【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酸性橙ⅱ和胭脂红测定，具体为一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法。
技术介绍
1、肉类制品与人们生活息息相关。为增加其色泽，一些生产者违规添加酸性橙ⅱ和胭脂红。酸性橙ⅱ和胭脂红都是水溶性偶氮类色素，在一定条件下会分解产生多种具有致畸、致癌风险的芳香胺化合物。消费者误食会引起组织损伤，甚至导致癌症。2008年卫生部已将酸性橙ⅱ列为非食用色素，严禁将其作为着色剂添加到食品中。胭脂红属于我国允许使用的食品添加剂，但《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中禁止胭脂红用于肉类制品。酱卤肉制品中酸性橙ⅱ和胭脂红的监测对实现食品安全监管有重要意义。
2、目前文献报道，食品中偶氮类色素常用的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱检测法、示波极谱法等，且都是酸性橙ⅱ或胭脂红单一项目进行测定，极谱法样品处理简单快捷，无需分离即可直接测定，但操作不当会造成环境污染，hplc-ms昂贵且对质谱的离子源系统要求较高。
3、综上，需要提出一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法来解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法，包括以下步骤：
4、s1.准确称取0.2500g酸性橙ⅱ标准品于250ml容量瓶种，用高纯水定容至刻度，得到1000
5、s2.选取胭脂红标准储备液1000μg/ml；
6、s3.采用高效液相色谱法，从检测波长、色谱柱、流动相、试样提取液、固相萃取柱五方面、不同参数进行考察，确定高效液相色谱法同时测定酱卤肉制品中酸性橙ⅱ和胭脂红的最佳检测条件；
7、s4.通过提取、净化和浓缩进行试样制备；
8、s5.结果分析前，确定检测波长、色谱柱、流动相；
9、s6.选择合适的提取液、固相萃取柱进行样品前处理优化；
10、s7.建立标准曲线、检出限和定量限、精密度以及回收率计算方法并验证。优选地,所述步骤s4提取、净化和浓缩进行试样制备的制备流程如下：
11、s4.1.提取，准确称取粉碎均匀试样2.0g于50ml离心管中，加入10ml正己烷，振荡10min后超声10min，除去其中脂类物质，然后5000r/min离心5min，去除上清液，加入1:1:1的乙腈-乙醇-水提取液10ml于上述离心管中，振荡10min后超声30min，然后5000r/min离心10min，取全部上清液于另一离心管中，按上述步骤进行二次提取，所得上清液与第一次提取所得上清液合并，即得酸性橙ii、胭脂红提取液；
12、s4.2.净化，依次采用5.0ml甲醇和5.0ml水活化proeluttmpwa-2固相萃取柱，然后将提取液通过固相萃取柱，接着用5.0ml甲醇淋洗萃取柱，最后用5.0ml 15％氨水-甲醇溶液洗脱萃取柱，收集全部洗脱液；
13、s4.3.浓缩，将全部洗脱液置于40℃的水浴中，氮吹至近干时用2.0ml0.02mol/l乙酸铵进行溶解，定容、摇匀，用0.45μm ptfe-q滤膜过滤，滤液待测。
14、优选地,所述步骤s5确定检测波长、色谱柱、流动相的步骤如下：
15、s5.1.检测波长的选择，在色谱柱zorbax eclipse plus c18、流动相甲醇：0.02mol/l乙酸铵、柱温35℃、进样量10μl、流速：1.0ml/min时，分别选择254nm、484nm、508nm波长对混合标准溶液和加标样品进行检测，考察酸性橙ⅱ和胭脂红在不同检测波长下的出峰情况。综合考虑酸性橙ⅱ和胭脂红的检测灵敏度和加标回收率，选择484nm作为适宜检测波长；
16、s5.2.色谱柱的选择，选用反相c18色谱柱进行分离，在流动相甲醇：0.02mol/l乙酸铵、柱温35℃、检测波长484nm、进样量10μl、流速：1.0ml/min时，分别选择zorbax sb-c18、jade-pak ods c18、capcell pak mgⅱc18、zorbax eclipse plus c184种色谱柱考察酸性橙ⅱ和胭脂红在不同色谱柱下的分离效果。综合考虑，选择zorbax eclipse plus c18为适宜色谱柱；
17、s5.3.流动相的选择，在色谱柱zorbax eclipse plus c18、柱温35℃、检测波长484nm、进样量10μl、流速：1.0ml/min时，对比了甲醇-乙酸铵和甲醇-水两种体系的流动相进行样品分析。通过实验，确定流动相的最佳组分比例甲醇-0.02mol/l乙酸铵和梯度洗脱程序。
18、优选地,所述步骤s6选择合适的提取液、固相萃取柱进行样品前处理优化的具体流程为：
19、s6.1.提取液的选择，选择碱性提取液以取得更好的提取效果，实验选择氨水-乙醇-水2:7:1、氨水-乙醇-水1:70:29、甲醇-乙醇-水1:1:1、乙腈-乙醇-水1:1:1、乙腈-乙醇-水2:1:15种提取液对试样进行提取。综合考虑，选择乙腈-乙醇-水溶液1:1:1作为试样提取液；
20、s6.2.固相萃取柱的选择，实验选择proeluttmpwa-2、cnw poly-sery、cnw poly-sery max spe、cnw bond nh2 spe 4种固相萃取小柱对试样进行净化和富集。综合考虑，选择proeluttmpwa-2萃取柱进行样品萃取。
21、优选地,所述步骤s7中标准曲线、检出限和定量限、精密度以及回收率计算方法包括以下步骤：
22、s7.1.标准曲线：
23、配制0.15625μg/ml、0.31250μg/ml、0.62500μg/ml、1.25000μg/ml、2.50000μg/ml、5.00000μg/ml、10.00000μg/ml系列酸性橙ⅱ和胭脂红混合标准溶液，在上述适宜条件下进行分析；
24、以酸性橙ⅱ和胭脂红保留时间定性、以峰面积定量，拟合线性回归方程：
25、酸性橙ⅱy＝0.4581x+0.0124，r2＝0.99999；
26、胭脂红y＝0.2887x+0.0064，r2＝0.99998；
27、s7.2.检出限和定量限：
28、配制较低浓度的酸性橙ⅱ和胭脂红低浓度混合标准溶液上机检测得到信噪比s/n；
29、以s/n＝3对应的浓度确定为方法检出限酸性橙ⅱ0.0042mg/kg、胭脂红0.0048mg/kg，以s/n＝10对应的浓度确定为方法定量限酸性橙ⅱ0.014mg/kg、胭脂红0.016mg/kg；
30、s7.3.精密度：
31、称取6个平行样品，酸性橙ⅱ和胭脂红加标浓度为10mg/kg，逐一加入至6个平行样品本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时测定酱卤肉中酸性橙Ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙Ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于,所述步骤S4提取、净化和浓缩进行试样制备的制备流程如下：
3.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙Ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，所述步骤S5确定检测波长、色谱柱、流动相的步骤如下：
4.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙Ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，所述步骤S6选择合适的提取液、固相萃取柱进行样品前处理优化的具体流程为：
5.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙Ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，所述步骤S7中标准曲线、检出限和定量限、精密度以及回收率计算方法包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于,所述步骤s4提取、净化和浓缩进行试样制备的制备流程如下：
3.根据权利要求1所述的一种同时测定酱卤肉中酸性橙ⅱ和胭脂红的方法，其特征在于，所述步骤s5确定检测波长、色谱柱、流...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵云龙，张丽，冉艳瑞，陈艳，李丽鑫，张联琴，尹李，
申请(专利权)人：昆明市食品药品检验所昆明市食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。