【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种工业化制备高含量的18β-甘草酸的方法及其含量测定方法
技术介绍
1、甘草，为豆科植物甘草glycyrrhiza uralensis fisch.、胀果甘草glycyrrhizainflata bat.或光果甘草glycyrrhiza glabra l.的干燥根和根茎。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。
2、甘草酸(glycyrrhizic acid)，也称甘草皂苷，为生药甘草重要的活性成分。天然甘草酸主要由顺式甘草酸(18β-甘草酸)和少量反式甘草酸(18α-甘草酸)组成。甘草酸具有广泛的药理活性，在体内水解成苷元——甘草次酸(glycyrrhetinic acid)。研究表明，甘草次酸具有抑制11β-hsd酶的活性，从而使血浆氢化可的松水平提高。18β-甘草次酸对11β-hsd酶半数抑制浓度ic50为0.3μm，18α-甘草次酸的ic50为3.0μm，即18β-甘草酸的类固醇样作用强于18α-甘草酸；此外，18β-甘草酸具有抗补体活性作用，其水解产物18β-甘草次酸是补体经典途径抑制剂(ic50＝35μm)，而18α-甘草次酸无这种活性；体外试验显示，甘草次酸具有促肝细胞增殖的作用，且18β-甘草次酸的作用强于18α-甘草次酸，半数有效剂量ed50的排列顺序是：18β-甘草次酸(ed50＝4.5nm)<18β-甘草酸(ed50＝44nm)<18α-甘草次酸(ed50＝60nm)<18α-甘草酸。另外，18β-甘草酸安全性得到长期临床应用的
3、生药甘草中含有的甘草酸类成分结构多样，并存在较多的同分异构体，现有质控方法可对相关原料中18α-甘草酸和18β-甘草酸进行分离并可对有关物质如甘草皂苷g2和甘草皂苷h2进行控制。但是迫切的需要进一步的优化分析方法，开发了一种不仅可对18α-甘草酸、甘草皂苷g2和甘草皂苷h2进行有效分离，还可针对与18β-甘草酸具有较相似的极性，不易进行色谱分离的有关物质如rt17.4进行分离和控制，使得18β-甘草酸的纯度和含量进一步的提高，满足用药安全。
4、专利cn 107759655b公开了一种高效分离纯化高纯度甘草酸的方法。采用亲水固相萃取和反相制备高效液相色谱从甘草提取物中高效分离纯化甘草酸。该专利制备方法选用的c18柱均是实验室半制备级别(mg)，不适用于工业化放大生产。并且按照公开的高效液相制备条件，无法实现甘草酸中rt17.4有关物质的有效区分和控制，18β-甘草酸含量低于95％。
5、专利cn111057124a公开了一种甘草酸盐的除杂方法，该除杂方法能够保证甘草酸盐较高收率的前提下，高效的降低甘草酸盐中的(18β，20β)-24-羟基-甘草酸(甘草皂苷g2)和18α-甘草酸或18β，20α-甘草酸(甘草皂苷h2)的含量。该专利选用混合型盐及溶剂精制，得到甘草酸的混合盐，且有关物质如甘草皂苷g2占比相对较高，rt17.4有关物质未进行区分，无法达到高纯度和高含量的要求。
6、专利cn 111217883公开了一种采用匀浆-超声器提取，50％～60％乙醇，浓缩液上100～200目聚酰胺树脂柱，洗脱，收集，浓缩，干燥，该专利的工艺周期长，成本高，未对18β-甘草酸及各有关物质进行有效区分，无法得到高含量成品。
7、专利cn107118252b公开了一种甘草酸的制备方法，该专利技术的制备方法工艺周期长、成本高，大孔树脂分离纯化后含量只能在50％左右，无法实现高含量的甘草酸的制备。
8、含量高于98％的18β-游离甘草酸的提取制备方法国内外均未有生产工艺公开报道。因此，需要开发一种可以实现提取制备出高含量18β-甘草酸，并且适合工业化大生产的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法
2、本专利技术的还一个目的在于提供一种18β-甘草酸的含量测定方法。
3、本专利技术提供的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法是通过如下技术方案实现的。
4、甘草酸盐经过精制、游离、反相色谱制备、结晶制备得到18β-甘草酸含量在98％以上。
5、所述的甘草酸盐可以通过市售购买或制备得到。
6、方法一：
7、从药材预处理开始，则需要经过如下步骤：
