【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药。具体涉及新型的人呼吸道合胞病毒rsv a mrna疫苗的设计及应用，属于免疫药物。
技术介绍
1、基于核酸等生物大分子的细胞内递送技术，近年来得到了创新药研发领域的广泛关注, 其中，基于mrna技术的新型疫苗在紧急需求之下，研发、临床试验及上市批准被迅速推进，向世界第一次展现了mrna技术平台的临床有效性，安全性和商业价值。
2、与传统的直接以蛋白质或多肽作为药物活性成分的药物相比，mrna技术有诸多优势：1) 更高的生物活性与安全性：mrna技术的药物，其蛋白表达、相关结构的糖基化、末端修饰、去甲基化等复杂的蛋白修饰过程皆在人体自身细胞内按照天然途径完成。无论是从合成原料的分子结构、合成环境、还是合成产物上考虑，都与人体高度同源。因此，相比于传统蛋白质制剂体外细菌体系或细胞体系制备，基于mrna序列的内源性蛋白质产物具有更准确的作用特异性、更高的亲和力、更好的安全性、和与之伴随的更值得期待的生物活性。2）更长的生物半衰期：现有实验结果证实，包括抗原或抗体在内，通过mrna来生成的蛋白质，尤其是采用自复制核酸或环状核酸，可以维持较长时间的有效血液浓度，从而降低用药频率和用药量，降低药物副作用，提高患者顺应性。3）更多的应用场景：通过基于递送技术的剂型和多样化的给药方式的开发，mrna制剂可以接触到多种临床作用靶点，提高药物活性成分的局部区域浓度和药效，在丰富了新药开发的范围的同时，也丰富临床上患者治疗方式的选择。4）快速响应：mrna疫苗在产品开发流程中应用到的技术多为基本的分子生物学方法，技
3、人类呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus, hrsv）是副粘病毒科肺病毒属的一种有包膜的不分节段的单链负链rna病毒，是一种长期全球高度流行的，传染性很强的呼吸道病毒。其传染性和致病性仅次于流感，导致婴儿患细支气管炎、下呼吸道感染，成人患普通感冒，以及老年人和免疫功能低下者患上更严重的呼吸道疾病，例如肺炎。
4、rsv 基因组总长约为 15,000 个核苷酸，由 10 个基因组成，编码 11 种蛋白质。病毒颗粒的内部是由核蛋白（n）、四聚体磷蛋白（p）和大聚合酶蛋白（l）结合病毒rna组成，它被基质蛋白（m）包围，并被包裹在脂质双层中，双层中分布着融合蛋白f, 糖蛋白g和小疏水蛋白sh。根据 f 和 g 蛋白对单克隆抗体的反应情况，rsv 病毒分为两种抗原亚型：a 型和 b 型，这二种亚型在当地流行病中同时或交替传播。由于f蛋白在 rsv 进入宿主细胞过程中发挥着重要作用，同时具有跨毒株型保守性，蛋白稳定性，和较少的糖基修饰性，它最终成为疫苗的热门抗原。
5、f蛋白序列在毒株之间高度保守，并以二种构象形式存在。融合前是 pre-f 状态，蛋白质以三聚体形式存在，并包含主要抗原位点 ø。在与宿主细胞表面的靶标结合后，为拉近病毒膜和细胞膜的距离，pre-f 会发生构象变化，位点ø 会因包被到内部而丢失，转变为较稳定的融合后post-f构象。在细胞中，最初f蛋白表达为单一多肽前体f0，在弗林蛋白酶酶切下，形成f1、f2 和 pep27 多肽。其中f1和f2 通过两个二硫键连接，形成成熟的f蛋白，并以三聚体的结构锚定在病毒膜中。由于 rsv f 蛋白在 rsv 进入细胞过程中发挥着重要作用，因此它是中和抗体的目标，也是疫苗开发的主体。然而，与其他 rsv 抗原一样，先前基于 rsv f 蛋白的疫苗开发努力已被证明并不成功。
6、自1957年rsv首次在人群中被发现，对rsv疫苗的尝试几十年来从未间断过。然而，由于技术的滞后，从灭活疫苗造成更为严重的感染，到后来的蛋白疫苗，病毒载体疫苗，研究者一直在效价，g蛋白，f蛋白，还是n蛋白作为抗原，主要是诱导t细胞的细胞免疫还是b细胞的体液免疫，等诸多问题上纠结，虽然积累了大量的经验，但始终没有获得成功的rsv疫苗。
7、近年来，随着结构分子生物学的介入，人们对疫苗的工作原理有了突破性的认识，使得最近二款rsv 蛋白疫苗（gsk和pfizer）得以问世。我们的设计，正是结合了最新的抗原蛋白结构生物学发现和对病毒流行病学和毒株的深入的了解，设计和合成了我们独有的rsv a mrna/lnp疫苗系列。该疫苗系列具有显著的诱导抗rsv抗体和提供rsv a 和 b亚型交叉保护的效应。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有技术中rsv疫苗不足或效果不理想的问题，提供一种rsv mrna/lnp疫苗。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术公开了一种重组人呼吸道合胞病毒mrna，所述mrna的序列如seq id no.8或seq id no.20所示。
4、本专利技术公开了一个重组人呼吸道合胞病毒mrna疫苗系列，所述与疫苗rsv a-f相对应的dna编码序列，mrna序列和蛋白序列（见表1）。
5、本专利技术公开了表达载体，所述表达载体所述的dna分子（图10）。
6、优选的，所述表达载体的序列如图11（seq id no.28）所示。
7、本专利技术公开了细胞，所述细胞包含所述的表达载体。
8、本专利技术公开了重组蛋白，所述重组蛋白由所述的mrna翻译获得。
9、本专利技术公开了一种重组人合胞病毒mrna，所述mrna的序列如seq id no.5或seqid no.2所示。
10、优选的，所述mrna的序列如seq id no.8或seq id no.11所示。
11、优选的，所述mrna的序列如seq id no.14或seq id no.17所示。
