一种快速提取鱼类ＤＮＡ进行聚合酶链式反应的方法技术

一种涉及到鱼类ＤＮＡ制备的一种快速提取鱼类ＤＮＡ进行聚合酶链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ？Ｃｈａｉｎ？Ｒｅａｃｔｉｏｎ，简称ＰＣＲ）的方法，它是将酒精保存的鱼类鳍条加入氢氧化钠、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、β－巯基乙醇、聚乙烯吡咯烷酮，并经高速离心后于３０分钟内即可获得鱼类ＤＮＡ用以ＰＣＲ扩增。本发明专利技术成本低、价格廉，其稳定性、快速性、准确性优于原提取鱼类ＤＮＡ的方法。它不仅能将ＤＮＡ即时用于ＰＣＲ扩增，而且还可长期冷冻保存备用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种涉及到鱼类ＤＮＡ制备的一种快速提取鱼类ＤＮＡ进行聚合酶链式反应的方法，其特征是：　　（１）将０．０５－０．１５ｇ酒精保存的鱼鳍条放入１．５ｍｌ离心管中，加入２００－４００微升０．３－０．６ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液、２－４微升β－巯基乙醇，１－４微克聚乙烯吡咯烷酮，然后将离心管在６５－８５℃水中水浴１０－１５分钟；　　（２）再加入２００－４００微升０．３－０．６ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ，摇晃２分钟，然后在高速离心泵上离心１０－１５分钟；　　（３）将离心后的离心管中的上清液取２００微升，转至新的离心管中，用以进行ＰＣＲ扩增；　　（４）若要长期保存鱼类ＤＮＡ，可将上述装有２００微升上清液的离心管中加入２００微升９５％酒精、１０－２４微克的醋酸钠，摇晃离心管让其混匀，然后在－２０℃环境中放置２０分钟；　　（５）将在－２０℃环境中放置２０分钟后的离心管，在高速离心泵离心１５分钟，将离心管倒置于滤纸上去掉上清液；　　（６）再将去掉上清液的离心管中加入８０％酒精３００－６００微升，放置５－１０分钟后，高速离心泵离心５分钟，将离心管倒置于滤纸上去掉上清液；（７）将去掉上清液的离心管在４０－５０℃下放置５－１０分钟以干燥ＤＮＡ；　　（８）再将离心管中加入１０－５０微升Ｔｒｉｓ－ＥＤＴＡ，以溶解干燥的ＤＮＡ，－２０℃环境冷冻保存。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李忠，梁宏伟，邹桂伟，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，
类型：发明
国别省市：42[中国|湖北]