【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学合成领域，具体涉及到一种下拉gsto1的探针分子及其制备方法和应用。
技术介绍
1、谷胱甘肽巯基转移酶(gsts)是广泛存在于细胞质、线粒体等重要细胞器的一类蛋白，除了通过谷胱甘肽偶联来解毒外，gsts还在内源性化合物的合成和代谢、氧化还原稳态和细胞信号传导中发挥关键作用。gsts可分为七类，其中，以gsto1为代表的非典型胞质谷胱甘肽巯基转移酶，在结构和功能上都有其独特性，近年来被证实在几种癌症中高表达，并与化疗耐药相关。此外，gsto1还参与调节细胞内多种信号通路，与阿尔茨海默症、帕金森、慢性阻塞性肺病以及炎症发生都关系密切。因此，gsto1是一种重要的药物靶点和生物标志物，gsto1的功能和性质研究对于相关适应症的药物开发非常关键。
2、gsto1的催化活性中心具有高亲核能力的半胱氨酸残基，针对此活性中心也已开发了相应探针用于科学研究。现有探针中，应用最普遍的是5-氯甲基二乙酸酯荧光素(cmfda)，这是一种细胞示踪剂，已被证实具有不可逆结合gsto1的功能，可在凝胶层面实现对gsto1重组蛋白的荧光标记及抑制剂的竞争性结合的表征[nat commun.2016,7,1308]。同时，cmfda也可标记内源性gsto1，但因内源性蛋白的多样性和复杂性，cmfda也会标记其他胞质蛋白，因此无法确定荧光信号归属，造成结合信号假阳的可能性。另外，该探针只能用于荧光成像，不能通过下拉(pull down)靶蛋白对其进行分离和鉴定，这就不能实现靶蛋白的准确鉴定和定量。pull down实验在生物学研究中
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术的目的是克服上述现有技术存在的不足，提供一种下拉gsto1的探针分子及其制备方法和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：
3、一种下拉gsto1的探针分子，其中，具有式i所示的结构：
4、
5、所述的下拉gsto1的探针分子，其中，包括如下步骤：
6、
7、化合物ii制备化合物iii的步骤中，卤代炔烃为6-碘己炔、6-氯己炔或6-溴己炔，碱为碳酸钾或碳酸钠。
8、化合物ii制备化合物iii中，化合物ii：卤代炔烃：碱的摩尔比范围为1：1～1.05：3～5。
9、化合物ii制备化合物iii中，反应溶剂为丙酮或四氢呋喃，加热回流，反应时间为18～24h。
10、化合物iii制备化合物i中，卤代乙酰氯为氯乙酰氯，酸为三氟乙酸或乙酸，优选三氟乙酸，化合物iii：卤代乙酰氯：酸的摩尔比范围为1：1～1.1：1～1.1。
11、化合物iii制备化合物i中，反应溶剂为丙酮或四氢呋喃，反应温度为15℃～25℃，反应时间为0.5～3h。
12、一种下拉gsto1的探针分子的应用，所述探针分子可用于从细胞、组织中下拉gsto1蛋白。
13、一种下拉gsto1的探针分子的应用，所述探针分子可用于检测定量细胞、组织中gsto1蛋白的丰度。
14、一种下拉gsto1的探针分子的应用，所述探针分子可用于筛选gsto1抑制剂、验证小分子化合物对gsto1的抑制活性、测试小分子化合物与gsto1的亲和力或检测gsto1蛋白活性。
15、有益效果：本专利技术公开了一种下拉gsto1的探针分子及其制备方法和应用，利用gsto1活性中心半胱氨酸残基的高亲核能力，通过探针分子对巯基的共价反应性，稳定地下拉gsto1蛋白，还通过竞争下拉的方法测试了抑制剂分子对活细胞中gsto1的亲和力，通过蛋白印记检测抑制剂对该探针分子下拉蛋白条带的抑制，表明了该探针作为工具分子的良好应用前景，未来可将其应用于gsto1调节剂分子的筛选，检测定量细胞、组织中gsto1蛋白的丰度，阐明gsto1调节剂药效作用机制(上调或下调gsto1)及药效与靶蛋白丰度关系，指导临床研究病人选择、临床数据分组分析。制备方法包括以下步骤：以2-氨基-6-羟基苯并噻唑(化合物ii)为原料，与卤代炔烃反应得到苯并噻唑类化合物(化合物iii)；然后与卤代乙酰氯反应得到可下拉gsto1的探针分子(化合物i)，该路线操作简便，工艺稳定，大幅度减少了使用活性及有毒有害试剂，适应工业大规模生产。
16、说明书中涉及到的反应试剂的缩写如下所示：
17、k2co3：碳酸钾；
18、h2o：水。
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1.一种下拉GSTO1的探针分子，其中，具有式I所示的结构：
2.一种下拉GSTO1的探针分子的制备方法，用于制备权利要求1所述的下拉GSTO1的探针分子，其中，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，化合物II制备化合物III的步骤中，卤代炔烃为6-碘己炔、6-氯己炔或6-溴己炔，碱为碳酸钾或碳酸钠。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，化合物II制备化合物III中，化合物II：卤代炔烃：碱的摩尔比范围为1：1～1.05：3～5。
5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，化合物II制备化合物III中，反应溶剂为丙酮或四氢呋喃，加热回流，反应时间为18～24h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，化合物Ⅲ制备化合物I中，卤代乙酰氯为氯乙酰氯，酸为三氟乙酸或乙酸，化合物III：卤代乙酰氯：酸的摩尔比范围为1：1～1.1：1～1.1。
7.根据权利要求2或6所述的制备方法，其特征在于：化合物Ⅲ制备化合物I中，反应溶剂为丙酮或四氢呋喃，反应温度为15℃～25
8.一种如权利要求1～7任一所述的下拉GSTO1的探针分子的应用，其特征在于，所述探针分子可用于从细胞、组织中下拉GSTO1蛋白。
9.一种如权利要求1～7任一所述的下拉GSTO1的探针分子的应用，其特征在于，所述探针分子可用于检测定量细胞、组织中GSTO1蛋白的丰度。
10.一种如权利要求1～7任一所述的下拉GSTO1的探针分子的应用，其特征在于，所述探针分子可用于筛选GSTO1抑制剂、验证小分子化合物对GSTO1的抑制活性、测试小分子化合物与GSTO1的亲和力或检测GSTO1蛋白活性。
...【技术特征摘要】
1.一种下拉gsto1的探针分子，其中，具有式i所示的结构：
2.一种下拉gsto1的探针分子的制备方法，用于制备权利要求1所述的下拉gsto1的探针分子，其中，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，化合物ii制备化合物iii的步骤中，卤代炔烃为6-碘己炔、6-氯己炔或6-溴己炔，碱为碳酸钾或碳酸钠。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，化合物ii制备化合物iii中，化合物ii：卤代炔烃：碱的摩尔比范围为1：1～1.05：3～5。
5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，化合物ii制备化合物iii中，反应溶剂为丙酮或四氢呋喃，加热回流，反应时间为18～24h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，化合物ⅲ制备化合物i中，卤代乙酰氯为氯乙酰氯，酸为三氟乙...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丰盈，陈南，侯晓萌，
申请(专利权)人：无锡市南京大学锡山应用生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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