【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析，具体地，涉及一种布噻嗪半抗原、人工抗原及其应用。
技术介绍
1、布噻嗪(6-chloro-3,4-dihydro-3-isobutyl-1,2,4-benzothiadiazine-7-sulphonamide1,1-dioxide，c11h16n3o4s2cl)是一种噻嗪类中效利尿剂，主要用于临床医学中的高血压治疗。其作用于始端远曲小管管腔膜上皮细胞na+、cl-协同转运载体，抑制na+、cl-的重吸收，影响肾脏的稀释功能，进而产生利尿作用。然而，长期服用布噻嗪会影响尿酸排泄，导致体内尿酸水平升高，诱发痛风，还会诱发糖耐量异常甚至糖尿病。因此为加强布噻嗪的监管，有必要建立操作简便、灵敏度高、准确性强的布噻嗪快速检测方法。
2、免疫层析法具有较高的灵敏度、特异性，能实现目标分析物的定量和高通量检测，具有目视快速、现场方便、成本低等优点，在快速诊断领域中被广泛应用。半抗原是建立免疫分析方法的关键所在，目前尚无能产生特异性抗体的布噻嗪半抗原。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供了一种布噻嗪半抗原、人工抗原及其应用。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种布噻嗪半抗原。
3、本专利技术的第二个目的是提供结构式如式(ⅰ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
4、
5、
6、本专利技术的第三个目的是提供一种布噻嗪人工抗原。
7、本
8、本专利技术的第五个目的是提供结构式如式(ⅱ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
9、
10、本专利技术的第六个目的是提供另一种布噻嗪人工抗原。
11、本专利技术的第七个目的是提供所述布噻嗪人工抗原在制备检测布噻嗪的抗体中的应用。
12、本专利技术的第八个目的是提供一种布噻嗪人工抗原组合。
13、本专利技术的第九个目的是提供所述布噻嗪人工抗原组合在检测布噻嗪或在制备检测布噻嗪的产品中的应用。
14、本专利技术的第十个目的是提供一种检测布噻嗪的试剂盒。
15、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
16、本专利技术的基于布噻嗪的结构类似物三氯噻嗪，通过化学修饰，将其与溴丙酸乙酯碳链手臂连接，构建得到布噻嗪半抗原，可直接与载体蛋白偶联作为免疫原使用；同时，其与载体蛋白连接时连接臂长度适中，进而使得其与载体蛋白连接后充分暴露其特异性结合位点，产生的抗体灵敏度高，特异性强。
17、一种布噻嗪半抗原，即btz-3c，其结构式如式(ⅰ)所示，
18、
19、所述布噻嗪半抗原btz-3c的制备方法，包括以下步骤：将三氯甲噻嗪和溴丙酸乙酯按照摩尔比1：(1.2～1.6)，在碱性条件下充分反应，所得产物通过柱层析进行分离纯化，所得纯化产物在酸性环境下充分水解，即得；所述柱层析的展开剂为：体积比计，石油醚：乙酸乙酯：三乙胺＝188：36：10。
20、优选地，所述三氯甲噻嗪和溴丙酸乙酯的摩尔比为1：1.4。
21、优选地，在反应开始前，先用氢化钠活化所述三氯甲噻嗪，所述氢化钠和所述三氯甲噻嗪的摩尔比为(1.2～1.6):1。
22、更优选地，所述氢化钠和所述三氯甲噻嗪的摩尔比为1.4:1。
23、具体的，所述布噻嗪半抗原btz-3c的制备方法，包括以下步骤：
24、将379mg三氯甲噻嗪溶于5ml色谱级n,n-二甲基甲酰胺，再加入28.8mg氢化钠，0℃冰浴下搅拌60min，得到活化的三氯甲噻嗪；将活化的三氯甲噻嗪与254μl溴丙酸乙酯，在室温下反应搅拌12h；反应结束后，使用饱和氯化钠溶液萃取粗产物，取油相使用旋转蒸发器旋干，再加入15ml乙酸乙酯和50g的硅胶粉混合后旋干，使用展开剂(体积比计，石油醚：乙酸乙酯：三乙胺＝188：36：10)通过柱层析法纯化，即得到纯净的中间产物；将所得中间产物溶于5ml甲醇，按照甲醇与稀盐酸溶液的体积比为1:1，加入1m稀盐酸溶液，在室温下搅拌反应，用tcl板监测产物是否水解完全，待产物的酯基完全水解后停止反应；旋转蒸发干所得反应溶液中的有机溶剂，调节ph至5～6，加入饱和食盐水，用乙酸乙酯和水按体积比为1:1进行萃取，充分振荡，收集有机相，经无水硫酸钠干燥后，旋蒸除去有机溶剂，即得。
25、结构式如式(ⅰ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用也应在本专利技术的保护范围之内，
26、
27、一种布噻嗪人工抗原，由所述布噻嗪半抗原btz-3c偶联载体蛋白得到，其结构式如式(ⅲ)所示，
28、
29、其中，protein为载体蛋白。
