【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域。具体地说，本专利技术涉及一种抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白及其生产方法、检测试剂盒和应用。
技术介绍
1、胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，tslp）是一种与il-7相似的i型细胞因子，由四个螺旋束组成短链结构，主要由胸腺基质细胞、上皮细胞分泌，少量由肥大细胞和巨噬细胞分泌。tslp在平衡天然免疫与适应性免疫过程中具有关键作用，尤其在启动和促进由th2细胞介导的过敏性炎症中扮演重要角色。此外，tslp在多种恶性肿瘤如乳腺癌、胰腺癌、宫颈癌、结直肠癌等的病理发展中也显示出重要的作用。鉴于其在多种疾病中的作用，tslp正逐渐成为过敏性哮喘和其它过敏性疾病治疗的新型靶点。
2、tslp蛋白的生物学作用机制主要通过与其受体复合物——由tslp受体（tslpr）和il-7受体α（il-7rα）组成的异源二聚体——结合，激活下游的stat5信号通路，从而引发树突状细胞（dc细胞）的成熟和cd4+t细胞的th2分化，促进il-4、il-5、il-13等细胞因子的释放。这些细胞因子不仅与哮喘等过敏性疾病密切相关，还参与了组织的病理改变，如气道重塑和纤维化。tslp通过这一途径，促发和加重哮喘、过敏性皮炎及过敏性鼻炎等疾病的病理过程。
3、tslp蛋白在炎症反应的早期上游活动中扮演关键角色，特别是在气道炎症中。研究表明，tslp在哮喘患者气道中的表达显著上升，其水平与th2细胞因子和趋化因子的表达密切相关，并与疾病的严重程度直接相关。tslp不仅
4、此外，tslp蛋白的上调与多种过敏性疾病（如湿疹、食物过敏和过敏性鼻炎）密切相关。研究显示，tslp的上调通过tslpr与dc细胞的结合，引发jak/stat信号通路的激活，最终导致th2细胞过度活化和相应因子（如il-4、il-13和il-5）的过度表达，从而诱导th2类炎症反应。这一系列病理变化不仅促进过敏性疾病的进展，还与慢性阻塞性肺疾病（copd）等慢性呼吸道疾病的病程加重密切相关。综上所述，tslp蛋白在多种免疫相关疾病的病理发展中起着至关重要的作用。其在哮喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎及多种恶性肿瘤中的表达与病程进展密切相关。现有技术中未发现针对tslp检测的试剂盒的开发技术，因此迫切需要开发针对tslp蛋白的临床检测方法，这不仅有助于早期诊断这些疾病，也能为治疗靶向策略的制定提供关键参考，为精准医疗提供科学依据。
5、鲨鱼单域抗体（vnars，variable new antigen receptors）由于其独特的结构和生理特性，展示出高热稳定性和高酸稳定性，使其在多个特殊的应用场景中具有应用潜力。
6、因此，本领域有需要开发用于检测tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种高灵敏、宽检测区间、高特异性的tslp蛋白的检测方法。
2、本专利技术提供了一种抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白和融合蛋白组合。
3、本专利技术提供了包含抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合的检测试剂盒及其应用。
4、在本专利技术的第一方面，提供了一种抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，所述融合蛋白包含位于n端的鲨鱼纳米抗体可变区（vnar）部分和位于c端的igg1 fc片段，所述vnar包含具有选自下组的互补决定区cdr和超变环hv：
5、(1) seq id no: 4所示的cdr1；seq id no: 7所示的cdr3；seq id no: 5所示的hv2；和seq id no: 6所示的hv4；和
6、(2) seq id no: 8所示的cdr1；seq id no: 10所示的cdr3；seq id no: 9所示的hv2；和seq id no: 6所示的hv4。
7、在另一优选例中，所述vnar中的cdr1、hv2、hv4和cdr3的位置是基于imgt编码规则确定的。
8、在另一优选例中，所述可变区包括骨架区(fr)。
9、在另一优选例中，所述的vnar的氨基酸序列如seq id no:1或2中任一项所示，或与其具有≥85%、≥90%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%的序列同一性。
10、在另一优选例中，所述的fc片段氨基酸序列如seq id no: 3所示。
11、在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个（如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个）氨基酸并能保留与tslp特异性结合能力的衍生序列。
12、在另一优选例中，所述的经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与tslp特异性结合能力的衍生序列为同源性或序列相同性为至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列。
13、在另一优选例中，所述的融合蛋白的氨基酸序列如seq id no: 11或12所示。
14、在本专利技术的第二方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如本专利技术第一方面所述的鲨鱼纳米抗体融合蛋白。
15、在另一优选例中，所述多核苷酸可为rna、dna或cdna。
16、在本专利技术的第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有如本专利技术第二方面所述的多核苷酸。
