【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫荧光染色检测，涉及一种基于免疫荧光染色检测双链rna的方法。
技术介绍
1、病毒感染以及机体内源性产生的双链rna可以激活先天免疫系统。神经系统中适当程度的双链rna的水平对于维持神经元的正常免疫应答至关重要。通过免疫荧光染色的方法可以反应出双链rna的水平及其细胞定位，是研究神经系统先天免疫反应的一项重要证据。
2、目前主要通过免疫荧光染色方法检测双链rna，免疫荧光染色技术步骤中样品固定的条件及操作对荧光染色结果十分重要。目前针对双链rna的免疫荧光染色方法主要采用4％多聚甲醛固定液进行样品固定。细胞水平检测双链rna时，使用4％多聚甲醛固定液，固定20分钟，进行后续染色步骤。在脑组织水平检测双链rna时，使用4％多聚甲醛固定液进行灌流固定，再经30％蔗糖溶液进行沉糖脱水后切片染色。然而，现有方法染色结果中，当以双链rna酶处理样本做为阴性对照时，双链rna酶处理后的样本的信号在与未进行双链rna酶处理的组别对比，并没有明显减弱，一方面可能是由于固定过度，使双链rna酶无法降解双链rna分子，无法确认阴性对照结果正确，另一方面，存在双链rna抗体非特异结合的可能，无法保证双链rna信号的真阳性。
3、综上所述，目前常用免疫荧光染色方法存在无法准确检测阴性对照结果的问题，亟需开发新的免疫荧光染色方法，以实现准确检测组织水平双链rna信号。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，实现检
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，所述方法包括：
4、取组织切片，利用无水甲醇对所述组织切片进行固定处理，进行封闭处理、染色处理，检测荧光信号。
5、本专利技术设计全新的免疫荧光染色检测双链rna的方法，使用无水甲醇固定组织切片，能够使双链rna信号清晰均匀，且当利用双链rna酶处理固定后组织切片作为阴性对照时，能够准确检测出该阴性对照，充分明确双链rna信号的真阳性，最终有效检测双链rna的水平及其细胞定位。
6、可以理解，本专利技术中免疫荧光染色检测双链rna的方法既可用于疾病诊断领域，也可应用于非疾病诊断领域，如双链rna相关机制的基础研究等，可对组织切片直接进行处理。
7、优选地，所述组织切片的制备方法包括：取组织，进行速冻处理和切片处理，获得组织切片。
8、本专利技术中可对组织速冻后进行切片，显著简化流程，降低操作难度。
9、优选地，所述速冻处理包括将组织置于干冰中进行速冻。
10、优选地，所述组织切片的厚度为10～20μm，包括但不限于11、12、13、14、15、16、17、18或19μm等。
11、优选地，所述切片处理的温度为-22℃～-20℃。
12、优选地，所述固定处理包括：
13、将所述组织切片置于无水甲醇中浸泡。
14、优选地，所述浸泡的时间为30～35s，如31、32、33或34s等，浸泡的温度为-25～-15℃，包括但不限于-24、-23、-22、-20、-18或-16℃等。
15、优选地，所述组织包括脑组织。
16、本专利技术基于免疫荧光染色检测双链rna的方法可对离体组织如脑组织等进行检测，双链rna信号清晰均匀，能同时反应双链rna的水平及其细胞定位，是研究神经系统先天免疫反应的重要技术手段。
17、优选地，所述方法还包括设置阴性对照组的步骤。
18、所述设置阴性对照组包括：
19、利用双链rna酶处理固定后的组织切片，作为阴性对照组，进行封闭、染色处理，检测荧光信号。
20、优选地，所述双链rna酶处理的时间为0.5～1h，如0.6、0.7、0.8或0.9h等，温度为35～38℃，如36或37℃等。
21、可以理解，本专利技术设计特定的切片和固定处理方法，在此基础上，本领域通用的封闭、染色处理方法均适用于本专利技术。
22、优选地，所述封闭处理使用的封闭液包括含bsa、triton x-100和山羊血清的pbs溶液。
23、优选地，所述封闭处理的时间为1～2h。
24、优选地，所述染色处理包括利用一抗和二抗进行孵育。
25、优选地，所述封闭处理前还包括透化处理的步骤。
26、优选地，所述透化处理包括利用含triton x-100的pbs溶液处理。
27、作为优选的技术方案，所述基于免疫荧光染色检测双链rna的方法包括以下步骤：
28、(1)取组织，将组织置于干冰中进行速冻处理，将速冻处理后组织于-22℃～-20℃进行切片处理，获得组织切片；
29、(2)将步骤(1)获得组织切片置于-20℃无水甲醇中浸泡，进行固定处理；
30、(3)利用含triton x-100的pbs溶液对步骤(2)固定处理后组织切片进行透化处理；
31、(4)利用双链rna酶处理步骤(3)透化处理后组织切片，作为阴性对照组；以未经双链rna酶处理的步骤(3)透化处理后组织切片作为实验组；
32、利用含bsa、triton x-100和山羊血清的pbs溶液分别对实验组和阴性对照组组织切片进行封闭处理；利用一抗和二抗进行孵育，进行染色处理；检测荧光信号。
33、与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果：
34、本专利技术设计全新的免疫荧光染色检测双链rna的方法，使用无水甲醇固定组织切片，能够使双链rna信号清晰均匀，并且在使用双链rna酶处理作为阴性对照时，双链rna的信号与未进行双链rna酶处理的组别相比明显减弱，充分明确双链rna信号的真阳性，有效检测双链rna的水平及其细胞定位，此外，显著简化操作流程、降低操作难度，可作为研究神经系统先天免疫反应等的重要技术手段。
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1.一种基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述组织切片的制备方法包括：取组织，进行速冻处理和切片处理，获得组织切片；
3.根据权利要求2所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述组织切片的厚度为10～20μm；
4.根据权利要求1-3任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述固定处理包括：
5.根据权利要求4所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述浸泡的时间为30～35s，浸泡的温度为-25℃～-15℃。
6.根据权利要求1-5任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述组织包括脑组织。
7.根据权利要求1-6任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述方法还包括设置阴性对照组的步骤；
8.根据权利要求7所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述双链RNA酶处理的时间为0
9.根据权利要求1-8任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述封闭处理使用的封闭液包括含BSA、Triton X-100和山羊血清的PBS溶液；
10.根据权利要求1-9任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链RNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，其特征在于，所述组织切片的制备方法包括：取组织，进行速冻处理和切片处理，获得组织切片；
3.根据权利要求2所述的基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，其特征在于，所述组织切片的厚度为10～20μm；
4.根据权利要求1-3任一项所述的基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，其特征在于，所述固定处理包括：
5.根据权利要求4所述的基于免疫荧光染色检测双链rna的方法，其特征在于，所述浸泡的时间为30～35s，浸泡的温度为-25℃～-15℃。
6.根据权利要求1-5任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：张乐怡，吴敏，周涛，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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