【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型构建及应用，尤其涉及一种转基因小鼠的构建方法及其应用。
技术介绍
1、衰老是罹患阿尔茨海默病(alzheimer’s disease，ad)和帕金森病(parkinson’sdisease，pd)等神经退行性疾病的主要危险因素。脑功能会随着衰老而逐渐下降，表现为学习能力、记忆能力、注意力、决策速度、感官知觉(视觉、听觉、触觉、嗅觉和味觉)以及运动协调性的衰退。随着年龄的增长，人多方面的认知能力都有所下降，包括执行能力、工作记忆(特别是任务转换)和情景记忆。随着年龄的增长，患神经退行性疾病的风险会越来越高，其中阿尔茨海默症(ad)和帕金森病(pd)最为常见。pd的临床表现包括运动症状如：运动迟缓、静止性震颤、肌肉强直以及非运动症状如快速眼动睡眠行为障碍、便秘、认知能力下降、抑郁、焦虑。目前，pd的具体病因仍不清楚，缺乏有效减缓或阻止帕金森病进展的治疗方法。因此，人类要想揭开pd发病的病因，彻底根治pd，首先要建立能模拟人体pd发病机制的动物模型，开展关于pd致病机制和治疗方法的相关研究迫在眉睫。
2、pd领域中依据病理学、发病机制、运动和非运动症状等方面特征分类，可供研究人员使用的动物模型众多，然而，对于一个旨在同时解决pd多个方面特征的研究人员而言，动物模型的选择变得尤为重要，有时需要同时选择2-3个动物模型开展相关研究。帕金森疾病的动物模型建立目前主要基于药理学、毒素、遗传和α-突触核蛋白的模型。pd的药理学模型是最早开发的模型，并在一定程度上促进了对症药物左旋多巴(l-dopa)的发现。利血
3、目前，pd遗传基因动物模型包括过表达基因模型、转基因模型、基因敲除以及基因突变模型等。随着pd几种家族性形式的发现，研究人员建立了通过基因突变模拟pd的动物模型。与家族性和散发性病例有明确联系的模型上：α-突触核蛋白(snca)，富含亮氨酸重复激酶(lrrk2)和葡糖脑苷脂酶(gba)。然而在这些转基因模型很少重现pd的完整特征,而且往往与人类的情况有很大的不同，且很少观察到黑质、纹状体等区域的神经损伤。
4、上述模型存在的不足之处极大地限制了其应用。本领域迫切需要开发更可靠的帕金森病动物模型。pd基因动物模型应该更好地模拟人类pd，具备如下基本特征：可检测到pd的运动缺陷，可反映随年龄发展出现的选择性和渐进性da能神经元损伤，有路易小体的形成，而且pd动物模型相应还应有较短的疾病病程周期，便于经济快速地进行病因病理机制研究及药物筛选，揭示pd中da能神经元死亡的分子机制和发现潜在的治疗靶点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了提供一种转基因的小鼠模型的新应用，使其可以应用于衰老、阿尔兹海默病及帕金森病相关基础研究和治疗药物的临床前筛选。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，所述g-r小鼠通过crispr靶向c57bl/6小鼠基因组11号染色体h11位点cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato序列信息的方法构建获得。
4、优选的，所述cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato的完整序列信息如seq idno：1所示。
5、优选的，所述g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型在筛选治疗帕金森的药物和其他干预手段研究中的应用。
6、优选的，所述g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型在筛选多巴胺能神经元内存活、改善帕金森病理学及行为学改变研究中的应用。
7、优选的，所述g-r小鼠构建方法如下：在zsgreen两侧埋设了loxp位点，然后将绿色荧光蛋白zsgreen与红色荧光蛋白tdtomato相结合，同时敲入到鼠源的h11基因位点。
8、优选的，所述g-r小鼠在示踪特异性cre表达位置中的应用。
9、本申请通过行为学、分子生物学和病理学的典型的pd样改变等具体验证实验，明确了g-r小鼠在帕金森病、阿尔兹海默病及衰老模型中的应用，为帕金森病、阿尔兹海默病的治疗及衰老的抑制提供新的研究策略，为进一步筛选治疗帕金森病、阿尔兹海默病的药物和其他干预手段研究提供研究模型；本申请中所采用的转基因小鼠模型可用于进一步筛选促进多巴胺能神经元内存活、改善帕金森病病理学及行为学改变的研究。也是该技术在帕金森病基础研究领域中的创新性应用，可为临床上筛选帕金森病新的治疗药物或干预手段提供实验依据，具有潜在临床应用价值。
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1.G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述G-R小鼠通过CRISPR靶向C57BL/6小鼠基因组11号染色体H11位点CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato序列信息的方法构建获得。
2.根据权利要求1所述的G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato的完整序列信息如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述的G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型在筛选治疗帕金森的药物和其他干预手段研究中的应用。
4.根据权利要求1所述的G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型在筛选多巴胺能神经元内存活、改善帕金森病理学及行为学改变研究中的应用。
5.根据权利要求1所述
6.根据权利要求1所述的G-R小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述G-R小鼠在示踪特异性Cre表达位置中的应用。
...【技术特征摘要】
1.g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述g-r小鼠通过crispr靶向c57bl/6小鼠基因组11号染色体h11位点cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato序列信息的方法构建获得。
2.根据权利要求1所述的g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato的完整序列信息如seq id no：1所示。
3.根据权利要求1所述的g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型、阿尔兹海默病小鼠模型及衰老模型中的应用，其特征在于：所述g-r小鼠作为转基因帕金森小鼠模型在筛选治疗帕金森的药物和其他干预手段...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛成斌，朱慧，穆黎，王颖，孙秋文，曹茂红，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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