【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及腹主动脉瘤相关snp位点的检测引物及其应用，属于基因检测。本专利技术权利要求1～7要求优先权，优先权基础为：申请日为2022.12.15申请号为202211616059.4专利技术名称为“腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918的检测引物及其应用”的专利申请。
技术介绍
1、腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm，aaa)是指腹主动脉局限性扩张至3.0cm以上，或较原直径增大1.5倍以上。这类疾病发病率随着年龄的增长而随之升高，在74～84岁人群中，男性aaa发病率可达12.5％，而女性达5.2％。大多数的aaa并无明显症状，但当aaa破裂时病人临床上常有典型的三联症：突发低血压、腹部或背部剧痛以及腹部搏动性包块，且其病死率非常高。与aaa有关的主要危险因素包括男性、吸烟、年龄65岁以上、伴冠状动脉疾病，高血压、有心肌梗死、外周动脉疾病病史和有aaa家族史。由此可见，针对高危人群，制作一种高效、便捷、敏感性和特异性高的检测方法非常必要。
2、单核苷酸多态性(snps)是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失和插入，形成的遗传标记。snp具有已知性、可遗传性、可检测性，可用于疾病基因的定位、克隆和鉴定，寻找疾病相关的突变位点。rs12070918位点位于人的chr1:201212089(grch38.p13)，该区域编码igfn1基因；rs116309149位点位于人的chr11:72139545(grch38.p14)，该区域编码folr3基因。先前研究表明，这两
3、arms中文名称为突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutationsystem，arms)，arms-pcr将arms技术和基因pcr技术相结合，其基本原理为引物3’端碱基与模板完全互补配对时，引物能正常进行延伸。如果引物的3’端碱基与模板碱基不互补，即存在错配，引物延伸被抑制甚至是完全终止。这种方法常被用来检测snp位点的变异性。
4、由此可见，设计出一种利用arms-pcr的方法检测腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918和rs116309149的引物及其应用，具有潜在的临床意义并能够提供巨大的市场价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是：针对现有技术的不足，本专利技术提供腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918和rs116309149的检测引物及其应用，该检测引物及其应用设计验证基于arms-pcr方法的特异性匹配rs12070918和rs116309149位点的引物，并完善反应体系和反应条件，使其成功完成目的基因的扩增和检测，对于临床具有积极的意义。
2、为了实现上述目的，本专利技术采取了以下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供一种腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918/rs116309149的检测引物，所述检测引物包括2条非特异性的外侧引物和2条特异性检测snp突变位点的内测引物，其中，针对位点rs12070918的外侧引物包括如seq id no：1所示的正向引物和seq id no：2所示的反向引物，内侧引物包括seq id no：3所示的正向引物和seq id no：4所示的反向引物；针对位点rs116309149的外侧引物包括如seq id no：5所示的正向引物和seq id no：6所示的反向引物，内侧引物包括seq id no：7所示的正向引物和seq id no：8所示的反向引物；
4、所述内侧引物seq id no：3～4的倒数第三个碱基中人工引入强错配c/t；
5、所述检测引物3’端碱基与模板完全互补配对时，引物能正常进行延伸；
6、在3’端倒数第3位碱基处额外引入一个错配碱基，使引物可正常扩增靶序列，而非目的片段不扩增。
7、本专利技术的第二方面，提供本专利技术第一方面所述的腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918/rs116309149的检测引物在制备检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918/rs116309149突变的试剂或试剂盒中的应用。
8、本专利技术的第二方面，提供一种用于检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918/rs116309149突变的试剂盒，所述试剂盒包括：
9、无rna酶的水和缓冲液；
10、2×sybr green master mix；
11、以及本专利技术第一方面所述的检测引物。
12、优选地，还包括阳性质控和阴性质控，所述阳性质控包括野生型和突变型snp位点rs12070918/rs116309149的阳性质粒puc57-3040，所述阴性质控为无核酸水。
13、优选地，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤：
14、步骤1：样品dna的提取；
15、步骤2：配制反应体系，进行arms-pcr，检测样品dna的snp位点rs12070918/rs116309149基因型。
16、优选地，所述步骤2中的反应体现包括：样品dna、3.6μm无rna酶的水、5μm 2×sybrgreen master mix和0.4μm primer mix(针对不同位点的四条引物)。
17、优选地，所述arms-pcr的反应条件为：维持50℃2min，95℃2min；40个循环95℃15s，56℃15s，72℃60s。
18、本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：
19、本专利技术设计验证基于arms-pcr方法的特异性匹配rs12070918和rs116309149位点的引物，并完善反应体系和反应条件，使其成功完成目的基因的扩增和检测，对于临床上检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918和rs116309149变异具有重要的意义。
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1.一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs12070918的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括2条非特异性的外侧引物和2条特异性检测SNP突变位点的内测引物，所述外侧引物包括如SEQ ID NO：1所示的正向引物和SEQ ID NO：2所示的反向引物，所述内侧引物包括SEQ IDNO：3所示的正向引物和SEQ ID NO：4所示的反向引物。
2.权利要求1所述的腹主动脉瘤相关SNP位点rs12070918的检测引物在制备检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关SNP位点rs12070918突变的试剂或试剂盒中的应用。
3.一种用于检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关SNP位点rs12070918突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控和阴性质控，所述阳性质控包括野生型和突变型SNP位点rs12070918的阳性质粒pUC57-3040，所述阴性质控为无核酸水。
5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述ARMS-PCR的反应条件为：维持50℃2min，95℃2min；40个循环95℃15s，56℃15s，72℃60s。
8.一种腹主动脉瘤相关SNP位点rs116309149的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括2条非特异性的外侧引物和2条特异性检测SNP突变位点的内测引物，所述外侧引物包括如SEQ ID NO：5所示的正向引物和SEQ ID NO：6所示的反向引物，所述内侧引物包括SEQID NO：7所示的正向引物和SEQ ID NO：8所示的反向引物。
9.权利要求8所述的腹主动脉瘤相关SNP位点rs116309149的检测引物在制备检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关SNP位点rs116309149突变的试剂或试剂盒中的应用。
10.一种用于检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关SNP位点rs116309149突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
...【技术特征摘要】
1.一种腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括2条非特异性的外侧引物和2条特异性检测snp突变位点的内测引物，所述外侧引物包括如seq id no：1所示的正向引物和seq id no：2所示的反向引物，所述内侧引物包括seq idno：3所示的正向引物和seq id no：4所示的反向引物。
2.权利要求1所述的腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918的检测引物在制备检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918突变的试剂或试剂盒中的应用。
3.一种用于检测腹主动脉瘤或腹主动脉瘤相关snp位点rs12070918突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控和阴性质控，所述阳性质控包括野生型和突变型snp位点rs12070918的阳性质粒puc57-3040，所述阴性质控为无核酸水。
5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述步...
【专利技术属性】
技术研发人员：张岚，王海，李一男，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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