【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及防治眼部血管新生相关疾病的药物及其应用。
技术介绍
1、眼部新生血管是多种眼部疾病常见的并发症及病理性后遗症，是导致视力丧失的主要原因。根据异常新血管生长的解剖部位，眼部新生血管可分为角膜新生血管、视网膜新生血管和脉络膜新生血管。这些新形成的血管是渗出性的，导致视网膜功能受损后细胞外液积聚。此外，新血管的异常生长会干扰角膜透明度和正常的组织结构。新生血管形成与一系列眼部疾病相关，包括新生血管年龄相关性黄斑变性(namd)、糖尿病视网膜病变(dr)、早产儿视网膜病变(rop)、角膜新生血管形成、视网膜血管闭塞和新血管性青光眼。在这些与新生血管形成相关的疾病中，namd和dr是造成视力障碍的主要原因。
2、amd可分为干型amd或新生血管性amd(namd)，其中，namd是amd的晚期阶段，其黄斑下方脉络膜血管的病理性生长，也称为脉络膜新生血管形成(cnv)。脉络膜血管的生长缺乏正常的血管结构和功能，从而导致液体渗漏，最终出血性或渗出性视网膜脱离。新血管的生长通常伴有纤维化，这对视网膜细胞，特别是光感受器造成进一步的损害。尽管有多种可用的治疗方法，但近一半的患者在2年内出现视网膜色素上皮(rpe)萎缩或黄斑瘢痕形成，这是永久性视力丧失的主要原因。
3、糖尿病视网膜病变(dr)是糖尿病最常见的微血管并发症之一，糖尿病相关的高血糖会损害视网膜脉管系统血管，包括内皮细胞、基底膜和支持性周细胞。
4、dr分为两大类：早期阶段的非增殖性糖尿病视网膜病变(npdr)和晚期阶段
5、早产儿视网膜病变(rop)是指在孕36周以下、低出生体重、长时间吸氧的早产儿，其未血管化的视网膜发生纤维血管瘤增生、收缩，并进一步引起牵拉性视网膜脱离和失明。主要因未完全血管化的视网膜对氧产生血管收缩和血管增殖而引起，临床上包括活动期和纤维膜形成期。
6、驱动角膜、视网膜和脉络膜血管床常见的新生血管形成的血管活性分子是vegf。vegf被认为是眼血管生成最关键的调节因子，它调节细胞增殖，存活，运动和血管通透性。多项临床研究表明，在几种眼部疾病中发现异常高的vegf水平，包括namd、dr、dme、rop和新生血管性青光眼。玻璃体内注射抗vegf药物包括贝伐珠单抗、雷珠单抗、阿柏西普、康柏西普和溴珠单抗广泛用于抑制眼部新生血管形成，抗vegf疗法目前是namd和dr及rop的一线治疗策略。基因治疗药物由于可以降低治疗频次、减小药物负担，已经成为近年来眼科治疗药物的重点方向。raav载体由于其种类多样、免疫原性极低、安全性高、宿主细胞范围广、扩散能力强、体内表达基因时间长等特点，已成为目前国际上基因治疗开展临床实验中应用最广泛的病毒。目前，raav载体已被用于介导编码单克隆抗体(mab)基因，在体内获得长期表达，从而减少了传统单克隆抗体注射液给药次数。但现有技术中使用的基因治疗药物在人体内的表达量仍非常有限，而对此的改进目前还主要围绕对腺相关病毒的改造和vegf抗体的氨基酸序列优化展开，临床上仍亟需高效表达，且更加有效的眼部血管新生相关疾病的基因治疗药物。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供vegf抗体及重组腺相关病毒载体在制备防治眼部血管新生相关疾病的药物中的应用。
2、本专利技术提供的vegf抗体，包括分泌信号肽、轻链可变区、t2a和重链可变区；其中，
3、所述轻链可变区包含三个cdr区，其中所述cdr区中至少一个的氨基酸序列具有如seq id no:1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％(优选85％、90％、95％、98％或者99％)序列同一性的序列；并且
4、所述重链可变区包含三个cdr区，其中所述cdr区中至少一个的氨基酸序列具有如seq id no:4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％(优选85％、90％、95％、98％或者99％)序列同一性的序列。
5、所述轻链分泌信号肽的氨基酸序列如seq id no:7所示；或者与其具有至少80％(优选85％、90％、95％、98％或者99％)序列同一性的序列。
6、所述重链分泌信号肽的氨基酸序列如seq id no:8所示，或者与其具有至少80％(优选85％、90％、95％、98％或者99％)序列同一性的序列。
7、在一些实施例中，所述vegf抗体(本专利技术中记作antivegf(sp))的轻链三个cdr区分别具有如seq id no:1、2或3所示的氨基酸序列；重链三个cdr区分别具有如seq id no:4、5或6所示的氨基酸序列；所述轻链分泌信号肽的氨基酸序列如seq id no:7所示；所述重链分泌信号肽的氨基酸序列如seq id no:8所示。
