【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品，具体涉及一种鹅星状病毒疫苗株及其应用。
技术介绍
1、鹅星状病毒是一种无囊膜、单股正链rna病毒，基因组长约7kb，有3个开放阅读框(open reading frame，orf)，分别为orf1a、orf1b和orf2。orf1a编码非结构蛋白(non-structural protein,nsp)，orf1b编码病毒rna依赖的rna聚合酶(rnadependentrnapolymerase,rdrp)，orf2编码病毒衣壳蛋白(capsid，cap)。近年来，鹅星状病毒传播广泛，使得鹅痛风成为了危害养鹅业的重要传染病之一。病毒主要感染3-15日龄的雏鹅，感染率可达80％以上，死亡率可高达30％-50％，主要表现为跛行、瘫痪、关节和肾脏等器官尿酸盐沉积，该病严重危害养鹅殖发展。但是市场上尚无一款防治鹅星状病毒的产品，也没有能够完全有效预防鹅星状病毒感染的方法，因此市场迫切需求一款预防鹅星状病毒的疫苗产品。
2、疫苗免疫是预防动物疫病的关键。目前鹅星状病毒的病毒增殖技术不成熟，是阻碍疫苗研发的重大技术难题。有研究表明，鹅星状病毒可以在spf鹅胚中增殖，收集含有病毒的鹅胚和尿囊液以制备疫苗，但是spf鹅胚难以获得，价格高，将增加生产疫苗的成本。也有研究用鹅胚肾细胞培养鹅星状病毒后，收集含有病毒的细胞液以制备疫苗。但是鹅胚肾细胞需要将spf鹅胚培养至22日龄后，取肾脏并制备成鹅胚肾细胞，且鹅胚肾细胞是原代细胞，每次培养病毒需要制备大量的细胞，制作工艺复杂、耗时较长、成本较高，不适合做为生产疫
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种鹅星状病毒疫苗株及其应用，该疫苗株提高了病毒产量，降低了病毒毒力，具有良好的免疫效果和抗体持续期，做为疫苗候选株便于在市场的推广和销售。
2、为此，本专利技术提供了以下技术方案，
3、第一方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种鹅星状病毒疫苗株，所述鹅星状病毒疫苗株的保藏编号为cctcc no：v202445，于2024年4月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，分类命名为鹅星状病毒gastv/sd/36-95p，保存状态为存活。
4、在本专利技术中，本专利技术选取养殖场中致病力强的鹅星状病毒gastv/sd/36(简称sd/36)，接种到鸡肝癌(lmh)细胞连续传代和纯化培养至95代，记作sd/36-95p。该疫苗株提高了病毒产量，降低了病毒毒力，具有良好的免疫效果和抗体持续期，做为疫苗候选株便于在市场的推广和销售。
5、第二方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种鹅星状病毒疫苗株的制备方法，包括以下步骤：
6、在雏鹅死亡率为50％上的养鹅厂中分离到鹅星状病毒gastv/sd/36，在鸡肝癌(lmh)细胞上连续传代和纯化培养至95代，分离，得到上述鹅星状病毒疫苗株。
7、优选的，所述鹅星状病毒在鸡肝癌病毒传代适应后，病毒滴度达到107.5tcid50/0.1ml。
8、第三方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种鹅星状病毒疫苗，采用上述鹅星状病毒疫苗株制备得到。优选的，所述疫苗为灭活疫苗。
9、第四方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种上述鹅星状病毒疫苗在产蛋鹅和/或雏鹅在防治鹅星状病毒中的应用。
10、优选的，所述鹅星状病毒疫苗对雏鹅的免疫剂量为0.1ml/只。将鹅星状病毒疫苗株制备为灭活苗并免疫产蛋鹅和雏鹅，疫苗能使产蛋鹅在免疫后第14天产生抗体，抗体水平在13log2以上，抗体持续期为60天以上；产蛋鹅的鹅胚中抗体水平最高12log2；7日龄雏鹅在免疫7天即可产生抗体，14天抗体水平在7.6log2以上，21天抗体达到10.25log2。
11、第五方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种鹅星状病毒抗体，采用上述鹅星状病毒疫苗株制备得到。
12、第六方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种上述鹅星状病毒抗体在雏鹅在预防鹅星状病毒中的应用。
13、第七方面，本专利技术在可选的实施方式中提供了一种上述鹅星状病毒疫苗的制备方法，包括以下步骤：
