【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了经工程化的t细胞受体和亚基多肽，所述经工程化的t细胞受体和亚基多肽包含单链抗体(scfv)，所述scfv与和tcrγ链的恒定区的至少一部分或tcrδ链的恒定区的至少一部分融合的靶抗原结合。还包括编码经工程化的tcr多肽的核酸分子、表达经工程化的多肽和tcr的宿主细胞以及在治疗癌症中使用的方法。
技术介绍
1、如在病毒感染和罕见的癌症自发缓解中观察到的，t细胞能够攻击和破坏患病或恶性细胞。然而，t细胞容易对自身抗原或肿瘤抗原产生耐受性，使得肿瘤能够避免或逃避免疫监视。通过工程化t细胞以表达重组受体(如嵌合抗原受体(car))，已经开发出了策略来提供对患者的t细胞的靶特异性和亲和力。car提供抗体介导的癌细胞标志物识别和细胞内信号传导能力，以指导宿主t细胞基于其由car识别的抗原的表达而杀伤恶性细胞。
2、通过输注用嵌合抗原受体工程化的t细胞(car-t细胞)进行的过继免疫疗法可以提供潜在高度特异性和有效的癌症治疗(参见，例如sadelain等人(2013)《癌症发现(cancer discovery)》3:388-398)。然而，用car-t细胞处理可能在患者体内引起细胞因子释放综合征(crs)，这可能是严重的且潜在地威胁生命的(frey和porter(2019)《血液与骨髓移植生物学(biol blood marrow transplant)》25:e123-e127)。在表现出crs的car-t患者体内发现升高的细胞因子包含干扰素γ、可溶性αil-2受体、il-6和il-10。sacheva等人(201
3、肿瘤细胞可以通过参与抑制性免疫检查点通路来逃避免疫系统的破坏(pardoll(2012)《癌症自然评论(nature reviews cancer)》第12卷:252-264；darvin等人(2018)《实验与分子医学(exp mol med)》50:1-11)。抑制性免疫检查点通路(如由免疫检查点蛋白pd-1、pd-l1、ctla-4、lag-3、tim3和tigit的相互作用介导的抑制性免疫检查点通路)抵消免疫系统激活，以防止自身免疫应答。肿瘤细胞可以通过表达免疫检查点蛋白来利用这些抑制性通路，所述免疫检查点蛋白与t细胞上的其对应物相互作用，从而导致t细胞失活和抗肿瘤免疫应答停止。免疫检查点蛋白抑制t细胞的激活或功能，以调节免疫应答的强度和持续时间并且维持自身耐受性。许多免疫检查点蛋白都是已知的，如pd-1(程序性死亡1)及其配体pd-l1和pd-l2；ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4)及其配体cd80和cd86；tim-3(t细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)；lag-3(淋巴细胞激活基因-3)；tigit(具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体)；btla(cd272或b和t淋巴细胞弱化子)和vista(t细胞激活的v结构域免疫球蛋白抑制因子)(pardoll(2012)《癌症自然评论》12:252-264；borcherding等人(2018)《分子生物学杂志(j mol biol)》430:2014-2029)。
技术实现思路
1、本公开提供了经工程化的单链抗体t细胞受体(scfv-tcr)，所述scfv-tcr包含经工程化的t细胞受体(tcr)亚基，所述经工程化的tcr亚基包含与靶抗原结合的scfv。在本文所公开的各个实施方式中，所述scfv-tcr是基于γδt细胞受体(tcrγδ)的结构。在特定实施方式中，描述了重组受体，其中scfv(例如，可以与肿瘤相关抗原或检查点蛋白特异性结合的scfv)与tcrγ亚基的一部分连接，例如至少与tcrγ亚基的跨膜结构域和细胞内结构域或与其同源的多肽序列连接，其中表达重组scfv-tcrγ受体的t细胞可以表现出快速的肿瘤依赖性扩增和有效的抗肿瘤活性。本文所提供的特定说明性实施方式包括抗pd-l1scfv-tcrγ受体和抗cd19 scfv-tcrγ受体。
2、在一些方面，本公开提供了宿主细胞，所述宿主细胞包括用于表达新颖经工程化的tcr亚基受体的核酸构建体，如编码具有与源自tcrγ链的序列连接的scfv的经工程化的多肽的核酸分子。还包括宿主细胞，所述宿主细胞包括编码scfv-tcrγ多肽的核酸构建体。所述宿主细胞可以是例如t细胞，并且在各个实施方式中，所述宿主细胞是不表达αβt细胞受体(tcrαβ)的t细胞。在各个实施方式中，所述不表达tcrαβ受体的t细胞可以在不存在tcrδ链或基于tcrδ链的经工程化的受体多肽的表达的情况下表达经工程化的scfv-tcrγ多肽。如实施例中所证明的，表达单个tcr多肽(例如，包含作为靶向结构域的细胞外scfv的经工程化的scfv-tcrγ多肽以及源自tcrγ链的跨膜结构域序列和细胞内结构域序列)的经工程化的t细胞令人惊讶地能够在靶细胞上扩增，表现出靶特异性激活，并且在体外和体内杀伤靶肿瘤细胞。
3、例如，本文提供了经工程化的tcrγδ和经工程化的tcrγ和tcrδ亚基。在本文所公开的任何实施方式中，所述宿主细胞、方法和核酸分子可以进一步包括以下特征，除非其显然相互排斥，否则所述特征可以以任何组合彼此组合：
4、本文所提供的实施方式涵盖以下：
5、第一实施方式是一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体tcrγ亚基(scfv-tcrγ)，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：
6、与靶抗原结合的scfv；以及(1)与seq id no:17具有至少95％同一性的组合的tcrγ连接肽、tcrγ跨膜结构域和tcrγ细胞内结构域序列；或(2)与seq id no:9具有至少95％同一性的tcrγ连接肽，
7、与seq id no:10具有至少95％同一性的tcrγ跨膜结构域，以及
8、与seq id no:11具有至少95％同一性的tcrγ细胞内结构域；其中所述宿主细胞或宿主细胞群体不包括编码tcrδ(tcr delta)亚基的外源核酸序列或经工程化的多肽，所述经工程化的多肽包括与tcrδ亚基的连接肽(例如，seq id no:14)具有至少95％同一性的氨基酸序列和/或包括与tcrδ亚基的连接肽(例如，seq id no:15)具有至少95％同一性的氨基酸序列。在各个实施方式中，宿主细胞不表达天然tcrδ亚基并且不表达经工程化的tcrδ亚基，即具有tcrδ亚基的连接肽或跨膜结构域中的一者或两者、或与tcrδ连接肽(例如，seq id no:14)或tcrδ跨膜结构域(例如，seq id no:15)中的一者或两者具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
