【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及允许使用实时和基于阵列的检测两者快速分析单个样品体积内的多个核酸靶的方法、系统和装置。背景近年来，一直在努力开发和制造能够“在装置上”进行各种化学和生化分析及合成的微流体装置，例如盒。目标是提供允许在护理点(poc)或护理点附近以及时且有效方式进行先前基于实验室的活动的装置。这样的微流体装置可以适于与自动化系统一起使用，从而提供另外的益处，诸如降低成本和减少操作者错误。在许多情况下，期望这样的微流体装置能够进行分子技术(包括核酸扩增)。聚合酶链式反应(pcr)扩增技术是分子生物学的重要基石。pcr扩增自产生以来就被用于分析和研究核酸序列。常规聚合酶链式反应(pcr)方法扩增样品中的单个靶序列。如现在熟知的，对靶序列特异性的一对引物连同许多特异性反应物(包括聚合酶、dntp和阳离子诸如镁)暴露于热循环以产生靶序列的大量拷贝(扩增子)。实时pcr(也称为定量pcr或qpcr)允许实时监测靶序列的扩增，因为它将荧光染料掺入扩增的靶(扩增子)中，并且使用荧光计检测所得的荧光。可以在每个循环之后测量荧光，并且荧光信号的强度反映在该点处存在的扩增子的量。这可以是有用的，因为它可以允许非常快速鉴定样品中靶序列的存在，因为可以在荧光强度增加到高于背景荧光的点处鉴定存在。这也可以提供定量水平，因为荧光强度增加到高于可检测水平的点与样品中模板dna分子的初始数量成比例地对应。多重pcr反应现在被用于允许同时扩增多个靶序列。多重qpcr反应也是可能的。多个引物组(每组对不同的靶序列是特异性的)与用在光谱上不同的荧光团标记的探针组合使用。然而，可用的荧光团标记的...
【技术保护点】
1.一种用于通过以下分析单个样品体积中的多于一种核酸靶的方法：
2.根据权利要求1所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在所述靶是核糖核酸(RNA)靶的情况下，所述方法包括在扩增之前将RNA逆转录为DNA的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中在反应体积中扩增多于一种不同的主要核酸靶以得到多于一个不同的主要扩增子的组。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在扩增多于一种主要核酸靶的步骤中，每个所得的主要扩增子组用不同的荧光团来标记。
5.根据权利要求4所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述方法包括在激发时检测所述荧光团中的每一个的荧光发射的步骤。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中每个主要扩增子使用与所述扩增子互补的荧光标记的寡核苷酸探针来标记。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中每个主要扩增子组可通过不同的探针检测，所述探针在完整时具有与所述扩增子的一部分互补的互
8.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在实时监测所得的主要扩增子产生时，主要扩增子的检测在每个热循环中进行至少一次。
9.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述多于一种次要核酸靶通过不对称PCR扩增。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中从所述多于一种次要核酸靶扩增的扩增子组都用相同的荧光团标记，并且用于标记所述多于一种次要核酸靶扩增子的荧光团不同于用于标记所述一种或更多种主要核酸靶的一种或更多种荧光团。
11.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中用于扩增所述多于一种次要核酸靶的每个引物对中的至少一个用相同的荧光团标记。
12.根据权利要求11所述的分析多于一种核酸靶的方法，其中用荧光团标记的引物对于一对中的另一引物是过量的。
13.根据权利要求4-12中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团是Cy5或UV荧光团AF350。
14.根据权利要求12所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中在用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团是Cy5时，用于标记主要核酸靶的荧光团能够是选自AF-350、FAM、HEX、ROX和AF-750的一种或更多种。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团选择为具有与对用于标记所述主要核酸靶探针的荧光团特异性的激发滤光片带宽区域内用于标记主要核酸靶的荧光团的激发光谱具有有限重叠或没有重叠的激发光谱。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团选择为具有与对用于标记所述主要核酸靶探针的荧光团特异性的发射滤光片带宽区域内用于标记主要核酸靶的荧光团的发射光谱具有有限重叠或没有重叠的发射光谱。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团的最大吸收和发射波长在光谱上(就波长差异而言)与用于标记主要核酸靶的荧光团的其他波长分开。
18.根据权利要求10-17中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团选择为具有高消光系数和荧光量子产额。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，所述用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团选择为具有比用于标记主要核酸靶的荧光团的所有发射光谱更高或显著更低的发射光谱。
20.根据权利要求10-19中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团选择为在与用于标记主要核酸靶的荧光团的激发波长光谱具有有限重叠或没有重叠的波长处可激发。
21.根据权利要求10-20中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述用于标记主要核酸靶的荧光团选择为在与用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团的激发波长光谱具有有限重叠或没有重叠的波长处可激发，使得两个或更少，优选地一个或更少，最优选地没有所述主要靶荧光团通道将经历来自所述次要靶荧光团的串扰。
22.一种微流体装置，所述微流体装置...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于通过以下分析单个样品体积中的多于一种核酸靶的方法：
2.根据权利要求1所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在所述靶是核糖核酸(rna)靶的情况下，所述方法包括在扩增之前将rna逆转录为dna的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中在反应体积中扩增多于一种不同的主要核酸靶以得到多于一个不同的主要扩增子的组。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在扩增多于一种主要核酸靶的步骤中，每个所得的主要扩增子组用不同的荧光团来标记。
5.根据权利要求4所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述方法包括在激发时检测所述荧光团中的每一个的荧光发射的步骤。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中每个主要扩增子使用与所述扩增子互补的荧光标记的寡核苷酸探针来标记。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中每个主要扩增子组可通过不同的探针检测，所述探针在完整时具有与所述扩增子的一部分互补的互补序列部分，并且被共价附接至荧光团和猝灭剂两者。
8.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中，在实时监测所得的主要扩增子产生时，主要扩增子的检测在每个热循环中进行至少一次。
9.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中所述多于一种次要核酸靶通过不对称pcr扩增。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中从所述多于一种次要核酸靶扩增的扩增子组都用相同的荧光团标记，并且用于标记所述多于一种次要核酸靶扩增子的荧光团不同于用于标记所述一种或更多种主要核酸靶的一种或更多种荧光团。
11.根据前述权利要求中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中用于扩增所述多于一种次要核酸靶的每个引物对中的至少一个用相同的荧光团标记。
12.根据权利要求11所述的分析多于一种核酸靶的方法，其中用荧光团标记的引物对于一对中的另一引物是过量的。
13.根据权利要求4-12中任一项所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团是cy5或uv荧光团af350。
14.根据权利要求12所述的用于分析多于一种核酸靶的方法，其中在用于标记所述多于一种次要核酸靶的荧光团是cy5时，用于标记主要核酸靶的...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·亚历山大·高迪，内雷亚·普拉扎加雷，
申请(专利权)人：康特姆斯集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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