【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种对含有哌柏西利或其药用盐组合物中有关物质的检测方法。
技术介绍
1、哌柏西利是一种高选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶cdk4和cdk6可逆性拮抗剂。通过抑制cdk4/6阻断细胞周期从g1期到s期的进程，从而抑制dna合成。临床前研究数据表明，哌柏西利可能具有肿瘤细胞减灭及抑制细胞生长作用，是新型乳腺癌药物。
2、2015年2月3日fda加速批准了辉瑞公司哌柏西利(palbociclib)上市，上市剂型为胶囊剂，规格为75mg、100mg和125mg。哌柏西利联合来曲唑作为内分泌治疗为基础的初始方案，治疗绝经期女性雌激素受体受体(er)-阳性，人表皮生长因子受体2(her2)-阴性的绝经后妇女晚期乳腺癌。哌柏西利的分子式为c24h29n7o2，化学名为：6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-[[5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基]氨基]-8h-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮，结构式如式(a)所示：
3、
4、该原料药在国内外尚无药典收录，杂质研究并不全面，本专利技术根据合成工艺中实际可能产生的重要的中间体的衍生杂质或副产物进行分析，包括工艺杂质和一些降解杂质，在稳定性期间可能由于保存不当会影响原料药质量，故有效分离并检测区分这些工艺杂质和降解杂质对原料药的质量控制显得尤为重要。共包括已知杂质10个：
5、
6、
7、杂质列表可见，哌柏西利的杂质较多，且结构类似，极性差异较小，给分离带来难度。此外，在满足哌柏西利与各杂质分离
8、采用常规的检测手段方法难以实现哌柏西利与杂质以及杂质与杂质之间的有效分离，严重影响哌柏西利及其制剂的质量控制。有原研制剂采用超高效液相色谱法进行分离，然而由于该色谱条件设备的局限性，方法验证与转移过程中并不通用。
9、杂质n(哌嗪开环杂质实际有检出，既是工艺又是降解杂质)是实际合成工艺中极易产生的工艺杂质，且氧化或光照条件下的易产生降解杂质，众多报道专利和文献中未对其进行研究，目前，没有文献报道能够将杂质n和活性成分有效分离的分析方法，另外杂质k和m是哌柏西利氧化降解的主要杂质，与工艺杂质能够同时有效分离也是该分析方法的技术难点。
10、现有报道的文献或专利中无论使用哪种无机(如磷酸及其缓冲盐)或有机酸(甲酸或乙酸及其缓冲盐)，或者是单一种类的高氯酸或三氟乙酸都无法实现主成分与杂质n、工艺杂质和降解杂质的有效分离。
11、目前没有一种方法能在将杂质n与活性成分分离的同时，将其他杂质也同时成功分离。
12、因此，开发一种新的哌柏西利中有关物质的检测方法是非常有必要的。
技术实现思路
1、针对以上技术现状，本专利技术提供一种哌柏西利中有关物质的检测方法，所述方法采用高效液相色谱法(hplc)，所述方法包括采用高效液相色谱法，其中高效液相色谱法中的流动相包括高氯酸与选自三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵中的一种或多种的组合，所述有关物质包括杂质n。
2、本专利技术流动相中采用高氯酸与选自三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵中的一种或多种的组合，可以有效地实现将杂质n与其他杂质选择性地分离。
3、本专利技术中，所述流动相中采用包括但不限于高氯酸与三氟乙酸的组合、高氯酸与磷酸的组合、高氯酸与甲酸的组合、高氯酸与乙酸或乙酸铵的组合；
4、本专利技术中，所述“多种”包括但不限于两种、三种或三种以上的组合。作为示例性的说明，本专利技术流动相包括但不限于：高氯酸与三氟乙酸和磷酸的组合；高氯酸与三氟乙酸和甲酸的组合；高氯酸与三氟乙酸和乙酸的组合；高氯酸与三氟乙酸和乙酸铵的组合；或
5、高氯酸与磷酸和甲酸的组合，高氯酸与磷酸和乙酸的组合，高氯酸与磷酸和乙酸铵的组合；或
6、高氯酸与三氟乙酸、磷酸和甲酸的组合；高氯酸与三氟乙酸、磷酸和乙酸的组合，高氯酸与三氟乙酸、磷酸和乙酸铵的组合。
7、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相优选包括高氯酸与三氟乙酸或磷酸的组合。
8、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相中高氯酸的体积浓度为0.013％～0.032％。
9、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相中三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵的体积浓度为0.018％～0.022％。
10、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相中还包括溶剂，所述溶剂选自水、乙腈或甲醇，或其两种或两种以上的组合。
11、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相包括流动相a和流动相b,其中所述流动相a为高氯酸和三氟乙酸的水溶液；所述流动相为酸和三氟乙酸的乙腈溶液。
12、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相a为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.015％浓度的高氯酸混合的水溶液。
13、本专利技术中，作为实施方案之一，所述流动相b为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.03％浓度的高氯酸混合的乙腈溶液。
14、本专利技术提供一种哌柏西利中有关物质的检测方中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱包括但不限于ymc pack pro c18色谱柱，规格为250mm×4.6mm×3μm。
15、本专利技术所述有哌柏西利中有关物质的检测方法中，其梯度洗脱条件如下：
16、
17、本专利技术中，作为实施方案之一，上述检测方法中，色谱柱的柱温为30～40℃，流动相流速为0.85～0.95ml/min，检测波长为258～262nm。
18、在本专利技术中，作为实施方案之一，上述检测方法中，色谱柱的柱温为36℃，流动相流速为0.9ml/min，检测波长为260nm。
19、在本专利技术中，作为实施方案之一，上述检测方法中，进样量为5～10μl，样品盘温度为0～8℃，运行时间为55～65min。
20、在本专利技术中，作为实施方案之一，上述检测方法中，进样量为5μl，样品盘温度为4℃，运行时间为60min。
21、包括以下步骤：
22、(1)配制稀释剂：取500ml 0.05％hclo4水溶液与500ml乙腈1:1混合配制成0.05％hclo4水溶液-乙腈(1:1)的稀释液；
23、(2)制备供试品溶液：取哌柏西利供试品适量，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制备成0.7mg/ml供试品溶液；
24、(3)制备对照品溶液：取哌柏西利对照品适量，精密称定，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制备成含哌柏西利0.7μg/ml的对照品溶液；
