【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及细菌学、微生物学、遗传学、分子生物学、酶学、工业蛋白质生产等领域。本公开的某些实施例涉及具有增强的蛋白质生产力表型的革兰氏阳性细菌细胞，用于构建重组革兰氏阳性细菌细胞的组合物和方法等。序列表的引用命名为“nb41845-wo-pct_sequencelisting.xml”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2023年1月06日，并且大小为35kb，其特此通过援引以其全文并入。
技术介绍
1、革兰氏阳性细菌诸如枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)等由于其优异的发酵特性和高产率(例如，高达25克/升培养物；van dijl和hecker,2013)经常被用作用于产生工业相关蛋白质的微生物工厂。例如，芽孢杆菌属物种(bacillus sp.)宿主细胞因其产生食品、纺织品、衣物洗涤、医疗器械清洁、制药工业等所需的酶(例如，淀粉酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酸裂合酶、蛋白酶、支链淀粉酶等)而为人熟知。因为这些非病原性革兰氏阳性细菌产生完全没有毒性副产物(例如，脂多糖；lps，也称为内毒素)的蛋白质，所以它们获得了欧洲食品安全局(efsa)的“安全资格认证(qualified presumption ofsafety)”(qps)地位，并且其许多产品获得了美国食品药品监督管理局的“公认安全(generally recognized as safe)”(gras)地位(olem
2、因此，经由微生物宿主细胞产生蛋白质(例如，酶、抗体、受体等)在生物
中是特别有意义的。同样，用于产生和分泌一种或多种目的蛋白的芽孢杆菌属宿主细胞的优化具有高度相关性，特别是在如下工业生物技术环境中，其中当蛋白质以大的工业产量生产时该蛋白质产率的微小改善具有重大意义。例如，许多异源蛋白质的表达在产率等方面仍可能具有挑战性和不可预测性。如下文所述，本公开涉及对于获得和构建具有增强的蛋白质产生能力的革兰氏阳性细胞(例如，蛋白质产生宿主)的高度希望和未满足的需求。
技术实现思路
1、如本文通常所述，申请人已经意外观察到yvyd基因的过表达与革兰氏阳性细菌细胞中目的蛋白的增强产生特别相关。因此，本公开的某些方面涉及用于产生目的蛋白的组合物和方法。更特别地，本公开的某些实施例尤其提供了过表达yvyd基因的重组(经修饰的)革兰氏阳性细菌细胞(菌株)、表达/产生一种或多种目的蛋白的重组革兰氏阳性细菌细胞、表达目的蛋白并过表达yvyd基因的重组革兰氏阳性细菌细胞、适用于引入细菌菌株中的多核苷酸构建体(例如，质粒、载体、表达盒等)等。因此，某些方面涉及过表达yvyd基因的重组革兰氏阳性细菌细胞，其中这些重组细胞产生增加量的目的蛋白，证明了当在合适条件下培养时产生的蛋白质的增强比生产力(qp)，证明了当在适合的条件下培养时产生的蛋白质的增强碳效率等。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组革兰氏阳性细胞，其过表达yvyD基因。
2.一种重组革兰氏阳性细胞，其过表达yvyD基因并表达编码目的蛋白(POI)的基因。
3.如权利要求2所述的重组细胞，其表达编码POI的基因的多个拷贝。
4.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyD基因与SEQ ID NO:23的yvyD基因具有至少50％的同一性。
5.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyD基因与SEQ ID NO:18的yvyD基因编码序列(CDS)具有至少50％的同一性。
6.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyD基因编码与SEQ ID NO:26的YvyD蛋白具有至少50％同一性的蛋白质。
7.如权利要求2所述的重组细胞，其中相对于表达相同POI的对照细胞，重组细胞产生增加量的所述POI，其中所述对照细胞不过表达所述yvyD基因。
8.如权利要求1所述的重组细胞，其中过表达所述yvyD基因包括用与下游(3′)天然yvyD基因CDS可操作地连接的异源启动子区替代天然yvyD基因启动子区
9.如权利要求2所述的重组细胞，其中过表达所述yvyD基因包括用与下游(3′)天然yvyD基因CDS可操作地连接的异源启动子区替代天然yvyD基因启动子区，其中所述异源启动子区相对于所述天然yvyD基因启动子增加所述天然yvyD基因CDS的表达。
10.如权利要求2所述的重组细胞，其中所述POI是酶。
11.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述革兰氏阳性细菌细胞是芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)细胞。
12.如权利要求2所述的重组细胞，其中所述革兰氏阳性细菌细胞是芽孢杆菌属物种细胞。
13.一种用于在革兰氏阳性细菌细胞中产生增加量的目的蛋白(POI)的方法，所述方法包括获得包含与SEQ ID NO:23的yvyD基因具有至少50％同一性的yvyD基因的亲本细胞，以及对所述细胞进行遗传修饰以过表达所述yvyD基因。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述亲本或经修饰的(重组)细胞包含编码所述POI的引入的表达盒。
15.如权利要求13所述的方法，其中当在相同条件下培养时，相对于所述亲本细胞，过表达所述yvyD基因的所述经修饰的细胞产生增加量的所述POI。
16.如权利要求13所述的方法，其中过表达所述yvyD基因的经修饰的细胞包含与下游(3′)yvyD基因CDS可操作地连接的异源启动子区，其中所述异源启动子区相对于天然yvyD基因启动子增加所述yvyD基因CDS的表达。
17.如权利要求13所述的方法，其中所述POI是酶。
18.如权利要求13所述的方法，其中所述革兰氏阳性细菌细胞是芽孢杆菌属物种细胞。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种重组革兰氏阳性细胞，其过表达yvyd基因。
2.一种重组革兰氏阳性细胞，其过表达yvyd基因并表达编码目的蛋白(poi)的基因。
3.如权利要求2所述的重组细胞，其表达编码poi的基因的多个拷贝。
4.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyd基因与seq id no:23的yvyd基因具有至少50％的同一性。
5.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyd基因与seq id no:18的yvyd基因编码序列(cds)具有至少50％的同一性。
6.如权利要求1所述的重组细胞，其中所述过表达的yvyd基因编码与seq id no:26的yvyd蛋白具有至少50％同一性的蛋白质。
7.如权利要求2所述的重组细胞，其中相对于表达相同poi的对照细胞，重组细胞产生增加量的所述poi，其中所述对照细胞不过表达所述yvyd基因。
8.如权利要求1所述的重组细胞，其中过表达所述yvyd基因包括用与下游(3′)天然yvyd基因cds可操作地连接的异源启动子区替代天然yvyd基因启动子区，其中所述异源启动子区相对于所述天然yvyd基因启动子增加所述天然yvyd基因cds的表达。
9.如权利要求2所述的重组细胞，其中过表达所述yvyd基因包括用与下游(3′)天然yvyd基因cds可操作地连接的异源启动子区替代天然yvyd基因启动子区，其中所述异源启动...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·韦伯，C·邦焦尔尼，S·D·蔡斯，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。