14、s1：将甲醛溶液加入到含有所述鹅星状病毒疫苗株的病毒液中灭活，然后和灭菌的失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚混匀至灭菌的失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚完全溶解，得到水相溶液；
15、s2：将白油与司班混合后加入硬脂酸铝，搅拌、灭菌，得到油相溶液；
16、s3：将所述油相溶液和水相溶液混合后，乳化，得到灭活疫苗。
17、优选的，在步骤s1中，所述灭活的温度为35-40℃，时间为20-28h；所述灭活后的病毒和灭菌的失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚的质量比为94-98:2-6。在步骤s2中，所述白油和司班的质量比为94-98:2-6；所述灭菌的温度为110-130℃，时间为15-25min。在步骤s3中，所述油相溶液和水相溶液的质量比为1.5-2.5:1；所述乳化的搅拌转速为8000-1200r/min，时间为10-20min。
18、所述鹅星状病毒疫苗株命名为gastv-lc01-f95，其核苷酸序列如下所示：
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25、本专利技术和现有技术相比，具有如下有益效果之一：
26、1.本专利技术提供的疫苗株提高了病毒产量，降低了病毒毒力，具有良好的免疫效果和抗体持续期，做为疫苗候选株便于在市场的推广和销售。
27、2.本专利技术在细胞上培养病毒，相比在spf鹅胚培养病毒，成本更低。
28、3.本专利技术病毒在细胞连续传代后，病毒毒力减弱，降低生产中病毒扩散的危险。
29、4.比蛋白类疫苗，全病毒制备疫苗的蛋白成分更全面。
30、5.本专利技术制备疫苗免疫产蛋鹅和雏鹅，机体的抗体水平高，抗体持续期长，能够提供长效保护。
31、6.本专利技术制备疫苗免疫产蛋鹅后，鹅蛋的卵黄中含有抗体，后期孵化的雏鹅体内带有母源抗体，在幼年能保护雏鹅不被鹅星状病毒感染。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鹅星状病毒疫苗株，其特征在于，所述鹅星状病毒疫苗株的保藏编号为CCTCCNO：V202445。
2.一种鹅星状病毒疫苗株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的鹅星状病毒疫苗株的制备方法，其特征在于，所述鹅星状病毒在鸡肝癌病毒传代适应后，病毒滴度达到107.5TCID50/0.1ml。
4.一种鹅星状病毒疫苗，其特征在于，采用权利要求1所述的鹅星状病毒疫苗株制备得到。
5.根据权利要求4所述的鹅星状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗。
6.一种权利要求4或5所述的鹅星状病毒疫苗在产蛋鹅和/或雏鹅在预防鹅星状病毒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述鹅星状病毒疫苗对雏鹅的免疫剂量为0.1ml/只。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，对雏鹅注射所述鹅星状病毒疫苗7天后即可产生抗体，14天后抗体水平达到7.6log2以上，21天达到10.25log2；和/或，
9.一种鹅星状病毒抗体，其特征在于，采用权利要求1所述的鹅星状病毒
10.一种权利要求9所述的鹅星状病毒抗体在雏鹅预防鹅星状病毒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种鹅星状病毒疫苗株，其特征在于，所述鹅星状病毒疫苗株的保藏编号为cctccno：v202445。
2.一种鹅星状病毒疫苗株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的鹅星状病毒疫苗株的制备方法，其特征在于，所述鹅星状病毒在鸡肝癌病毒传代适应后，病毒滴度达到107.5tcid50/0.1ml。
4.一种鹅星状病毒疫苗，其特征在于，采用权利要求1所述的鹅星状病毒疫苗株制备得到。
5.根据权利要求4所述的鹅星状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗为灭活疫苗。
6.一种权...
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