【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开一般涉及生物吸收性(bioabsorbable)颗粒。更具体地，本公开涉及用于医疗治疗的包括聚合物、脂质盐和治疗性mrna的颗粒。
技术介绍
1、医学领域的众多发展导致了对抗疾病的新技术。一种这样的发展是使用mrna作为活性治疗剂。信使rna(mrna)已证明是有效的疫苗，但人们也研究其用于治疗一系列感染和疾病，例如流感、肺结核(tuberculosis)、疟疾(malaria)、肝病、hiv以及癌症，诸如皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌和头部和颈部癌(head and neck cancer)。
2、当前mrna疗法的局限是mrna向细胞的递送机制。目前的递送方法包括将mrna包含在阳离子型脂质中和/或将mrna包含在包含多糖、胆固醇或聚合物(如聚乳酸)的颗粒中。所有目前的递送机制在稳定性和货架期方面都有限制，尤其是在冻结温度(freezingtemperature)以上。目前的递送机制也表现出低负载容量——各递送颗粒中所含mrna数量低——必需要向患者施用更大量的递送颗粒。目前的递送机制还提供了有限的改变施用后治疗性mrna藉由递送机制释放的时间的能力。此外，当前mrna递送机制在mrna释放期间呈现的电荷量高和/或酸度增加也与体内递送位点的炎症增加有关。本申请解决了对改进的治疗性mrna递送机制的需求。
技术实现思路
1、本公开提供了具有治疗性mrna的生物吸收性颗粒(本文中亦称为聚合物微粒)。所述聚合物微粒包含生物吸收性聚合物基质(诸如基于三亚甲基碳酸酯(tmc)的
2、制剂包括多个生物吸收性聚合物微粒，各聚合物微粒均包括：聚合物基质；封装在所述聚合物基质内的治疗性mrna；以及封装在所述聚合物基质内的阳离子型脂质。
3、一种制备聚合物微粒的制剂的方法，所述方法包括以下步骤：将聚合物和阳离子型脂质溶解在溶剂中；向溶解的结构性聚合物和阳离子型脂质添加治疗性mrna，从而产生油溶液；在第一混合中搅拌所述油溶液；向所述油溶液添加水溶液；在第二混合中搅拌所述油溶液；向所述油溶液添加水；从所述油溶液中收集多个颗粒；以及清洁所述多个颗粒。
4、另一种制备聚合物微粒的制剂的方法，所述方法包括以下步骤：将聚合物和阳离子型脂质溶解在溶剂中；向溶解的结构性聚合物和阳离子型脂质添加治疗性mrna，从而产生油溶液；混合、搅拌或超声处理所述油溶液；向所述油溶液添加水溶液；再次混合、搅拌或超声处理所述油溶液；向所述油溶液添加水；从所述油溶液中收集多个颗粒；以及清洁所述多个颗粒。
5、治疗患者的方法，所述方法包括以下步骤：对所述患者递送多个颗粒，各颗粒均包括：聚合物基质；封装在所述聚合物基质内的治疗性mrna；以及封装在所述聚合物基质内的阳离子型脂质，其中,各颗粒中所述阳离子型脂质与所述聚合物基质的比率为约1:4至约1:1重量/重量，并允许所述聚合物基质在所述患者体内生物降解并释放所述治疗性mrna。此外，对于一些实施方式，可不使用阳离子型脂质。
6、制剂包括多个聚合物微粒，所述聚合物微粒可相同或不同，各微粒均包括：聚合物基质；封装在所述聚合物基质内的治疗性mrna；封装在所述聚合物基质内的阳离子型脂质；以及表面聚合物，所述表面聚合物偶联至各生物吸收性颗粒的表面，其中所述表面聚合物包含聚乙二醇(peg)，并且各生物吸收性颗粒均包含至少5重量％的peg。
7、上述实施例仅限于此，且不应被理解为限制或以其他方式缩小本公开以其它方式提供的任何专利技术构思的范围。虽然公开了多个实施例，但从以下示出并描述示例性实施例的详细描述中，其他实施方式对本领域技术人员而言也是显而易见的。因此，认为附图和详细描述本质上是说明性的而非限制性的。
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1.在哺乳动物细胞中产生目标多肽的方法，所述方法包含：使所述哺乳动物细胞与聚合物微粒颗粒接触，所述聚合物微粒颗粒包含基于三亚甲基碳酸酯(TMC)的聚合物和改性mRNA，所述改性mRNA编码封装在所述基于TMC的聚合物内的所述目标多肽，其中所述基于TMC的聚合物包含包括TMC和D/L聚乳酸(D/L-PLA)重复单元的共聚物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述共聚物的D/L-PLA:TMC重量比为3.25:1至0.75:1。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述共聚物包含45-80重量％D/L-PLA和20-55重量％TMC。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述基于TMC的聚合物是包含TMC、D/L-PLA、和聚乙醇酸(PGA)重复单元的三元共聚物。
5.如权利要求1所述的方法，其中各共聚物均被连接在一端处的聚乙二醇(PEG)封端。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述改性mRNA为大于30个核苷酸。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mRNA负载量为至少0.5重量％。
8
9.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mRNA负载量为5重量％至10重量％。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mRNA负载量为10重量％至25重量％。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的封装效率百分比为至少60-70％。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的封装效率百分比为至少75-80％。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为不超过25um
14.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为50至250nm。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为100至300nm。
16.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为300至800nm。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为800至2500nm。
