【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物取样分离培养，更具体的涉及一种幽门螺杆菌的无创取样分离培养方法。
技术介绍
1、幽门螺杆菌，名称为helicobacterpylori，简称h.pylori，感染是人类最常见的感染之一。h.pylori感染后几乎100％都会出现胃黏膜组织学上的炎症，即h.pylori胃炎，其中70％的h.pylori胃炎患者表现为无症状的慢性活动性胃炎，10％的患者存在消化不良症状，15％～20％的患者出现消化性溃疡，1％～3％的患者将发展为胃癌。h.pylori感染不经治疗将终生存在，根除h.pylori可降低胃内炎症水平，改善消化不良症状，治愈消化性溃疡，阻止黏膜病变的进一步发展。
2、目前，开展h.pylori体外分离培养开展耐药性筛查研究，对于降低或减慢h.pylori根除耐药性发生有重要意义。然而当前已知最有效取样体外分离方式即采取胃镜检测取样体外分离培养h.pylori，该种方式存在需侵入性取材、培养时间长、菌种阳性率低的问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种无创取样分离培养幽门螺杆菌方法，用以解决现有技术中存在需侵入性取材、培养时间长、菌种阳性率低的问题。
2、本专利技术是通过如下技术方案实现的：
3、对受试者分别进行口腔咽部或牙冠采样，获得待测样本；
4、将待测样本与标准株分别进行血琼脂平板划线分离培养，所述标准株为幽门螺杆菌的标准株；
5、以标准菌的菌落生长形态作为对比，寻找菌落生长形态相同的菌
6、对第一纯种菌进行显微镜检，并与标准菌的显微镜检结果进行对比，菌体形态为s形、螺旋状或海鸥状的作为高度疑似菌，并进行分离纯化操作，获得第二纯种菌；
7、挑取第二纯种菌进行生化试验，确认疑似菌是否为幽门螺杆菌；
8、对确认的幽门螺杆菌进行保存。
9、优选的，所述受试者为进行c14或c13呼气试验检测呈幽门螺杆菌阳性人群。
10、优选的，所述培养是在高浓度二氧化碳培养箱中培养，培养温度是36℃～37℃，所述高浓度二氧化碳是指二氧化碳体积浓度≥10％。
11、优选的，所述高浓度二氧化碳的体积浓度为10％。
12、优选的，所述培养箱内空气湿度≥65％。
13、优选的，所述显微镜检为革兰染色镜检。
14、优选的，所述生化试验为氧化酶试验、触酶试验和脲酶试验。
15、优选的，确认疑似细菌为幽门螺杆菌的标准是：第二纯种菌的菌落生长形态、显微镜检菌体形态、生化试验结果均与标准均相同。
16、优选的，所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，还包括：在第一纯种菌分离纯化时加入抗生素组合；
17、所述抗生素组合为阿米卡星、万古霉素、诺氟沙星与替考拉宁的第一组合，或者左氧氟沙星、环丙沙星、四环素与复方新诺明的第二组合。
18、优选的，所述第一组合中阿米卡星、万古霉素、诺氟沙星与替考拉宁的质量比例为：阿米卡星：万古霉素：诺氟沙星：替考拉宁＝3：3：1：3。
19、第二组合中，左氧氟沙星、环丙沙星、四环素与复方新诺明的质量比例为：果左氧氟沙星：环丙沙星：四环素：复方新诺明＝1：1：6：5。
20、与现有技术相比较，本专利技术的无创取样分离培养幽门螺杆菌方法具有如下
21、有益效果：
22、(1)本专利技术采取对受试者口腔咽部或牙冠取样，通过体外分离过程分离或鉴定幽门螺杆菌，相较传统胃粘膜取样体外分离培养方式有效降低患者做胃镜医疗成本，减少患者诊治伤痛及医疗风险，其次该方法简单、方便，耗时较短，可在普通体检人群大规模开展，可有效将h.pylori筛查有针对性根除治疗人群范围扩大至常规体检人群，并结合后续药敏筛查可减少该类人群耐药性发生大大提升h.pylori有效防治，通过本实验研究发现本方法体外取样培养h.pylori成功率占35.71％，相较胃粘膜体外分离成功率35.34％接近，总体效果达到预期，可作为后续h.pylori体外分离方法进一步探索应用。
23、(2)采用阿米卡星、万古霉素、诺氟沙星、替考拉宁的组合，或者左氧氟沙星、环丙沙星、四环素、复方新诺明的组合可有效抑制杂菌生长，但不影响幽门螺杆菌增值，大大提升了幽门螺杆菌分离效果。
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1.一种无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述受试者为进行C14或C13呼气试验检测呈幽门螺杆菌阳性人群。
3.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述培养是在高浓度二氧化碳培养箱中培养，培养温度是36℃～37℃，所述高浓度二氧化碳是指二氧化碳体积浓度≥10％。
4.如权利要求3所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述高浓度二氧化碳的体积浓度为10％。
5.如权利要求3所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述二氧化碳培养箱内空气湿度≥65％。
6.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述显微镜检为革兰染色镜检。
7.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述生化试验为氧化酶试验、触酶试验和脲酶试验。
8.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，确认疑似细菌为幽门螺杆菌的标准是
9.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，还包括：在第一纯种菌分离纯化时加入抗生素组合；
10.如权利要求9所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，第一组合中阿米卡星、万古霉素、诺氟沙星与替考拉宁的质量比例为：阿米卡星：万古霉素：诺氟沙星：替考拉宁＝3：3：1：3。
...【技术特征摘要】
1.一种无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述受试者为进行c14或c13呼气试验检测呈幽门螺杆菌阳性人群。
3.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述培养是在高浓度二氧化碳培养箱中培养，培养温度是36℃～37℃，所述高浓度二氧化碳是指二氧化碳体积浓度≥10％。
4.如权利要求3所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述高浓度二氧化碳的体积浓度为10％。
5.如权利要求3所述的无创取样分离培养幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述二氧化碳培养箱内空气湿度≥65％。
6.如权利要求1所述的无创取样分离培养幽门螺...
【专利技术属性】
技术研发人员：安运锋，张玉诺，刘邵明，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九二四医院，
类型：发明
国别省市：
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