【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，特别涉及一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，恶性肿瘤发病率和死亡率呈逐渐上升趋势，严重威胁人类健康。其中女性乳腺癌更是取代肺癌成为了全球发病率第一的恶性肿瘤。
2、肿瘤微环境(tumor microenvironment，tme)是指肿瘤细胞所处的内部环境，由肿瘤细胞、免疫细胞及细胞外基质组成，是促进肿瘤发生、发展的“土壤”。肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages，tams)是实体肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞，在某些实体肿瘤中可以达到50％。tams主要包括经典活化的m1型巨噬细胞和替代活化的m2型巨噬细胞。病理学研究显示，肿瘤组织内m2型tmas的浸润密度与患者的预后显著相关，m2型tams浸润密度高的患者生存率降低，且发生淋巴转移的几率明显增加。
3、肿瘤免疫治疗能够通过激活和强化患者自身的免疫系统，从而达到控制和清除肿瘤的目的。现阶段，肿瘤免疫治疗的手段主要包括免疫检查点抑制剂、嵌合抗原受体t细胞免疫疗法以及肿瘤疫苗等。虽然部分患者能够通过免疫治疗延长一定的生存期，但是临床数据显示，免疫治疗的应答率较低，受益患者仍然十分有限。
4、声动力治疗是一种超声触发的，能够将超声能量聚焦于特定区域，利用超声生物效应治疗肿瘤的无创性治疗方法。尽管声动力治疗在抗肿瘤研究方面取得了显著成果，但在实现更进一步的临床应用前，仍面临着一定的挑战。一方面肿瘤原本的缺氧微环境会限制依赖氧气的声动力治
5、虽然肿瘤治疗方法多种多样且取得了一定的治疗效果，但是由于肿瘤进展中复杂多变的肿瘤微环境，单一模式下的肿瘤治疗很难取得满意的效果。因此如何将声动力治疗和肿瘤免疫治疗相结合，以达到改善免疫抑制微环境，激活机体免疫效应，维持肿瘤-免疫循环，高效的抑制肿瘤生长及转移的目的，是目前治疗乳腺癌的重要研究方向。
技术实现思路
1、为克服现有技术中单一的乳腺癌治疗方法效果不佳的缺点，本专利技术提出一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒及其制备方法和应用，旨在构建一种新型脂质体纳米分子探针，通过甘露糖修饰来靶向m2型巨噬细胞，由低强度聚焦超声使纳米粒内核的pfp发生液气相变，同时激发声敏剂hmme，利用液气相变空化效应产生的机械损伤以及声动力产生ros共同清除m2型巨噬细胞，促进m2表型向m1表型转化，减少肿瘤组织内m2型tams浸润，改善肿瘤免疫抑制微环境，其详细技术方案如下：
2、一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，包括带有双分子层和内核的脂质体、包裹于所述脂质体的双分子层之间的血卟啉单甲醚、包裹于所述脂质体的内核中的有机液气相变介质氟碳化合物；所述氟碳化合物为液体氟碳，包括全氟戊烷和全氟己烷中的至少一种。
3、进一步地，所述相变纳米粒是由甘露糖残基连接到dspe-peg2k形成的dspe-peg2k-mannose。
4、进一步地，所述相变纳米粒的粒径为230.47nm—239.47nm，zeta电位为-20.58—-19.58mv。
5、进一步地，所述相变纳米粒的血卟啉单甲醚包封率为89.5％，血卟啉单甲醚载药量为8.13％。
6、一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒的制备方法，用于制备上述的lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，包括以下步骤：s1,将甘露糖残基连接到dspe-peg2k形成dspe-peg2k-mannose，并分析提纯,获得提纯后的dspe-peg2k-mannose；s2，分别称取5mg二棕榈酰磷脂酰胆碱，3mg dspe-peg2k-mannose，2mg胆固醇，2mg血卟啉单甲醚后放入圆底烧瓶；向s2中的圆底烧瓶内加入10ml三氯甲烷，并通过摇晃和超声清洗机使得圆底烧瓶内的物质充分溶解；s3，使用旋蒸仪对圆底烧瓶进行加热，使得圆底烧瓶内形成均匀的薄膜；然后通过移液枪向圆底烧瓶内加入5ml pbs或双蒸水，形成薄膜溶液，利用超声清洗机将薄膜洗脱，并将薄膜溶液移至15ml离心管内；s4，将带有薄膜溶液的离心管放入到冰水中进行冰浴，用200μl的移液枪向管内加入200μl的全氟戊烷，并用用声振仪进行声振；s5,将s4中的溶液用低温离心机进行离心洗涤两次，每次离心后去除上清、留取沉淀，然后用5ml pbs或双蒸水重悬沉淀并放置4℃冰箱低温保存；s6,在s5获得的溶液中加入s1中的dspe-peg2k-mannose获得lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒。
