一种腺病毒吸入疫苗及其制备方法和应用技术

技术编号：43102330 阅读：2 留言：0更新日期：2024-10-26 09:45

本发明专利技术涉及一种雾化吸入疫苗，具体涉及一种重组腺病毒载体雾化吸入疫苗和制备方法及其应用。本发明专利技术的雾化吸入疫苗可以同时表达一种或多种抗原。在对机体进行吸入黏膜免疫后，不仅可以同时在肺部和机体内产生高水平特异性抗体，还可以刺激产生很高的细胞免疫反应。另外，本发明专利技术中的疫苗为吸入给药制剂，可以有效激发黏膜免疫，增加机体的第三重保护。本发明专利技术提供的重组腺病毒载体疫苗具有良好的稳定性、安全高效且无痛，可以有效对细菌、病毒的新发感染和潜伏感染的复发。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗，具体涉及一种腺病毒吸入疫苗及其制备方法和应用，更具体而言，涉及一种黏膜给药的重组腺病毒载体疫苗的制备方法及其应用。

技术介绍

1、上个世纪20年代，人们就开始尝试采用气溶胶方式给药治疗某些疾病。然而由于气溶胶发生技术原因，吸入治疗很难达到预期的效果，这种给药途径一直受到争议。雾化气溶胶吸入的给药方式受到越来越多的重视。

2、对于绝大多数多肤、蛋白及其它大分子物质，胃肠道、鼻腔及肺组织气道上的圆柱形上皮细胞是不能直接垂直渗透这些物质的。但是位于肺气道深部非常微小的肺泡上皮细胞却能让某些大分子物质透过。多肤、蛋白质和核酸的呼吸道给药治疗在药物给药方法的研究中是个快速发展的新领域，虽然气溶胶发生技术仍处于发展阶段，多肤、蛋白和核酸的呼吸道给药还是有很大的发展前景的。

3、呼吸道气溶胶免疫的优越性及不足气溶胶呼吸道给药的免疫方式现今倍受研究者的关注，主要是因为它有较其它免疫途径的凡点优越性:方便有效、无创性、交叉感染少。气溶胶吸入免疫是一种有前景的免疫途径，特别适合儿童和老人。它较鼻腔滴入有其独特的优越性，不会给患者带来痛苦和不便，易于让患者接受。进入肺脏的分子不仅可以诱发局部粘膜的免疫反应，甚至可能诱发异位粘膜的免疫反应。

4、人们己经知道，肺组织允许大分子物质通过，但是同时，想要完全弄清楚吸入物质的生物利用度是比较难的，因为气溶胶的沉积速度和给药剂量、气溶胶的浓度及在鼻咽部和呼吸道粒子(或小滴)大小的分布都是决定性的问题。因此，通过呼吸道给药的治疗方法还是存在不少问题。

5、呼吸道气溶胶给药要求合适的技术。研究表明，胃肠道、鼻腔及皮肤粘膜对生物制剂的吸收形成强有力的屏障。

6、气溶胶的发生装置有待改进，粗糙的设备导致了较低的药物浓度，对剂量的稳定性也有影响。尽管呼吸道深部有巨大的表面积(成人142m2)，而且有渗透特性，但是想要在肺泡局部达到有效的药物浓度还是有难度的。事实上，目前现有的气溶胶装置发生效率太低，而且未标准化，对于不同的病人剂量的稳定性会变化，这些都是岌待解决的问题。

技术实现思路

1、本专利技术涉及一种雾化吸入疫苗，具体涉及一种重组腺病毒载体雾化吸入疫苗和制备方法及其应用。本专利技术的雾化吸入疫苗可以同时表达一种或多种抗原。在对机体进行吸入黏膜免疫后，不仅可以同时在肺部和机体内产生高水平特异性抗体，还可以刺激产生很高的细胞免疫反应。另外，本专利技术中的疫苗为吸入给药制剂，可以有效激发黏膜免疫，增加机体的第三重保护。本专利技术提供的重组腺病毒载体疫苗具有良好的稳定性、安全高效且无痛，可以有效对细菌、病毒的新发感染和潜伏感染的复发。

