【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物样本分析，尤其涉及一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法及应用。
技术介绍
1、质谱(mass spectrometry,ms)技术作为一种高灵敏度、高特异性的分析工具，广泛应用于生物样本中蛋白质、多肽等生物大分子的检测。特别是在生物医学研究中，质谱被用于分析脑组织和血浆样本，以揭示疾病的分子机制、标志物筛选和药物代谢研究。
2、然而，样本中目标化合物(比如外源多肽)通常与大分子蛋白质混合存在，质谱分析对样本的纯度和前处理方法提出了较高的要求，前处理方法的选择和优化显得尤为重要，而实验动物的脑组织和血浆具有其特有的复杂性和特殊性，因其复杂的组成和高含量的蛋白质，通常需要经过一系列的预处理步骤以去除干扰物质，确保目标多肽的有效检测。
3、尽管现有的预处理方法在一定程度上能够提高质谱分析的灵敏度和特异性，但仍存在一些问题和挑战。常见的预处理方法存在的问题包括：(1)蛋白质沉淀法的问题。选择性差：往往会同时沉淀掉部分目标多肽，导致多肽的回收率降低；重复性差：由于操作步骤较多，容易引入人为误差，导致结果的重复性差。
4、(2)超滤法的问题。堵塞问题：大分子蛋白质容易堵塞超滤膜，影响过滤效率和速度；分子量截留限的选择：选择不当的截留限会导致目标多肽的损失或大分子蛋白质的残留。
5、(3)固相萃取法的问题。吸附效率受限：固相萃取柱的吸附容量有限，容易饱和，特别是对于复杂样本；洗脱步骤复杂：洗脱步骤需要优化，操作不当会导致目标多肽的损失或杂质的引入。
6、上述
技术实现思路
1、为了解决上述
技术介绍
中所提到的技术问题，而提出的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法及应用，旨在提高分离效率和控制预处理平衡，为了实现这些目标，将通过结合和优化多种预处理技术、实验验证等方法，开发出适用于脑组织和血浆样本的高效预处理方案，为质谱分析提供可靠的样本前处理解决方案。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，包括以下步骤：
4、步骤一，实验动物经静脉或口服给药后，取出动物脑组织以及全血样本；
5、步骤二，通过震荡研磨仪裂解脑组织样本或分离血浆后加入还原剂；
6、步骤三，置于恒温加热器上做梯度加热处理，每个梯度加热段完成后离心吸取上清，留样沉淀和部分上清备测，其余上清继续加热，直至加热到最终温度梯度，提取终段上清经超滤处理后留样备测。
7、通过优化预处理方法，使外源多肽在预处理之后能够有效地与大分子蛋白质分离提高外源多肽与大分子蛋白质的分离效率，避免在质谱分析时由于大分子蛋白质的存在而导致的柱堵塞问题。在提高分离效率的同时，通过控制预处理平衡，避免过度处理导致目标多肽与大分子蛋白质同时被处理掉，从而确保目标多肽的回收率和检测灵敏度。
8、作为上述技术方案的进一步描述：
9、所述步骤三，置于恒温加热器上梯度加热处理，还包括：
10、从50℃开始，每10℃一个梯度，每个梯度持续10min，直到加热到最终温度梯度90℃。
11、作为上述技术方案的进一步描述：
12、所述步骤一，获取脑组织样本或者血浆，还包括：
13、对于脑组织样本，使用pbs和tcep裂解缓冲液在冰上匀浆脑皮质组织，并在4℃下离心提取总蛋白；
14、对于血浆，在4℃下离心全血样本后吸取上清即为血浆最终温度梯度为90℃。
15、作为上述技术方案的进一步描述：
16、所述对于脑组织样本，使用pbs和tcep裂解缓冲液在冰上匀浆脑皮质组织，并在4℃下离心提取总蛋白，还包括：
17、pbs和tcep裂解缓冲液的浓度为1～10mm。
18、作为上述技术方案的进一步描述：
19、所述还原剂包括但不限于β～疏基乙醇、二硫苏糖醇、三(2～羧乙基)膦。
20、作为上述技术方案的进一步描述：
21、所述经超滤处理后的终段上清样品应用于脑组织和血浆中生物大分子的质谱分析。
22、综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：通过梯度加热结合超滤处理后外源多肽主要保留在了上清之中，而大量高丰度的大分子蛋白被沉淀和过滤掉，从而可以应用于质谱检测等下游分析检测。本专利技术预处理方法可以快速且均匀地将样品转化为适合质谱分析的液态状态，可提高样品处理的速度和通量，减少预处理时间，能够显著将目标多肽与复杂大分子蛋白有效分离，降低在质谱检测中显著降低基质效应干扰，通过梯度加热结合超滤的方法相比目前常规预处理方法具有比较大的优势。
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1.一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述步骤三，置于恒温加热器上梯度加热处理，还包括：
3.根据权利要求1所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述步骤一，获取脑组织样本或者血浆，还包括：
4.根据权利要求3所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述对于脑组织样本，使用PBS和TCEP裂解缓冲液在冰上匀浆脑皮质组织，并在4℃下离心提取总蛋白，还包括：
5.根据权利要求1所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述还原剂包括但不限于β～疏基乙醇、二硫苏糖醇、三(2～羧乙基)膦。
6.根据权利要求1～5任一项所述的预处理方法处理获得的经超滤处理后的终段上清样品应用于脑组织和血浆中生物大分子的质谱分析。
【技术特征摘要】
1.一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述步骤三，置于恒温加热器上梯度加热处理，还包括：
3.根据权利要求1所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本的预处理方法，其特征在于，所述步骤一，获取脑组织样本或者血浆，还包括：
4.根据权利要求3所述的一种含有外源多肽脑组织与血浆样本...
【专利技术属性】
技术研发人员：刁磊，李锦雯，攸璞，李震，史海翔，李开诚，王海波，
申请(专利权)人：苏州瀛创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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