【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽的制备领域，具体是涉及一种地龙多肽组及其制备方法和应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息旨在增加对本专利技术总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、创面不愈为外科治疗难题，据统计占外科总住院人数的1.5%~3%，而瘢痕的形成是人体组织创伤修复过程中不可避免的产物，其组织学特征在于成纤维细胞的过度增殖和细胞外基质的过度沉淀。瘢痕组织早期过度愈合或后期过度萎缩均会对机体产生不良影响，如皮肤外观改变及功能障碍等。而发于下肢的难愈性创面又因其易溃、难敛、易反复发作、病程长、严重者导致骨髓炎、少数有癌变可能等特点，严重影响患者的生活质量及身心健康，已经成为临床亟待解决的问题。
3、对于创面的治疗西医多集中于抗感染、生物敷料、负压吸引治疗、抗生素骨水泥、高压氧、植皮及皮瓣修复、手术等治疗措施，有一定疗效，但缺乏安全有效的加速创面愈合的积极措施。所以，寻找一种温和的替代药物对于治疗创面来说至关重要。
技术实现思路
1、为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种地龙多肽组及其制备方法和应用，该地龙多肽组可用于制备皮肤创面愈合或消除瘢痕药物，该应用消除了服用异蛋白等引起的免疫原反应，减小了不良反应发生率。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种地龙多肽组，所述多肽组由特征多肽1和特征多肽2组成；其中特征多肽1的氨基酸序列为valsviqr
4、进一步地，上述地龙多肽组的制备方法，采用以下步骤：
5、（1）将地龙粉碎过筛，加水，加热煮沸；
6、（2）将步骤（1）得到的混合溶液冷却后，调节ph值，酶解，煮沸后，分离纯化；
7、（3）将步骤（2）得到的纯化样品处理后进行lc-tof-ms分析，得出活性多肽valsviqr（seq id no.1）和活性多肽vipslngk（seq id no.2）。
8、进一步地，所述valsviqr（seq id no.1），命名为vr-8，即异缬氨酸-丙氨酸-亮氨酸-丝氨酸-缬氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-精氨酸，分子量为884.54 da，等电点为11.11，疏水指数为8.15 kcal·mol-1，水溶性较好。
9、进一步地，所述vipslngk（seq id no.2），命名为vk-8，即缬氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-丝氨酸-亮氨酸-天冬酰-甘氨酸-赖氨酸，分子量为826.49 da，等电点为10.14，疏水指数为10.47 kcal·mol-1，水溶性较好。
10、进一步地，步骤（2）中，所述酶解的方法为：混合溶液加热煮沸后，冷至约35～45℃，调节ph值1.0～3.0，加入0.5～2%胃蛋白酶，40℃酶解1 h，调节ph值7.0～9.0，加入0.5～2%胰蛋白酶，保温3～5 h，煮沸10～15 min；所述分离纯化为3500～4500 rpm离心15～20min，电渗析或透析袋脱盐后，上清液通过3 kd超滤膜超滤，进行阳离子树脂和rp-hplc半制备分离纯化。
11、进一步地，步骤（3）所述的lc-tof-ms分析的纳升液相色谱分析柱条件：c18反相分析柱75 mm×20 cm×3 µm；流动相a：99.9%水和0.1%甲酸混合液，流动相b：80%乙腈和0.1%甲酸混合液；液相梯度洗脱为：0-2 min，2-6% b；2-95 min，6-20% b；95-107 min，20%-32%b；107-108 min，32-100% b；108-120 min，100% b；流动相流速为300 nl/min；esi+模式，采用数据依赖性扫描模式，在分辨率为70000(agc 3e6)的轨道阱中进行全扫描采集(m/z350-1800)，标准化碰撞能（nce）为28.0，毛细管的温度是275℃，喷雾电压是1800 v，ms2分辨率为17500 (agc 1e5)，全扫描和ms2扫描的最大填充时间分别设置为50 ms和45 ms，动态排除时间设置为30 s。
12、进一步地，步骤（1）中，所述地龙粉碎过筛的标准目数为80目；所述加水质量为地龙质量的8～12倍；所述加热煮沸时间为15～30 min。
13、一种上述地龙特征多肽组的应用，其特征在于，所述地龙肽多肽组可用于制备皮肤创面愈合或消除瘢痕的药物。
14、进一步地，所述药物包括所述地龙特征多肽组以及药学上可接受的辅料。
15、进一步地，所述辅料为制备水浸剂、粉剂、洗剂、酊剂、油剂、乳剂、软膏、硬膏或气雾剂中的一种所需的辅料。
16、一种上述地龙特征多肽组的应用，所述地龙肽多肽组用于制备皮肤创面愈合或消除瘢痕的药物。