2、本专利技术的一方面，提供一种雾化吸入制剂，所述制剂包含有效成分，所述有效成分为表达抗原蛋白的重组腺病毒，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为：300-750mosmol/kg；具体的，所述制剂中溶质分子的渗透浓度包括但不限于为300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、700、725或750mosmol/kg。

3、优选的，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为325-725mosmol/kg；具体的，所述制剂中溶质分子的渗透浓度包括但不限于为325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、700或725mosmol/kg。

4、更优选的，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为375-625mosmol/kg；具体的，所述制剂中溶质分子的渗透浓度包括但不限于为375、400、425、450、475、500、525、550、575、600或625mosmol/kg。

5、在一些具体实施方式中，所述溶质分子包括糖、盐、金属离子螯合剂、保护剂和/或表面活性剂。

6、在一些具体实施方式中，所述盐的含量为25-75mm，所述盐类选自氯化钠、氯化镁、氢卤化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、枸橼酸盐、甲苯-磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和对氨基水杨酸盐中的至少一种或两种。

7、在一些具体实施方式中，所述糖类选自蔗糖、海藻糖、岩藻糖和/或麦芽糖中的至少一种或两种。

8、在一些具体实施方式中，所述糖类的含量为20-75mg/ml；具体的，所述糖的含量包括但不限于为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74或75mg/ml。

9、在一些具体实施方式中，所述保护剂选自山梨糖醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇中的至少一种或两种。

10、在一些具体实施方式中，所述保护剂的含量为20-75mg/ml；具体的，所述保护剂的含量包括但不限于为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74或75mg/ml。

11、在一些具体实施方式中，所述糖、盐和保护剂含量的总和低于500mm。

12、在一些具体实施方式中，所述表面活性剂选自吐温、司盘、甘油中的一种或者多种；优选的，所述表面活性剂选自吐温20、吐温80、司盘20、司盘80中的至少一种或两种。

13、在一些具体实施方式中，所述表面活性剂的浓度为0.01-5.0mg/ml；具体的，所述表面活性剂的浓度包括但不限于为0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、3mg/ml、3.5mg/ml、4.0mg/ml、4.5mg/ml、5.0mg/ml。

14、在一些具体实施方式中，所述金属离子螯合剂选自：乙二胺四乙酸(edta)，乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)，氨基三乙酸(又称次氮基三乙酸nta)，二亚乙基三胺五乙酸及其盐、柠檬酸(ca)、酒石酸(ta)和/或葡萄糖酸(ga)中的至少一种或两种。

15、在一些具体实施方式中，所述制剂的ph值为1～14，具体的，所述制剂的ph值包括但不本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂包含有效成分，所述有效成分为表达抗原蛋白的重组腺病毒，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为：325-725mOsmol/kg。

2.一种根据权利要求1所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为375-625mOsmol/kg。

3.一种根据权利要求1-2所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述溶质分子包括糖、盐、金属离子螯合剂、保护剂和/或表面活性剂。

4.一种根据权利要求3所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述盐的含量为25-75mM，所述盐类选自氯化钠、氯化镁、氢卤化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、甲苯-磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和对氨基水杨酸盐中的至少一种或两种。

5.一种根据权利要求3或4所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述糖的含量为20-75mg/ml，所述糖类选自蔗糖、海藻糖、岩藻糖和/或麦芽糖中的至少一种或两种。

6.一种根据权利要求3-5中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述保护剂的含量为20-75mg/ml，

7.一种根据权利要求3-6中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述糖、盐和保护剂含量的总和低于500mM。

8.一种根据权利要求3-7中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述表面活性剂选自吐温、司盘、甘油中的一种或者多种；优选的，所述表面活性剂选自吐温20、吐温80、司盘20、司盘80中的至少一种或两种。

9.一种根据权利要求3-8中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.01-5.0mg/ml。

10.一种根据权利要求3-9中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述金属离子螯合剂选自：乙二胺四乙酸(EDTA)，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)，氨基三乙酸，二亚乙基三胺五乙酸及其盐、柠檬酸(CA)、酒石酸(TA)和/或葡萄糖酸(GA)中的至少一种或两种。

11.一种根据权利要求1-10中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂的pH值为1～14；优选的，所述制剂的pH值为5-8；更优选的，所述制剂的pH值为6-7.5。