25、(4)量取400μl三氟乙酸和300μl高氯酸于2000ml水中，充分混匀，超声配制成0.02％tfa和0.015％hclo4的水溶液，为流动相a；量取200μl三氟乙酸和300μl高氯酸于1000ml乙腈中，充分混匀，超声，配制成0.02％tfa和0.03％hclo本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.哌柏西利中有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法，其中高效液相色谱法中的流动相包括高氯酸与选自三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵中的一种或多种的组合，所述有关物质包括杂质N。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相包括高氯酸与三氟乙酸或磷酸的组合。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述流动相中高氯酸的体积浓度为0.013％～0.032％。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述流动相中三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵的体积浓度为0.018％～0.022％。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相中还包括溶剂，所述溶剂选自水、乙腈或甲醇，或其两种或两种以上的组合。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相包括流动相A和流动相B,其中所述流动相A为高氯酸和三氟乙酸的水溶液；所述流动相B为高氯酸和三氟乙酸的乙腈溶液。
7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于，所述流动相A为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.015％浓度的高氯
8.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于，所述流动相B为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.03％浓度的高氯酸混合的乙腈溶液。
9.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用YMC Pack ProC18色谱柱，规格为250mm×4.6mm×3μm。
10.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法包括梯度洗脱条件如下：
11.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，色谱柱的柱温为30～40℃，流动相流速为0.85～0.95ml/min，检测波长为258～262nm。
12.根据权利要求11所述检测方法，其特征在于，色谱柱的柱温为36℃，流动相流速为0.9ml/min，检测波长为260nm。
13.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，进样量为5～10μl，样品盘温度为0～8℃，运行时间为55～65min。
14.根据权利要求13所述检测方法，其特征在于，进样量为5μl，样品盘温度为4℃，运行时间为60min。
15.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法包括以下步骤：
16.根据上述权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质N与选自杂质A,B,D,E,G,J,K,L,M中的一种或两种或两种以上的组合。
17.根据上述权利要求16所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质N,A,B,D,E,G,J,K,L和M。
18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述哌柏西利包括哌柏西利原料或含有哌柏西利的制剂，其中所述哌柏西利原料包括哌柏西利及其盐，优选为盐酸盐、羟乙基磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐，所述含有哌柏西利的制剂包括含有哌柏西利及其盐的固体制剂，优选为胶囊剂、片剂、颗粒剂以及固体分散剂。
...【技术特征摘要】
1.哌柏西利中有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法，其中高效液相色谱法中的流动相包括高氯酸与选自三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵中的一种或多种的组合，所述有关物质包括杂质n。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相包括高氯酸与三氟乙酸或磷酸的组合。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述流动相中高氯酸的体积浓度为0.013％～0.032％。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述流动相中三氟乙酸、磷酸、甲酸、乙酸或乙酸铵的体积浓度为0.018％～0.022％。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相中还包括溶剂，所述溶剂选自水、乙腈或甲醇，或其两种或两种以上的组合。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相包括流动相a和流动相b,其中所述流动相a为高氯酸和三氟乙酸的水溶液；所述流动相b为高氯酸和三氟乙酸的乙腈溶液。
7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于，所述流动相a为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.015％浓度的高氯酸混合的水溶液。
8.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于，所述流动相b为：0.02％浓度的三氟乙酸和0.03％浓度的高氯酸混合的乙腈溶液。
9.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用ymc pack proc18色谱柱，规格为250mm×4.6mm×3μm。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：孙宇航，马淑贤，彭丽娇，张斌，秦建政，李文明，
申请(专利权)人：北京泰德制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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