8、本专利技术提供的vegf抗体具有良好的生理活性，在抗体中轻链和重链的n端分别加入分泌信号肽使基因表达水平得到提高，如seq id no:7和如seq id no:8所示的信号肽经筛选获得，其更有利于编码本专利技术所述vegf抗体的核酸的表达，从而更有效的抑制人脐静脉内皮细胞(huvec)的增殖，通过aav腺相关病毒载体传递抗血管生成蛋白antivegf(sp)的表达，可长期有效的抑制新生血管，减少用药频率，同时还可以有效提升患者治疗的依从性，减少治疗风险和创伤。
9、一些实施例中，所述vegf抗体中，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:9所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:10所示。
10、进一步的，本专利技术还提供了编码如前所述所述vegf抗体的核酸。
11、本专利技术所述的核酸包括编码轻链可变区的核酸、编码重链可变区的核酸。所述的核酸可以是dna、rna、cdna或pna。其可为单链的或是双链的。所述核酸可以包括具有不同功能的核苷酸序列，如编码区和非编码区如调控序列(例如启动子或转录终止子)。核酸在拓扑学上可以是线性或环状的。核酸可以是例如载体(如表达或克隆载体)的一部分，或一个片段或多个片段的组合。所述核酸可直接从天然来源获得，或者可由重组、酶法或化学技术辅助制备。所述rna形式为由基因转录获得的mrna等。在本专利技术实施例中，所述核酸为dna，其经过密码子优化。一些实施例中，编码轻链可变区的核酸序列如seq id no:11所示；编码重链可变区的核酸序列如seq id no:12所示；编码轻链分泌信号本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.VEGF抗体，其特征在于，包括轻链分泌信号肽、轻链可变区、T2A、重链分泌信号肽和重链可变区；其中，
2.根据权利要求1所述的VEGF抗体，其特征在于，
3.编码权利要求1或2所述VEGF抗体的核酸。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，
5.包括启动子和权利要求3或4所述的核酸的表达单元。
6.根据权利要求5所述的表达单元，其特征在于，所述启动子为鸡β-肌动蛋白启动子。
7.包括权利要求3或4所述的核酸或权利要求5或6的所述的表达单元的重组载体。
8.根据权利要求7所述的重组载体，其特征在于，依次包括5’末端反向重复序列、启动子序列、权利要求3或4所述的核酸、BGHpolyA信号序列和3’末端反向重复序列。
9.根据权利要求7所述的重组载体，其特征在于，其骨架载体为pAAV2。
10.宿主，包括：
11.由培养权利要求11所述的宿主获得的重组腺相关病毒。
12.如下I)～VII)中任一项在制备防治眼部血管新生相关疾病的药物中的应用；>
13.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述眼部血管新生相关疾病包括新生血管年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜新生血管形成、视网膜血管闭塞和/或新血管性青光眼。
14.防治眼部血管新生相关疾病的药物，其包括权利要求12所述的重组腺相关病毒。
15.根据权利要求14所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂，所述注射剂为玻璃体腔注射剂、视网膜下腔注射剂或脉络膜上腔注射剂。
...【技术特征摘要】
1.vegf抗体，其特征在于，包括轻链分泌信号肽、轻链可变区、t2a、重链分泌信号肽和重链可变区；其中，
2.根据权利要求1所述的vegf抗体，其特征在于，
3.编码权利要求1或2所述vegf抗体的核酸。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，
5.包括启动子和权利要求3或4所述的核酸的表达单元。
6.根据权利要求5所述的表达单元，其特征在于，所述启动子为鸡β-肌动蛋白启动子。
7.包括权利要求3或4所述的核酸或权利要求5或6的所述的表达单元的重组载体。
8.根据权利要求7所述的重组载体，其特征在于，依次包括5’末端反向重复序列、启动子序列、权利要求3或4所述的核酸、bghpolya信号序列和3’末端反向重复序列。
...【专利技术属性】
技术研发人员：罗光佐，韩雪飞，许鑫，韩霓，王宇峰，孙冬，
申请(专利权)人：南京贝思奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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