【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种重组乳酸乳球菌菌株的制备方法及其应用。
技术介绍
1、鸭源新型鹅细小病主要由新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus，ngpv)感染引起，是危害养鸭业最重要的烈性传染病之一。该病以急性肝损伤为特征，雏鸭患病僵鸭率高达80％。“cn 108939063 b一种番鸭三联灭活疫苗”提供一种鸭2型腺病毒、鹅细小病毒病、番鸭细小病毒病三联灭活疫苗，对鸭群提供免疫保护。“cn 103272230 b番鸭专用的三联活疫苗”，公开了番鸭专用的三联疫苗，该番鸭专用的三联疫苗以番鸭肝白点病弱毒mwca株、番鸭细小病毒弱毒p1株和番鸭源鹅细小病毒弱毒d株为种毒，免疫接种可预防和控制番鸭小鹅瘟病。虽然已有疫苗和卵黄抗体用于该病的预防和治疗，但免疫失败时有发生，严重妨碍了我国养鸭业的健康发展。目前商业化的疫苗在疫病防控方面存在病原变异、弱毒活疫苗免疫失败等缺陷。
2、微生态制剂(probioties)，也叫活菌制剂(bigone)或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。微生态制剂能够通过饮水饲喂进行免疫，该方式被认为是一种易接受的免疫接种方式，微生态制剂给药途径方便安全，可同时快速开展大群免疫，既能避免对机体造成应激，同时又能节省劳动力，降低免疫成本，保护机体抵抗病原侵袭。虽然微生态制剂具有上述优点，但是当前利用新型鹅细小病毒制备乳酸乳球菌微生态制剂用于病毒防治未见报道。
技术实现思路>
1、针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种重组乳酸乳球菌的制备方法及其应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供一种ngpv抗原，所述ngpv抗原含有vp2-123基因，所述vp2-123基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
4、本专利技术的第二方面，提供一种重组质粒，所述重组质粒含有所述ngpv抗原基因。
5、本专利技术的第三方面，提供一种重组乳酸乳球菌菌株，所述重组乳酸乳球菌菌株含有所述ngpv抗原基因。
6、本专利技术的第四方面，提供所述重组乳酸乳球菌菌株的制备方法，步骤如下：
7、将t7g10l-usp45-pgsa'、目的基因和egfp融合在一起，获得具有pmg36e同源臂的融合基因；融合基因插入质粒pmg36e中，得到重组质粒；将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中；筛选出阳性质粒并二次转化至乳酸乳球菌mg1363，获得重组乳酸乳球菌菌株；
8、所述目的基因为vp2-123基因，所述vp2-123基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
9、本专利技术的第五方面，提供所述重组抗原、所述重组质粒或所述重组乳酸乳球菌菌株在制备重组乳酸乳球菌微生态制剂中的应用。
10、进一步的，所述重组乳酸乳球菌微生态制剂可以用于制备治疗或预防新型鹅细小病毒产品。
11、本专利技术的第六方面，提供一种含有所述重组抗原、所述重组质粒或所述重组乳酸乳球菌菌株的微生态制剂。
12、本专利技术的第七方面，提供所述重组乳酸乳球菌菌株的微生态制剂在制备治疗或预防新型鹅细小病毒产品中的应用。
13、本专利技术的第八方面，提供所述的微生态制剂的制备方法，将所述重组乳酸乳球菌菌株冻干，获得微生态制剂。
14、本专利技术的有益效果：
15、本专利技术成功构建了表达新型鹅细小病毒vp2(vp2-1、vp2-2、vp2-3、vp2-123)融合蛋白的乳酸乳球菌菌株，该菌株可将融合蛋白高效固定在重组乳酸乳球菌表面，无需诱导即可稳定表达。经口服免疫后，在重组乳酸菌菌株鸭体内检测到了明显升高的特异性抗体igg以及肠粘膜siga，显著降低了ngpv感染鸭的发病率和僵鸭率。口服免疫后，鸭血常规显示重组乳酸菌菌株鸭组的白细胞及淋巴细胞较其他组均有一段时间的上调，说明该菌增强了机体免疫系统的免疫反应；雏鸭肝脾肾肺肠及血液中病毒载量均有所下降，病理切片显示重组菌组雏鸭组织器官损伤程度明显减弱，表明重组菌有效阻止了ngpv的病毒增殖。
16、此外，专利技术人利用vp2的抗原表位(vp2-1、vp2-2、vp2-3)串联构建了vp2-123，虽然免疫情况最优的仍为mg1363/vp2组，但是mg1363/vp2-123组与其相差不大，由于vp2-123只是使用了vp2基因中的三个抗原表位，vp2-123的免疫原性与使用全长序列vp2接近，但是vp2-123长度有所降低，因而较短的基因复制效率得到了提升，减少了蛋白表达过程中的出错概率，降低了生产过程中原料的使用量和成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种NGPV抗原，其特征在于，所述NGPV抗原含有VP2-123基因，所述VP2-123基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
2.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有权利要求1所述NGPV抗原。
3.一种重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述重组乳酸乳球菌菌株含有权利要求1所述NGPV抗原。
4.权利要求3所述重组乳酸乳球菌菌株的制备方法，其特征在于，步骤如下：
5.权利要求1所述重组抗原、权利要求2所述重组质粒或权利要求3所述重组乳酸乳球菌菌株在制备重组乳酸乳球菌微生态制剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述重组乳酸乳球菌微生态制剂可以用于制备治疗或预防新型鹅细小病毒产品。
7.一种含有权利要求1所述重组抗原、权利要求2所述重组质粒或权利要求3所述重组乳酸乳球菌菌株的微生态制剂。
8.权利要求7所述重组乳酸乳球菌菌株的微生态制剂在制备治疗或预防新型鹅细小病毒产品中的应用。
9.权利要求7所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，将权利要求3所述重
...【技术特征摘要】
1.一种ngpv抗原，其特征在于，所述ngpv抗原含有vp2-123基因，所述vp2-123基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
2.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有权利要求1所述ngpv抗原。
3.一种重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述重组乳酸乳球菌菌株含有权利要求1所述ngpv抗原。
4.权利要求3所述重组乳酸乳球菌菌株的制备方法，其特征在于，步骤如下：
5.权利要求1所述重组抗原、权利要求2所述重组质粒或权利要求3所述重组乳酸乳球菌菌株...
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