8、所述方法经过药材预处理、提取、成盐、精制、游离、反相色谱制备、结晶等步骤制备18β-甘草酸含量在98％以上。
9、1)预处理：取甘草药材，或取甘草饮片。
10、2)提取：加入提取溶剂提取，提取液浓缩。
11、3)成盐：浓缩液中加入酸调ph值，搅拌，过滤，滤饼干燥后得甘草酸粗品；所得粗品溶解后使之成盐，得甘草酸盐粗品。
12、4)精制：甘草酸盐粗品精制。
13、5)游离：将精制后甘草酸盐溶解后加入盐酸调ph值，室温下析晶，过滤，干燥得甘草酸粗品。
14、6)反相色谱制备：甘草酸粗品经轴向增压反相c18柱色谱制备得18β-甘草酸。
15、7)结晶：甘草酸析晶得到18β-甘草酸成品，含量高于98％。
16、所述的制备方法优选如下步骤：
17、1)预处理：取甘草药材，切割成3～5mm厚片；或取甘草饮片。
18、2)提取：甘草饮片加入提取溶剂，提取3～6次，每次0.5～2小时，提取液经滤布滤过，合并滤液，浓缩。
19、3)成盐：浓缩液中加入盐酸调ph值，室温搅拌，过滤，滤饼干燥后得甘草酸粗品；所得粗品溶解，加入相应的盐，搅拌，过滤，滤饼经减压干燥，得甘草酸盐粗品。所述甘草酸盐选自甘草酸钾盐、甘草酸钠盐、甘草酸铵盐、甘草酸镁盐、甘草酸钙盐、甘草酸锌盐。可以通过加入乙酸钾、氢氧化钾、碳酸钾、氯化铵、醋酸铵等成盐，得到相应的甘草酸盐粗品，优选通过加入乙酸钾得甘草酸钾盐粗品。
20、4)精制：甘草酸盐粗品中加入有机溶剂，加热至粗品完全溶解，停止加热，室温搅拌析晶，过滤，滤饼干燥。精制2～6次。
21、5)游离：量取一定量纯净水，搅拌升温至60～70℃，将精制后甘草酸盐分批加入，至完全溶解，停止加热，加入盐酸调ph值，室温继续搅拌2～4小时析晶，过滤，滤饼干燥。
22、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
4.如权利要求2或3所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
5.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述步骤2)提取所用提取溶剂选自碳酸钠水溶液、碳酸氢钠或氨水。
6.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述步骤3)成盐粗品溶解所用溶剂为乙酸、无水乙醇或2-甲基四氢呋喃，加热温度为25～60℃；所述粗品溶解后加入乙酸钾、氢氧化钾、碳酸钾、氯化铵或醋酸铵成盐。
7.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述精制步骤4)所用的溶剂选自乙酸水溶液、丙酸水溶液、无
8.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述步骤7)结晶溶解所用溶剂为无水乙醇或2-甲基四氢呋喃，所述加热温度为25-80℃。
9.一种18β-甘草酸的含量测定方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，所述的色谱条件为：
10.如权利要求9所述的一种18β-甘草酸的含量测定方法，其特征在于，所述的柱温为30℃；进样体积10μL；所述的检测波长为252nm。
...【技术特征摘要】
1.一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
4.如权利要求2或3所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
5.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述步骤2)提取所用提取溶剂选自碳酸钠水溶液、碳酸氢钠或氨水。
6.如权利要求2-4任一项所述的一种工业化制备高含量18β-甘草酸的方法，其特征在于，所述步骤3)成盐粗品溶解所用溶剂为乙酸、无水乙醇或2-...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡杰，扈靖，臧新钰，张建平，赵东颖，
申请(专利权)人：盈科瑞横琴药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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