30、优选地，所述布噻嗪人工抗原由所述布噻嗪半抗原btz-3c通过活泼酯法偶联载体蛋白得到。
31、优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。
32、另一种布噻嗪半抗原，即btz-4c，其结构式如式(ⅱ)所示，
33、
34、布噻嗪半抗原btz-4c的制备方法与btz-3c的制备方法基本相同，区别在于：溴丙酸乙酯替换为溴丁酸乙酯；展开剂替换为：按体积计，石油醚：乙酸乙酯：三乙胺＝188：28：10。
35、结构式如式(ⅱ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用也应在本专利技术的保护范围之内，
36、
37、另一种布噻嗪人工抗原，由所述布噻嗪半抗原btz-4c偶联载体蛋白得到，其结构式如式(ⅳ)所示：
38、
39、其中，protein为载体蛋白。
40、优选地，所述布噻嗪人工抗原由所述布噻嗪半抗原btz-4c通过活泼酯法偶联载体蛋白得到。
41、优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。
42、任一所述布噻嗪人工抗原在制备检测布噻嗪的抗体中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
43、优选地，所述抗体为多克隆抗体。
44、任一所述布噻嗪人工抗原在检测布噻嗪中的应用也应在本专利技术的保护范围之内，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
45、任一所述布噻嗪人工抗原在制备检测布噻嗪的产品中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
46、一种布噻嗪人工抗原组合，包含包被原和免疫原，所述包被原由所述布噻嗪半抗原btz-3c或btz-4c偶联鸡卵白蛋白得到；所述免疫原由所述布噻嗪半抗原btz-3c或btz-4c偶联牛血清白蛋白得到。
47、优选地，所述包被原由所述布噻嗪半抗原btz-3c偶联鸡卵白蛋白得到；所述免疫原由所述布噻嗪半抗原btz-3c偶联牛血清白蛋白得到。
48、所述布噻嗪人工抗原组合在检测布噻嗪中的应用也应在本专利技术的保护范围之内，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
49、所述布噻嗪人工本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种布噻嗪半抗原，其特征在于，其结构式如式(Ⅰ)所示，
2.结构式如式(Ⅰ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
3.一种布噻嗪人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述布噻嗪半抗原偶联载体蛋白得到，其结构式如式(Ⅲ)所示，
4.一种布噻嗪半抗原，其特征在于，其结构式如式(Ⅱ)所示，
5.结构式如式(Ⅱ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
6.一种布噻嗪人工抗原，其特征在于，由权利要求4所述布噻嗪半抗原偶联载体蛋白得到，其结构式如式(Ⅳ)所示，
7.权利要求3或6所述布噻嗪人工抗原在制备检测布噻嗪的抗体中的应用。
8.一种布噻嗪人工抗原组合，其特征在于，包含包被原和免疫原，所述包被原由权利要求1或4所述布噻嗪半抗原偶联鸡卵白蛋白得到；所述免疫原由权利要求1或4所述布噻嗪半抗原偶联牛血清白蛋白得到。
9.权利要求8所述布噻嗪人工抗原组合在检测布噻嗪或在制备检测布噻嗪的产品中的应用。
10.一种检测布噻嗪的试剂盒，其特征在于，包含权利要求8所述布噻嗪人工抗原组合。
...【技术特征摘要】
1.一种布噻嗪半抗原，其特征在于，其结构式如式(ⅰ)所示，
2.结构式如式(ⅰ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
3.一种布噻嗪人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述布噻嗪半抗原偶联载体蛋白得到，其结构式如式(ⅲ)所示，
4.一种布噻嗪半抗原，其特征在于，其结构式如式(ⅱ)所示，
5.结构式如式(ⅱ)所示的化合物在制备布噻嗪人工抗原中的应用，
6.一种布噻嗪人工抗原，其特征在于，由权利要求4所述布噻嗪半抗原偶联载体蛋白得到，...
【专利技术属性】
技术研发人员：雷红涛，李云龙，刘志威，潘康亮，关甜，陈佳虹，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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