17、在另一优选例中，所述表达载体选自下组：dna、rna、病毒载体、质粒、转座子、其他基因转移系统、或其组合。优选地，所述表达载体包括病毒载体，如慢病毒、腺病毒、aav病毒、逆转录病毒、或其组合。
18、在另一优选例中，所述的表达载体中还包括选自下组的：启动子、转录增强元件wpre、长末端重复序列ltr等。
19、在本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如本专利技术第三方面所述的表达载体，或其基因组中整合有如本专利技术第二方面所述的多核苷酸。
20、在另一优选例中，所述宿主细胞包括原核细胞或真核细胞。
21、在另一优选例中，所述宿主细胞选自下组：大肠杆菌、酵母细胞、哺乳动物细胞。
22、在本专利技术的第五方面，提供了一种抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合，所述组合包括融合蛋白s1和s2，所述融合蛋白包含位于n端的鲨鱼纳米抗体可变区（vnar）部分和位于c端的igg1 fc片段，
23、其中，所述融合蛋白s1的vnar包含：
24、seq id no: 4所示的cdr1；seq id no: 7所示的cdr3；seq id no: 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含位于N端的鲨鱼纳米抗体可变区（VNAR）部分和位于C端的IgG1 Fc片段，所述VNAR包含具有选自下组的互补决定区CDR和超变环HV：
2. 如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的VNAR的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或2所示。
3. 如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的Fc片段氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示。
4. 如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11或12所示。
5.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白。
6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如权利要求6所述的表达载体，或其基因组中整合有如权利要求5所述的多核苷酸。>
8. 一种抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合，其特征在于，所述组合包括融合蛋白S1和S2，所述融合蛋白包含位于N端的鲨鱼纳米抗体可变区（VNAR）部分和位于C端的IgG1 Fc片段，
9. 如权利要求8所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合，其特征在于，所述的融合蛋白S1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示；并且所述的融合蛋白S2的氨基酸序列如SEQID NO: 12所示。
10.一种生产鲨鱼纳米抗体融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
11. 一种活性成分的用途，其特征在于，所述活性成分选自下组：如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白、或如权利要求8所述的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合，所述活性成分组合用于制备：
12.一种TSLP蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1所述的抗TSLP的鲨鱼纳米抗体融合蛋白、或如权利要求8所述的鲨鱼纳米抗体融合蛋白组合。
13. 一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：
...【技术特征摘要】
1. 一种抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含位于n端的鲨鱼纳米抗体可变区（vnar）部分和位于c端的igg1 fc片段，所述vnar包含具有选自下组的互补决定区cdr和超变环hv：
2. 如权利要求1所述的抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的vnar的氨基酸序列如seq id no:1或2所示。
3. 如权利要求1所述的抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的fc片段氨基酸序列如seq id no: 3所示。
4. 如权利要求1所述的抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述的抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白的氨基酸序列如seq id no: 11或12所示。
5.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的抗tslp的鲨鱼纳米抗体融合蛋白。
6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如权利要求6所述的表达载体，或其基因组中整合有如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜会春，来庆英，陈健，李丽，蒋立仲，韩倩，王建刚，吴明远，
申请(专利权)人：康立泰生物医药青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：
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