12.一种根据权利要求1-11中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂还包括缓冲剂；优选的，所述缓冲剂为HEPES、HIS、TRIS、PB、琥珀酸、柠檬酸中的一种或多种；更优选地，所述缓冲剂的浓度为1～15mM。

13.根据权利要求1-12任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒；优选的，所述腺病毒为选自血清1型～血清57型的人腺病毒中的一种或多种。

14.根据权利要求13所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述黑猩猩腺病毒选自由AdC8,AdC22,AdC30,AdC37,AdC11,AdC3,AdC17,AdC19,AdC31,AdC20,AdC24,Pan1,Pan2,Pan3,AdC16,AdC26,AdC82,AdC5,AdC7,AdC44,AdC38,AdC43,AdC63,AdC147,AdC73,AdC6,AdC55,AdC83,AdC143,AdC144,AdC145,AdC10,AdC28,AdC9,AdC68构成的组；更优选的，所述黑猩猩腺病毒为AdC6型、AdC7型、AdC63型或AdC68型。

15.根据权利要求1-14任一项中所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述腺病毒为复制缺陷型重组腺病毒。

16.根据权利要求1-15任一项中所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂中重组腺病毒的含量为1×108～1×1012VP/ml；优选的，所述制剂中重组腺病毒的含量为5×109VP/ml。

17.根据权利要求1-16任一项中所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述雾化吸入制剂的气溶胶颗粒的粒径：D90粒径为5.0-10.0μm。

18.根据权利要求1-16任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述雾化吸入制剂的气溶胶颗粒的粒径：D50粒径为2.0-7.0μm。

19.根据权利要求1-16任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述雾化吸入制剂的气溶胶颗粒的粒径：D10粒径为0.5-2.50μm；优选地，D10粒径为0.7-1.5μm。

20.根据权利要求1-19任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，气溶胶NGI FPF(细微粒子，Fine particle fraction)小于5.39μ...

【技术特征摘要】

1.一种雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂包含有效成分，所述有效成分为表达抗原蛋白的重组腺病毒，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为：325-725mosmol/kg。

2.一种根据权利要求1所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂中溶质分子的渗透浓度为375-625mosmol/kg。

3.一种根据权利要求1-2所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述溶质分子包括糖、盐、金属离子螯合剂、保护剂和/或表面活性剂。

4.一种根据权利要求3所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述盐的含量为25-75mm，所述盐类选自氯化钠、氯化镁、氢卤化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、甲苯-磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和对氨基水杨酸盐中的至少一种或两种。

6.一种根据权利要求3-5中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述保护剂的含量为20-75mg/ml，所述保护剂选自山梨糖醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇中的至少一种或两种。

7.一种根据权利要求3-6中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述糖、盐和保护剂含量的总和低于500mm。

9.一种根据权利要求3-8中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.01-5.0mg/ml。

10.一种根据权利要求3-9中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述金属离子螯合剂选自：乙二胺四乙酸(edta)，乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)，氨基三乙酸，二亚乙基三胺五乙酸及其盐、柠檬酸(ca)、酒石酸(ta)和/或葡萄糖酸(ga)中的至少一种或两种。

11.一种根据权利要求1-10中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂的ph值为1～14；优选的，所述制剂的ph值为5-8；更优选的，所述制剂的ph值为6-7.5。

12.一种根据权利要求1-11中任一项所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述制剂还包括缓冲剂；优选的，所述缓冲剂为hepes、his、tris、pb、琥珀酸、柠檬酸中的一种或多种；更优选地，所述缓冲剂的浓度为1～15mm。

14.根据权利要求13所述的雾化吸入制剂，其特征在于，所述黑猩猩腺病毒选自由adc8,adc22,adc30,adc37,adc11,adc3,adc17,adc19,adc31,adc20,adc24,pan1,pan2,pan3,adc16,adc26,adc82,adc5,adc7,adc44,adc38,adc43,adc63,adc147,adc73,adc6,adc55,adc83,adc143,adc144,adc145,adc10,adc28,adc9,adc6...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓龙，彭少丹，王丽萍，王月然，菅慧，蒋悦颖，司伟雪，徐方，朱涛，
申请(专利权)人：康希诺生物股份公司，
类型：发明
国别省市：

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