【技术实现步骤摘要】
本申请涉及化学蛋白质组学，具体涉及一种阿霉素光亲和探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、阿霉素(doxorubicin，dox)，一种蒽环类抗生素，20世纪60年代首次从波西链霉菌中分离得到，广泛应用于各种化学肿瘤的治疗。dox的主要作用机制可能为其本身可插入双链dna、抑制拓扑异构酶ii的功能、产生活性氧(ros)以及免疫调节等。越来越多的证据表明dox具有多效抗肿瘤作用，如乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、白血病等多种恶性肿瘤均可使用dox进行化疗，其可作为一种广谱的抗肿瘤药物[kciuk,m.doxorubicin-an agent withmultiple mechanisms of anticancer activity.cells 2023,12(4)：659-689]。
2、虽然dox作为抗癌药物在临床被广泛应用，但阿霉素的经典制剂(如各种阿霉素注射液)不具有靶向性，在杀死肿瘤细胞的同时还会损失体内正常细胞，导致毒副作用，如呕吐、脱发、皮疹以及不可逆的心脏毒性等。目前，越来越多的研究人员探究如何在保持dox高活性的状态下降低其毒副作用，因此明确dox针对肿瘤细胞的确切分子机制尤为重要。在肿瘤活细胞水平鉴定dox的作用靶点，有助于发掘新的癌症治疗靶标及明确其分子机制，为药物开发提供更多的理论基础[alam khan,structural modification and strategies forthe enhanced doxorubicin drug delivery.bioorganic chemistr
3、基于活性的蛋白质谱分析技术(activity-based protein profiling，abpp)自提出至今取得了飞速发展，该技术利用疾病相关活细胞样品作为实验体系。其中对于非共价化合物而言，首先要将其设计成具有生物活性的小分子光亲和探针，并在原位光照下可将光亲和探针与细胞中蛋白质靶点之间的非共价作用转化为特异性的共价作用。使用该方法有利于发掘与药物表型相关的直接作用靶点，因而被广泛应用于生物活性分子的靶标发现。
4、cn 113286820 a公开了一种用于靶向分拣蛋白受体和抑制血管生成拟态的方法和化合物，其中，共轭化合物或抗体共轭物包含治疗剂、接头，治疗剂包括阿霉素，接头包括nhs酯/芳基叠氮化物、nhs酯/双吖丙啶接头、炔烃接头，治疗剂通过接头、任选地可切割接头或不可切割接头与化合物、肽化合物或其衍生物连接。但其存在以下问题1.包括阿霉素在内的治疗剂螯合形成的可以治疗癌症或侵袭性癌症的抗体共轭化合物的分子结构与原治疗剂分子结构差异很大，有可能会影响原治疗剂的药效；2.该类化合物经过修饰后结构太大，可能在治疗癌症时小分子穿膜能力被大大降低，在进行治疗时需要借助其他纳米材料发挥作用。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的第一技术问题在于提供一种阿霉素光亲和探针；本专利技术所要解决的第二技术问题在于提供阿霉素光亲和探针的制备方法；本专利技术所要解决的第三技术问题在于提供阿霉素光亲和探针的应用。
2、本申请第一方面提供了一种阿霉素光亲和探针，具有式i所示的结构：
3、
4、该阿霉素光亲和探针以阿霉素母核为亲和基团，双吖丙啶为光交联基团，炔基为生物正交基团。
5、由于在氨基处对阿霉素进行衍生化修饰对原始药物分子的活性影响最小，因此本申请以阿霉素母核为活性基团，在其氨基处引入光交联基团和生物正交基团，光交联基团双吖丙啶能够在紫外光照的条件下，原位交联临近的结合蛋白质；生物正交基团炔基，通过生物正交偶联反应和荧光素或生物素偶联，从而对探针标记信号进行检测。
6、本申请第二方面提供了阿霉素光亲和探针的制备方法，包括以下步骤：将如下式所示的化合物2溶于有机溶剂中，在冰浴下依次加入n,n-二异丙基乙胺dipea、1-羟基苯并三唑hobt和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐edci，最后加入化合物1，搅拌反应，得到阿霉素光亲和探针粗产物的反应液；将阿霉素光亲和探针粗产物的反应液冻干后制备纯化，得到阿霉素光亲和探针。
7、
8、进一步地，有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺。
9、化合物2、化合物1、n,n-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:0.8～1:2.5～3:1～1.5:1～1.5。
10、作为优选，化合物1、n,n-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:0.9:2.75:1.4:1.4。
11、进一步地，加入化合物1后，撤去冰浴，于室温条件下进行搅拌反应。
12、进一步地，搅拌反应的时间为12～20h，优选为16h。
13、一种包含阿霉素光亲和探针的鉴定靶蛋白的检测试剂盒，也默认在本专利技术的保护范围内。
14、本专利技术第三方面提供了所述的劳拉替尼光亲和探针或所述的检测试剂盒在鉴定靶蛋白中的应用。
15、靶蛋白与探针共价结合，通过紫外照射，实现探针中双吖丙啶基团与包括癌细胞增殖、侵袭在内的生物过程相关蛋白的共价交联。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
17、(1)本专利技术首次设计并合成了阿霉素光亲和探针，以阿霉素母核为亲和基团，双吖丙啶为光交联基团，炔基为生物正交基团，可用于鉴定阿霉素对肿瘤细胞的直接作用靶点和下游信号通路；
18、(2)本专利技术制备方法简单且反应条件温和，能够快速高效地制备出阿霉素光亲和探针，并将其应用于肿瘤细胞中鉴定到潜在阿霉素的结合蛋白质，随后通过对蛋白质信号比值和psms进行分析，确定高置信度靶点蛋白质；
19、(3)本申请探针小分子所修饰的光亲和探针很大程度保持小分子活性，在进行活细胞靶点发现时也可以最大程度保证小分子的穿膜能力。
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1.一种阿霉素光亲和探针，其特征在于，具有式I所示的结构：
2.一种如权利要求1所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
4.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、阿霉素、N,N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:0.8～1:2.5～3:1～1.5:1～1.5。
5.根据权利要求4所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、阿霉素、N,N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:0.9:2.75:1.4:1.4。
6.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，搅拌反应的温度为室温。
7.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，搅拌反应的时
8.包含权利要求1所述的阿霉素光亲和探针的鉴定靶蛋白的检测试剂盒。
9.权利要求1所述的阿霉素光亲和探针或权利要求8所述的检测试剂盒在鉴定靶蛋白中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种阿霉素光亲和探针，其特征在于，具有式i所示的结构：
2.一种如权利要求1所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺。
4.根据权利要求2所述的阿霉素光亲和探针的制备方法，其特征在于，2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、阿霉素、n,n-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:0.8～1:2.5～3:1～1.5:1～1.5。
5.根据权利要求4所述的阿霉素光亲和探针...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈南，王清清，
申请(专利权)人：南京科络思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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