【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种融合两种基因工程改造肿瘤细胞的囊泡及其制备方法和在制备肿瘤疫苗中的应用。
技术介绍
1、肿瘤疫苗作为治疗和预防肿瘤的免疫策略之一。肿瘤疫苗针对特定的肿瘤抗原以激活免疫系统对肿瘤细胞的识别和攻击，建立长期免疫监视和保护。目前针对前列腺癌的肿瘤疫苗唯一批准上市的sipuleucel-t是首个获得美国fda批准的治疗性肿瘤疫苗，专门用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势抵抗性前列腺癌(mcrpc)患者。
2、而基于肿瘤抗原的肿瘤疫苗是利用肿瘤细胞作为抗原来激活患者自身免疫系统识别和攻击肿瘤细胞。而前列腺癌作为冷肿瘤，免疫细胞活性弱，对免疫治疗反应不佳。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于基因工程的肿瘤细胞组合物，将经过细胞焦亡处理的过表达gsdme的前列腺癌细胞和过表达gm-csf的黑色瘤细胞组合，优化了前列腺癌抗原和发挥佐剂作用的细胞因子，从而激发强烈的t细胞免疫反应。
2、本专利技术提供了一种基于基因工程的肿瘤细胞组合物，包括数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)的过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)的黑色素瘤细胞株和细胞焦亡处理的过表达gsdme蛋白的前列腺癌细胞株。
3、优选的，所述细胞焦亡处理用药物为化疗药物。
4、优选的，所述化疗药物包括铂类或环磷酰胺类化疗药物和/或[9,9'-二-9h-芴]-9,9'-二甲醛。
5、本专利技术提供了一
6、本专利技术提供了所述融合纳米囊泡的制备方法，将上述技术方中的细胞焦亡处理的过表达gsdme蛋白的前列腺癌细胞株和过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株混合，得到混合体系；
7、将所述混合体系采用挤压法进行膜过滤，得到多细胞融合纳米囊泡。
8、优选的，所述膜过滤包括依次通过孔径为3.0μm、1.2μm、0.6μm和0.2μm的微孔滤膜。
9、本专利技术提供了一种前列腺癌肿瘤疫苗，活性成分包括融合纳米囊泡或所述制备方法制备得到的融合纳米囊泡。
10、优选的，所述融合纳米囊泡的浓度为20～30μg/ml。
11、优选的，还包括含2.5wt.％～5wt.％海藻糖的pbs溶液。
12、本专利技术提供了所述融合纳米囊泡或所述制备方法制备的融合纳米囊泡在制备预防和/或治疗前列腺癌的肿瘤疫苗中的应用。
13、本专利技术提供了一种基于基因工程的肿瘤细胞组合物，包括数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)的过表达gm-csf的黑色素瘤细胞株和细胞焦亡处理的过表达gsdme蛋白的前列腺癌细胞株。本专利技术采用基因工程手段使前列腺癌细胞过表达gsdme蛋白，在经过细胞焦亡处理后，能够产生大量免疫因子并释放大量的肿瘤抗原，能够启动适应性免疫反应。同时采用基因工程手段将黑色素瘤细胞中过表达gm-csf，gm-csf作为免疫调节因子发挥增强抗肿瘤作用，黑色素瘤细胞中含有大量与前列腺癌细胞相同的免疫抗原，进一步增强前列腺癌的免疫原性。本专利技术提供的肿瘤细胞组合物为制备前列腺癌肿瘤疫苗提供了基础，为抗前列腺癌肿瘤疫苗的制备提供了新思路。
14、本专利技术还提供了一种融合纳米囊泡，是所述肿瘤细胞组合物中的细胞株经膜融合得到，包含了前列腺癌细胞株和黑色素瘤细胞株两种细胞株的免疫原性成分和细胞因子，提供对抗前列腺癌免疫抑制型肿瘤微环境的免疫性能，能有效激发强大的t细胞免疫反应。结合实施例结果说明，融合纳米囊泡制备的疫苗能够增强树突细胞(dc)细胞摄取，同时提高向淋巴结的靶向作用，同时还能促进dc细胞的成熟和t淋巴细胞的增殖，可见，所述融合纳米囊泡有利于提高机体的免疫反应。此外，将融合纳米囊泡制备肿瘤疫苗在前列腺癌动物体应用，结果表明融合纳米囊泡组能够有效抑制肿瘤的生长并促进肿瘤组织的凋亡，且延长生存期。可见，所述融合纳米囊泡显示了良好的刺激机体产生强烈免疫反应的特性，同时显示出良好的抗肿瘤药效。本专利技术提供的融合纳米囊泡为前列腺癌的预防和治疗提供了新手段。
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1.一种基于基因工程的肿瘤细胞组合物，其特征在于，包括数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)的过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株和细胞焦亡处理的过表达GSDME蛋白的前列腺癌细胞株。
2.根据权利要求1所述肿瘤细胞组合物，其特征在于，所述细胞焦亡处理用药物为化疗药物。
3.根据权利要求2所述肿瘤细胞组合物，其特征在于，所述化疗药物包括铂类或环磷酰胺类化疗药物和/或[9,9'-二-9H-芴]-9,9'-二甲醛。
4.一种融合纳米囊泡，其特征在于，是权利要求1～3任意一项中细胞焦亡处理的过表达GSDME蛋白的前列腺癌细胞株和过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株经膜融合形成的纳米囊泡。
5.权利要求4所述融合纳米囊泡的制备方法，其特征在于，将细胞焦亡处理的过表达GSDME蛋白的前列腺癌细胞株和过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株混合，得到混合体系；
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述膜过滤包括依次通过孔径为3.0μm、1.2μm、0.6μm和0.2μm的微孔滤膜
7.一种前列腺癌肿瘤疫苗，其特征在于，活性成分包括权利要求4所述融合纳米囊泡或权利要求5或6所述制备方法制备得到的融合纳米囊泡。
8.根据权利要求7所述前列腺癌肿瘤疫苗，其特征在于，所述融合纳米囊泡的浓度为20～30μg/mL。
9.根据权利要求7或8所述前列腺癌肿瘤疫苗，其特征在于，还包括含2.5wt.％～5wt.％海藻糖的PBS溶液。
10.权利要求4所述融合纳米囊泡或权利要求5或6所述制备方法制备的融合纳米囊泡在制备预防和/或治疗前列腺癌的肿瘤疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种基于基因工程的肿瘤细胞组合物，其特征在于，包括数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)的过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株和细胞焦亡处理的过表达gsdme蛋白的前列腺癌细胞株。
2.根据权利要求1所述肿瘤细胞组合物，其特征在于，所述细胞焦亡处理用药物为化疗药物。
3.根据权利要求2所述肿瘤细胞组合物，其特征在于，所述化疗药物包括铂类或环磷酰胺类化疗药物和/或[9,9'-二-9h-芴]-9,9'-二甲醛。
4.一种融合纳米囊泡，其特征在于，是权利要求1～3任意一项中细胞焦亡处理的过表达gsdme蛋白的前列腺癌细胞株和过表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的黑色素瘤细胞株经膜融合形成的纳米囊泡。
5.权利要求4所述融合纳米囊泡的制备方法，其特征在于，将细胞焦亡处理的过表达gsdm...
【专利技术属性】
技术研发人员：台宗光，赵颖超，高原，陈中建，朱全刚，缪丰泽，王伟凡，张馨月，陆家叶，孟煜，张庭瑞，
申请(专利权)人：上海市皮肤病医院，
类型：发明
国别省市：
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