17、进一步地，所述药物包括所述地龙特征多肽组以及药学上可接受的辅料。
18、优选地，所述辅料为制备水浸剂、粉剂、洗剂、酊剂、油剂、乳剂、软膏、硬膏或气雾剂中的一种所需的辅料。
19、有益效果：（1）本专利技术所述的多肽vr-8和vk-8纯度高，安全有效，消除了服用异蛋白引起的免疫原反应，减小了不良反应发生率。
20、（2）现有技术中并没有公开联合使用vr-8肽和vk-8肽用于治疗皮肤创面及瘢痕的报道，本专利技术为研究开发一种新型的治疗药物提供了参考。
21、（3）本专利技术的2种多肽结构是地龙仿生酶解小分子肽类经精制纯化并经分析得到的高含量、高活性的小分子生物活性肽成分，此2种小分子生物活性肽成分为首次发现，未见有关报道。
22、（4）本专利技术对地龙多肽的研究证实了其治疗皮肤创面及瘢痕的药用价值，为临床应用地龙肽治疗皮肤创面及瘢痕提供了坚实的基础，为动物药活性肽物质的开发提供了数据支持。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种地龙多肽组，其特征在于，所述多肽组由特征多肽1和特征多肽2组成；其中特征多肽1的氨基酸序列为VALSVIQR，特征多肽2的氨基酸序列为VIPSLNGK。
2.一种权利要求1所述地龙多肽组的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶解的方法为：混合溶液加热煮沸后，冷却至35～45℃，调节pH值为1.0～3.0，加入0.5～2%胃蛋白酶，40℃酶解1 h，调节pH值为7.0～9.0，加入0.5～2%胰蛋白酶，保温3～5 h，煮沸10～15 min。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述分离纯化的方法为采用3500～4500 rpm离心15～20 min，电渗析或透析袋脱盐后，上清液通过3 KD超滤膜超滤，进行阳离子树脂和RP-HPLC半制备分离纯化。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述LC-TOF-MS分析采用纳升液相色谱分析柱，分析条件为：C18反相分析柱75 mm×20 cm×3μm；流动相A：99.9%水
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，将步骤（2）得到的纯化样品处理的方法为：取1-5 mg纯化样品加入200 µL 25 mM碳酸氢铵溶液溶解，加入2 µL 1 M的DTT 60℃水浴放置>40 min，再加入8 µL新鲜配置的1 M碘乙酰胺，室温避光放置30 min。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述地龙粉碎过筛的标准目数为80目；所述加水的操作为加入地龙质量8～12倍的水；所述加热煮沸时间为15～30min。
8.一种权利要求1所述地龙多肽组的应用，其特征在于，所述地龙多肽组用于制备皮肤创面愈合或消除瘢痕的药物。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物包括所述地龙多肽组以及药学上可接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述辅料为制备水浸剂、粉剂、洗剂、酊剂、油剂、乳剂、软膏、硬膏或气雾剂中的一种所需的辅料。
...【技术特征摘要】
1.一种地龙多肽组，其特征在于，所述多肽组由特征多肽1和特征多肽2组成；其中特征多肽1的氨基酸序列为valsviqr，特征多肽2的氨基酸序列为vipslngk。
2.一种权利要求1所述地龙多肽组的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶解的方法为：混合溶液加热煮沸后，冷却至35～45℃，调节ph值为1.0～3.0，加入0.5～2%胃蛋白酶，40℃酶解1 h，调节ph值为7.0～9.0，加入0.5～2%胰蛋白酶，保温3～5 h，煮沸10～15 min。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述分离纯化的方法为采用3500～4500 rpm离心15～20 min，电渗析或透析袋脱盐后，上清液通过3 kd超滤膜超滤，进行阳离子树脂和rp-hplc半制备分离纯化。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述lc-tof-ms分析采用纳升液相色谱分析柱，分析条件为：c18反相分析柱75 mm×20 cm×3μm；流动相a：99.9%水和0.1%甲酸混合液，流动相b：80%乙腈和 0.1%甲酸混合液；液相梯度洗脱为：0-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：高鹏，李亚男，徐天任，于小钧，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。