7、一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒在制备抗肿瘤系统中的应用，包括上述的lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒和低强度聚焦超声设备；所述低强度聚焦超声设备对相变纳米粒进行低强度聚焦超声辐照，以使得所述相变纳米粒内核的液体氟碳发生液气相变，并使得血卟啉单甲醚吸收超声能量后产生大量单线态活性氧，利用液气相变空化效应产生的机械损伤和活性氧共同消除m2型巨噬细胞。
8、进一步地，还包括pd-l1抗体；建立balb/c小鼠单侧原位乳腺癌模型；对荷瘤小鼠每间隔3天注射一次相变纳米粒，并于24小时后给予lifu辐照，并在第4、8、12天注射pd-l1抗体。
9、本专利技术的有益效果是：构建了lifu响应型相变纳米粒，它能够在超声和光声双模态成像引导下，通过液气相变空化效应以及声动力效应，靶向清除肿瘤组织内的m2型巨噬细胞，促进tams从m2表型向m1表型转化，改善免疫抑制微环境，为pd-l1免疫治疗充分发挥效果提供合适的“土壤”，以此达到抑制肿瘤生长和转移的目的，为乳腺癌的可视化治疗提供一种新的治疗策略。
10、同时根据实验数据可知，mph@lip有良好的相变性能，在体内外具有明显增强超声成像、光声成像的效果。在体外能够杀伤m2型巨噬细胞，在体内联合lifu后能够明显增强乳腺癌pd-l1免疫治疗的效果，从而有效地抑制乳腺癌肿瘤生长及转移。
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1.一种LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，包括带有双分子层和内核的脂质体、包裹于所述脂质体的双分子层之间的血卟啉单甲醚、包裹于所述脂质体的内核中的有机液气相变介质氟碳化合物；所述氟碳化合物为液体氟碳，包括全氟戊烷和全氟己烷中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒是由甘露糖残基连接到DSPE-PEG2K形成的DSPE-PEG2K-Mannose。
3.根据权利要求1所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒的粒径为230.47nm—239.47nm，Zeta电位为-20.58—-19.58mV。
4.根据权利要求1所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒的血卟啉单甲醚包封率为89.5％，血卟啉单甲醚载药量为8.13％。
5.一种LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒的制备方法，用于制备权利要求1—4任意一项所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特
6.一种LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒在制备抗肿瘤系统中的应用，其特征在于，包括权利要求1—4任意一项所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒和低强度聚焦超声设备；所述低强度聚焦超声设备对相变纳米粒进行低强度聚焦超声辐照，以使得所述相变纳米粒内核的液体氟碳发生液气相变，并使得血卟啉单甲醚吸收超声能量后产生大量单线态活性氧，利用液气相变空化效应产生的机械损伤和活性氧共同消除M2型巨噬细胞。
7.根据权利要求6所述的LIFU响应型M2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒在制备抗肿瘤系统中的应用，其特征在于，还包括PD-L1抗体；建立Balb/c小鼠单侧原位乳腺癌模型；对荷瘤小鼠每间隔3天注射一次相变纳米粒，并于24小时后给予LIFU辐照，并在第4、8、12天注射PD-L1抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，包括带有双分子层和内核的脂质体、包裹于所述脂质体的双分子层之间的血卟啉单甲醚、包裹于所述脂质体的内核中的有机液气相变介质氟碳化合物；所述氟碳化合物为液体氟碳，包括全氟戊烷和全氟己烷中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒是由甘露糖残基连接到dspe-peg2k形成的dspe-peg2k-mannose。
3.根据权利要求1所述的lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒的粒径为230.47nm—239.47nm，zeta电位为-20.58—-19.58mv。
4.根据权利要求1所述的lifu响应型m2型巨噬细胞靶向的相变纳米粒，其特征在于，所述相变纳米粒的血卟啉单甲醚包封率为89.5％，血卟啉单甲醚载药量为8.13％。
5.一种lifu响应型m2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张琴，任正举，张艳萍，杨华，秦侨习，杨荟平，
申请(专利权)人：重庆市中医院，
类型：发明
国别省市：
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