12、优选的，所述mrna的序列如seq id no.20或seq id no.23所示。
13、优选的，所述mrna的序列如seq id no.26所示。
14、优选的，所述重组蛋白的序列如seq id no.3或seq id no.6所示。
15、优选的，所述重组蛋白的序列如seq id no.9或seq id no.12所示。
16、优选的，所述重组蛋白的序列如seq id no.15或seq id no.18所示。
17、优选的，所述重组蛋白的序列如seq id no.21或seqid no.24所示。
18、优选的，所述重组蛋白的序列如seq id no.27所示。
19、本专利技术公开了核苷酸，所述核苷酸编码所述的重组蛋白。
20、本专利技术公开了质粒，所述质粒包含所述的核苷酸。
21、本专利技术公开了mrna/lnp复合物，包括所述的mrna分子和脂质纳米颗粒。
22、本专利技术公开了mrn本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组人呼吸道合胞病毒mRNA，其特征在于，所述mRNA的序列如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.20所示。
2.表达载体，其特征在于，所述表达载体表达权利要求1所述的mRNA分子。
3.细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求2所述的表达载体。
4.重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白由权利要求1所述的mRNA翻译获得。
5.核苷酸，其特征在于，所述核苷酸编码权利要求4所述的重组蛋白。
6.质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求5所述的核苷酸。
7.mRNA/LNP复合物，其特征在于，包括权利要求1所述的mRNA分子和脂质纳米颗粒。
8.mRNA/LNP复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.mRNA/LNP复合物，其特征在于，所述复合物按照权利要求8所述的方法制备得到。
10.疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括权利要求1所述的mRNA和/或权利要求2所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的核苷酸和/或权利要求6所述
11.权利要求1所述的mRNA和/或权利要求2所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的核苷酸和/或权利要求6所述的质粒和/或权利要求7所述的mRNA/LNP复合物在制备人呼吸道合胞病毒疫苗组合物中的应用。
12.权利要求1所述的mRNA和/或权利要求2所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的核苷酸和/或权利要求6所述的质粒和/或权利要求7所述的mRNA/LNP复合物在制备治疗呼吸道合胞病毒感染导致的疾病的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述疾病为呼吸道疾病，所述呼吸道疾病为肺炎或细支气管炎或呼吸道感染。
14.权利要求1所述的mRNA和/或权利要求2所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的核苷酸和/或权利要求6所述的质粒和/或权利要求7所述的mRNA/LNP复合物在制备治疗患有合胞病毒感染导致的疾病的患者的药物中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述疾病为呼吸道疾病，所述呼吸道疾病为肺炎或细支气管炎或呼吸道感染。
...【技术特征摘要】
1.一种重组人呼吸道合胞病毒mrna，其特征在于，所述mrna的序列如seq id no.8或seq id no.20所示。
2.表达载体，其特征在于，所述表达载体表达权利要求1所述的mrna分子。
3.细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求2所述的表达载体。
4.重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白由权利要求1所述的mrna翻译获得。
5.核苷酸，其特征在于，所述核苷酸编码权利要求4所述的重组蛋白。
6.质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求5所述的核苷酸。
7.mrna/lnp复合物，其特征在于，包括权利要求1所述的mrna分子和脂质纳米颗粒。
8.mrna/lnp复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.mrna/lnp复合物，其特征在于，所述复合物按照权利要求8所述的方法制备得到。
10.疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括权利要求1所述的mrna和/或权利要求2所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的核苷酸和/或权利要求6所述的质粒和/或权利要求7所述的mrna/...
【专利技术属性】
技术研发人员：湛小燕，陆航，
申请(专利权)人：嘉译生物医药杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。