9、在包括包含编码scfv-tcrγ多肽的构建体的一种或多种细胞的上文实施方式或下文所公开的实施方式中的任何实本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体TCRγ亚基(scFv-TCRγ)，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：
2.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含所述TCRδ亚基的跨膜结构域或与所述TCRδ亚基的跨膜结构域具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
3.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含所述TCRδ亚基的连接肽或与所述TCRδ亚基的连接肽具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞不表达经工程化或未经工程化的TCRδ亚基。
5.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：与靶抗原结合的scFv；以及包括与SEQ ID NO:17具有至少95％同一性的氨基酸序列的组合的TCR
6.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：与靶抗原结合的scFv；以及与SEQ ID NO:9具有至少95％同一性的TCRγ连接肽、与SEQ ID NO:10具有至少95％同一性的TCRγ跨膜结构域以及与SEQ ID NO:11具有至少95％同一性的TCRγ细胞内结构域。
7.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：
8.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：
9.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv-TCRγ亚基从N末端至C末端包含：
10.根据权利要求1至9中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中经编码的scFv-TCRγ亚基进一步包含位于所述scFv-TCRγ亚基的N末端处的信号肽。
11.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是肿瘤相关抗原或免疫检查点蛋白。
12.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是肿瘤相关抗原。
13.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是PD-L1、B7H3、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD38、CD123、Claudin 18.2、EGFRVIII、GPC3、间皮素、MUC1或PSMA。
14.根据权利要求13所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是PD-L1。
15.一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体TCRγ亚基(scFv-TCRγ)，其中所述scFv-TCRγ亚基包含与SEQ ID NO:25具有至少95％同一性的组合的scFv、TCRγ连接肽、TCRγ跨膜结构域和TCRγ细胞内结构域序列，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含TCRδ亚基的跨膜结构域或与其具有至少95％同一性的序列或TCRδ亚基的连接肽区或与其具有至少95％同一性的序列的多肽。
16.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含包括SEQ ID NO:46的重链互补决定区(HCDR1)、包括SEQ ID NO:47的HCDR2和包括SEQ ID NO:48的HCDR3，所述轻链可变区包含包括SEQ ID NO:49的轻链互补决定区(LCDR1)、包括SEQ ID NO:50的LCDR2和包括SEQ ID NO:51的LCDR3。
17.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性，所述轻链可变区与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性，任选地其中所述重链可变区包括SEQ ID NO:1的序列，并且所述轻链可变区包括SEQ ID NO:2的序列。
18.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scFv包括与SEQ IDNO:4具有至少95％同一性的氨基酸序列，任选地其中所述scFv包括SEQ ID NO:4的序列。
19.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体tcrγ亚基(scfv-tcrγ)，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：
2.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含所述tcrδ亚基的跨膜结构域或与所述tcrδ亚基的跨膜结构域具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
3.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含所述tcrδ亚基的连接肽或与所述tcrδ亚基的连接肽具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞不表达经工程化或未经工程化的tcrδ亚基。
5.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：与靶抗原结合的scfv；以及包括与seq id no:17具有至少95％同一性的氨基酸序列的组合的tcrγ连接肽、tcrγ跨膜结构域和tcrγ细胞内结构域序列。
