【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物转化，尤其涉及一种稻黑孢原生质体的制备方法。
技术介绍
1、稻黑孢霉菌菌是一种常见的植物寄生真菌，能危害多种植物，如高粱、玉米、小麦、棉花等，尤其对重要的粮食作物水稻造成了严重的危害。由于对病原菌发病机理和病害发生规律的认识不足，导致我们对许多灾害性农作物病害的防治措施具有一定的局限性，目前关于稻黑孢霉菌的防治相关研究较少，主要包括化学防治和生物防治。
2、然而，有关稻黑孢霉菌侵染方式和致病机制的研究鲜见报道，为此，研究提供一种稻黑孢原生质体的制备方法，可为后续研究该菌的关键致病基因奠定理论和技术基础，有助于进一步深入研究该菌的侵染机制，以期为与寄主的互作机理研究提供新的线索。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种稻黑孢原生质体的制备方法，采用本专利技术所述稻黑孢原生质体的制备方法得到的原生质体数量适宜，质量好，可以提高后续遗传转化体系的转化效率。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种稻黑孢原生质体的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将稻黑孢霉菌菌株接种至第一培养基，进行第一培养，得到孢子培养液；
5、(2)将所述孢子培养液进行过滤与第一离心，得到分生孢子；
6、(3)将所述分生孢子接种至第二培养基进行菌丝培养，得到稻黑孢霉菌菌丝培养液；
7、(4)将所述稻黑孢霉菌菌丝培养液进行过滤，得到稻黑孢霉菌菌丝；
8
9、(6)将所述裂解液进行第二培养，得到原生质体液；
10、(7)将所述原生质体液进行第二离心，得到稻黑孢霉菌原生质体。
11、进一步的，所述稻黑孢霉菌菌株为hy-12菌株。
12、进一步的，所述第一培养基与第二培养基均为pdb培养基。
13、进一步的，所述第一培养为黑暗培养；所述黑暗培养中稻黑孢霉菌菌株的接种量与第一培养基中培养液的体积比为1～5:10～50。
14、进一步的，所述第一培养的震荡频率为180～200rpm/min，温度为25～28℃，时间为6～8d。
15、进一步的，所述过滤为采用覆盖有四层擦镜纸的灭菌漏斗进行过滤；所述第一离心的转速为3000～5000rpm/min，温度为0～4℃，时间为3～10min。
16、进一步的，所述菌丝培养的震荡频率为180～200rpm/min，温度为25～28℃，时间为12～16h。
17、进一步的，所述稻黑孢霉菌菌丝与酶解液混合时的用量比为1～5g:30ml。
18、进一步的，所述第二培养的震荡频率为80～110rpm/min，温度为28℃，时间为4～6h。
19、进一步的，所述第二离心的转速为1800～3000rpm/min，温度为0～4℃，，时间为3～10min。
20、与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有如下的有益效果：本专利技术所述稻黑孢原生质体的制备方法限定了各个步骤培养的具体参数，在该参数条件下得到的原生质体数量适宜，质量好，可以提高后续遗传转化体系的转化效率。
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1.一种稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述稻黑孢霉菌菌株为HY-12菌株。
3.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养基与第二培养基均为PDB培养基。
4.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养为黑暗培养；所述黑暗培养中稻黑孢霉菌菌株的接种量与第一培养基中培养液的体积比为1～5:10～50。
5.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养的震荡频率为180～200rpm/min，温度为25～28℃，时间为6～8d。
6.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述过滤为采用覆盖有四层擦镜纸的灭菌漏斗进行过滤；所述第一离心的转速为3000～5000rpm/min，温度为0～4℃，时间为3～10min。
7.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述菌丝培养的震荡频率为180～200rpm/min，温
8.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述稻黑孢霉菌菌丝与酶解液混合时的用量比为1～5g:30mL。
9.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第二培养的震荡频率为80～110rpm/min，温度为28℃，时间为4～6h。
10.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第二离心的转速为1800～3000rpm/min，温度为0～4℃，，时间为3～10min。
...【技术特征摘要】
1.一种稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述稻黑孢霉菌菌株为hy-12菌株。
3.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养基与第二培养基均为pdb培养基。
4.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养为黑暗培养；所述黑暗培养中稻黑孢霉菌菌株的接种量与第一培养基中培养液的体积比为1～5:10～50。
5.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述第一培养的震荡频率为180～200rpm/min，温度为25～28℃，时间为6～8d。
6.根据权利要求1所述的稻黑孢原生质体的制备方法，其特征在于，所述过滤为采用覆盖有四层擦镜纸...
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