18.如权利要求1所述的方法，其中在4℃至20℃的温度范围下持续至少1天，平均颗粒尺寸变化不超过10％。
19.如权利要求1所述的方法，其中封装在所述聚合物微粒颗粒内的改性mRNA在3℃至7℃的温度范围下持续至少1天降解不超过10％。
20.如权利要求1所述的方法，其中相对于未封装的改性mRNA，封装在所述聚合物微粒颗粒内的改性mRNA在90％血清中稳定。
21.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒使改性mRNA从封装物中延缓释放。
22.如权利要求1所述的方法，其中在48小时时间段中，所述聚合物微粒从封装物中释放小于50％的改性mRNA。
23.在哺乳动物细胞中产生目标多肽的方法，所述方法包含：使所述哺乳动物细胞与聚合物微粒颗粒接触，所述聚合物微粒颗粒包含基于三亚甲基碳酸酯(TMC)的聚合物和改性mRNA，所述改性mRNA编码封装在所述基于TMC的聚合物内的所述目标多肽，其中所述基于TMC的聚合物包含包括TMC、D/L-聚乳酸(D/L-PLA)、和聚乙醇酸(PGA)重复单元的共聚物。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述三元共聚物包含3-19重量％PGA，并且其中TMC:D/L-PLA重量比为3.25:1至0.75:1。
25.如权利要求23所述的方法，其中在48小时时间段中，所述聚合物微粒从封装物中释放小于50％的改性mRNA。
26.在哺乳动物细胞中产生目标多肽的方法，所述方法包含：使所述哺乳动物细胞与聚合物微粒颗粒接触，所述聚合物微粒颗粒包含基于三亚甲基碳酸酯(TMC)的聚合物和改性mRNA，所述改性mRNA编码封装在所述基于TMC的聚合物内的所述目标多肽，其中所述基于TMC的聚合物包含包括TMC和D/L聚乳酸(D/L-PLA)重复单元的共聚物，并且其中各共聚物均被连接在一端处的聚乙二醇(PEG)封端。
27.如权利要求26所述的方法，其中D/L-PLA:TMC共聚物包含1-10重量％的PEG末端封端物，并且其中D/L-PLA:TMC重量比为3:1至12:1。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述共聚物PEG末端封端物位于所述微粒颗粒的外表面上。
29.如权利要求26所述的方...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.在哺乳动物细胞中产生目标多肽的方法，所述方法包含：使所述哺乳动物细胞与聚合物微粒颗粒接触，所述聚合物微粒颗粒包含基于三亚甲基碳酸酯(tmc)的聚合物和改性mrna，所述改性mrna编码封装在所述基于tmc的聚合物内的所述目标多肽，其中所述基于tmc的聚合物包含包括tmc和d/l聚乳酸(d/l-pla)重复单元的共聚物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述共聚物的d/l-pla:tmc重量比为3.25:1至0.75:1。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述共聚物包含45-80重量％d/l-pla和20-55重量％tmc。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述基于tmc的聚合物是包含tmc、d/l-pla、和聚乙醇酸(pga)重复单元的三元共聚物。
5.如权利要求1所述的方法，其中各共聚物均被连接在一端处的聚乙二醇(peg)封端。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述改性mrna为大于30个核苷酸。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mrna负载量为至少0.5重量％。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mrna负载量为0.5重量％至5重量％。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mrna负载量为5重量％至10重量％。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的改性mrna负载量为10重量％至25重量％。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的封装效率百分比为至少60-70％。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的封装效率百分比为至少75-80％。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为不超过25um
14.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为50至250nm。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为100至300nm。
16.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为300至800nm。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒的平均颗粒尺寸为800至2500nm。
18.如权利要求1所述的方法，其中在4℃至20℃的温度范围下持续至少1天，平均颗粒尺寸变化不超过10％。
19.如权利要求1所述的方法，其中封装在所述聚合物微粒颗粒内的改性mrna在3℃至7℃的温度范围下持续至少1天降解不超过10％。
20.如权利要求1所述的方法，其中相对于未封装的改性mrna，封装在所述聚合物微粒颗粒内的改性mrna在90％血清中稳定。
21.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合物微粒颗粒使改性mrna从封装物中延缓释放。
22.如权利要求1所述的方法，其中在48小时时间段中，所述聚合物微粒从封装物...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·L·克里克，K·E·斯图尔特，
申请(专利权)人：WL戈尔及同仁股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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