6.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：与靶抗原结合的scfv；以及与seq id no:9具有至少95％同一性的tcrγ连接肽、与seq id no:10具有至少95％同一性的tcrγ跨膜结构域以及与seq id no:11具有至少95％同一性的tcrγ细胞内结构域。
7.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：
8.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：
9.根据权利要求6所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv-tcrγ亚基从n末端至c末端包含：
10.根据权利要求1至9中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中经编码的scfv-tcrγ亚基进一步包含位于所述scfv-tcrγ亚基的n末端处的信号肽。
11.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是肿瘤相关抗原或免疫检查点蛋白。
12.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是肿瘤相关抗原。
13.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是pd-l1、b7h3、bcma、cd19、cd20、cd22、cd38、cd123、claudin 18.2、egfrviii、gpc3、间皮素、muc1或psma。
14.根据权利要求13所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是pd-l1。
15.一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体tcrγ亚基(scfv-tcrγ)，其中所述scfv-tcrγ亚基包含与seq id no:25具有至少95％同一性的组合的scfv、tcrγ连接肽、tcrγ跨膜结构域和tcrγ细胞内结构域序列，其中所述宿主细胞或所述宿主细胞群体不包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码包含tcrδ亚基的跨膜结构域或与其具有至少95％同一性的序列或tcrδ亚基的连接肽区或与其具有至少95％同一性的序列的多肽。
16.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含包括seq id no:46的重链互补决定区(hcdr1)、包括seq id no:47的hcdr2和包括seq id no:48的hcdr3，所述轻链可变区包含包括seq id no:49的轻链互补决定区(lcdr1)、包括seq id no:50的lcdr2和包括seq id no:51的lcdr3。
17.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与seq id no:1具有至少95％同一性，所述轻链可变区与seq id no:2具有至少95％同一性，任选地其中所述重链可变区包括seq id no:1的序列，并且所述轻链可变区包括seq id no:2的序列。
18.根据权利要求15所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv包括与seq idno:4具有至少95％同一性的氨基酸序列，任选地其中所述scfv包括seq id no:4的序列。
19.根据权利要求1所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述靶抗原是cd19。
20.一种宿主细胞或宿主细胞群体，其包括外源核酸序列，所述外源核酸序列编码嵌合单链抗体tcrγ亚基(scfv-tcrγ)，其中所述scfv-tcrγ亚基包含与seq id no:62具有至少95％同一性的组合的scfv、tcrγ连接肽、tcrγ跨膜结构域和tcrγ细胞内结构域序列。
21.根据权利要求20所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与seq id no:58具有至少95％同一性，所述轻链可变区与seq id no:59具有至少95％同一性，任选地其中所述重链可变区包括seq id no:58的序列，并且所述轻链可变区包括seq id no:59的序列。
22.根据权利要求20所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述scfv包括与seq idno:60具有至少95％同一性的氨基酸序列，任选地其中所述scfv包括seq id no:60的序列。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述外源核酸序列插入到tcrα或tcrβ基因中，其中所述tcrα或tcrβ亚基基因被失活。
24.根据权利要求23所述的宿主细胞群体，其中至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％的表达所述嵌合scfv-tcrγ的所述宿主细胞群体不表达αβt细胞受体(tcrαβ)。
25.根据权利要求23所述的宿主细胞群体，其中至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％的所述宿主细胞群体表达所述嵌合scfv-tcrγ。
26.根据权利要求1至24中任一项所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞包括t淋巴细胞、自然杀伤(nk)细胞、巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、b淋巴细胞或单核细胞。
27.根据权利要求25所述的宿主细胞或宿主细胞群体，其中所述宿主细胞包括t淋巴...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈润强，林常有，袁晓梅，裴宏，陈钊，徐基清，季红俊，
申请(专利权)人：维硕公司，
类型：发明
国别省市：
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