC的下游，并调控荧光标记物基因的表达。
2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述启动子PylcH、核糖体结合位点RBSB0030、标记物基因位于载体pBAD质粒上。
3.根据权利要求1或2所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物包括但不限于荧光蛋白。
4.根据权利要求3所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物基因为深红色荧光蛋白基因mKate。
5.根据权利要求1～4任一所述的生物传感器，其特征在于，启动子PylcH的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述核糖体结合位点RBSB0030的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述荧光蛋白基因mKate的核苷
6.含有权利要求1～5任一所述生物传感器的重组微生物细胞。
7.根据权利要求6所述的重组微生物细胞，其特征在于，所述微生物包括但不限于大肠杆菌。
8.权利要求1～5任一所述的生物传感器在检测重组微生物细胞发酵环境中磷酸吡哆醛浓度中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述发酵环境中还加入阿拉伯糖。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述检测包括但不限于定性检测或定量检测。
...【技术特征摘要】
1.一种响应磷酸吡哆醛浓度的生物传感器，其特征在于，含有启动子pylch、标记物基因、核糖体结合位点rbsb0030、表达阻遏蛋白的基因arac和具有arac阻遏蛋白结合位点的启动子parabad；所述启动子pylch调控阻遏蛋白的基因arac的表达；所述启动子pylch和基因arac之间具有核糖体结合位点rbsb0030；所述启动子parabad位于基因arac的下游，并调控荧光标记物基因的表达。
2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述启动子pylch、核糖体结合位点rbsb0030、标记物基因位于载体pbad质粒上。
3.根据权利要求1或2所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物包括但不限于荧光蛋白。
4.根据权利要求3所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物基因为深红色荧光蛋白基因mkate。
5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：高聪，宋龙飞，刘立明，刘佳，陈修来，胡贵鹏，李晓敏，刘存萍，王子豪，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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