【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学检测，具体涉及一种用于稳定保存氧化型脂蛋白的合成基质溶液。
技术介绍
1、脂蛋白(lipoprotein)是一类由富含固醇脂、甘油三酯的疏水性内核和由蛋白质、磷脂、胆固醇等组成的外壳构成的球状微粒。其生物学功能主要包括：(1)运输脂类：脂蛋白在血液中转运甘油三酯和胆固醇，将它们运输到不同的组织和器官。(2)参与代谢：脂蛋白帮助调节细胞内外的脂质代谢，包括胆固醇和甘油三酯的转运和代谢。(3)维持机体平衡：脂蛋白有助于维持血液中脂类含量的稳定，从而保持机体的能量平衡。(4)参与细胞膜的构成：脂蛋白参与细胞膜的构建，与细胞膜的完整性和功能密切相关。(5)胆固醇的逆向转运：高密度脂蛋白可以将胆固醇从外周组织移至肝脏，减少血液中的胆固醇含量。
2、根据密度大小，脂蛋白可分为：乳糜微粒(cm)、极低密度脂蛋白(vldl)、中间密度脂蛋白(idl)、低密度脂蛋白(ldl)和高密度脂蛋白(hdl)。脂蛋白中的磷脂、胆固醇以及蛋白质非常容易受到氧自由基和羟自由基的攻击而被氧化成为氧化型脂蛋白。在体内脂蛋白可以通过以下两种方式进行氧化：(1)在氧自由基的介导下经细胞内脂加氧酶作用，使脂蛋白进行氧化修饰；(2)过度金属离子(如cu2+、fe2+)同样可以在氧自由基介导下，使脂蛋白卵磷脂分子中的多不饱和脂肪酸进行氧化修饰。
3、脂蛋白的水平和种类对健康有重要影响，其含量和比例的改变与多种疾病如动脉粥样硬化症、糖尿病、肥胖症和某些癌症有关。通常认为，高密度脂蛋白(hdl)可通过多种机制保护动脉壁以阻止动脉粥样
4、质控品作为体外诊断试剂中的质量控制物质，具有评价或验证测量精密度和测量准确度的功能，还可以分析由于试剂或分析仪器的变化可能产生的偏差。最理想的配置质控品的基质溶液应该是成分完全确定，并且与未知样品除未知分析物浓度外的成分完全匹配。但是，由于正常和异常生理血液或尿液标本的成分差异很大，在实践中几乎不能达到这些条件。如果采用从生物样本中去除待检物质的方式获得，则需要经过昂贵复杂的制备过程，且多步骤的操作有可能进一步增加不一致性。同时，人类和动物来源的生物制品存在潜在的生物风险，需要对多种致病性微生物进行检测，增加制备成本。因此，需要提供人工制备的物理或免疫性质与待检样本相当的基质成分，以解决上述问题。
5、对氧化型脂蛋白进行定量检测，质控品是必不可少和至关重要的，但是氧化型脂蛋白是一种极不稳定的脂蛋白，现有商品化的氧化型脂蛋白制剂均为提取脂蛋白后在体外加入硫酸铜进行氧化反应获得，需要在2-8℃保存，一般为6-8周，最长的有效期为6个月(广州进德生物，cn 115932239a)。但是，用于临床检测的体外诊断试剂的有效期一般为至少12个月，或者更长，有效期短于12个月的体外诊断试剂难以在临床检测中推广应用，因此需要延长氧化型脂蛋白的保存稳定性，适应相应检测试剂研制的需求。
6、因此，本专利技术的目的是提供一种合成基质溶液用于氧化型脂蛋白的稀释与保存，一方面提供与待检血清样本相当的物理与免疫学特性，便于进行免疫学检测；另一方面为氧化型脂蛋白提供2-8℃保存条件下超长保存期，使其稳定性能够满足氧化型脂蛋白临床检测试剂的要求。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种合成基质溶液，可以用于制备用于血清样本免疫测定的质控品，其包含缓冲液、聚维酮、金属螯合剂、蛋氨酸、染料和防腐剂。
2、聚维酮(polyvinyl pyrrolidone，pvp)是一种非离子型高分子化合物，是n-乙烯基酰胺类聚合物中最具特色，被研究得最深、最广泛的精细化学品，其粘度和渗透压与人和动物血清成分相似，可以用于模拟生物样本；其能与多数无机酸盐相容，可以用多种缓冲液进行配置，以便获得与生物样本相当的ph值和渗透压；其溶液在常温常压下稳定，便于保存，有利于增加溶解于其中的相应分析物的稳定性；其具有优良的表面活性和化学稳定性，有助于在免疫测定中控制抗原抗体相互作用速率。浓度范围在10-50g/l，优选15-20g/l，最优20g/l。
3、在合成基质溶液中加入金属螯合剂是有利的，金属螯合剂可以通过螯合剂分子与金属离子的强结合作用，将金属离子包合到螯合剂内部，从而阻止金属离子起作用，避免继续发生氧化还原反应，增加氧化型脂蛋白的稳定性。所述金属螯合剂为有机金属螯合剂，优选为羧酸型金属螯合剂，进一步优选为乙二胺四乙酸二钠盐(edta-na2)。浓度为0.2-1.0mm，优选为0.25-0.5mm。
4、在合成基质溶液中加入蛋氨酸是有利的，蛋氨酸的化学组成不同于其他的氨基酸，因为它含有硫分子，与氢分子结合成为一个强大的抗氧化剂，重金属离子与蛋氨酸的甲基结合，转换为谷胱甘肽，进一步避免继续发生氧化还原反应，增加氧化型脂蛋白的稳定性。浓度为1-5g/l，优选为2-5g/l。
5、缓冲液对于合成基质溶液是有利的，合成基质溶液中的缓冲液可以提供适当的ph值范围和适当的渗透压控制。合成基质溶液的ph值一般在5.0至10.0之间，优选7.0-8.0之间，最优选为7.4。优选的缓冲液包括磷酸盐缓冲液、tris-hcl缓冲液、羟乙基哌嗪乙烷磺酸缓冲液(hepes)、吗啉基丙烷磺酸缓冲液(mops)，或类似缓冲液。最优选为磷酸盐缓冲液(pbs)。
6、在合成基质溶液中加入染料是有益的，因为其可以模拟血清等生物样本的颜色，减少了检测结果的误差。所述染料可以是同时使用甲基红和柠檬黄，其浓度可以分别是0.001-0.005g/l和0.002-0.007g/l，浓度优选为甲基红0.002g/l、柠檬黄0.005g/l。
7、在合成基质溶液中加入防腐剂也是有益的，其可以避免微生物生长，延长保存期。所述防腐剂可以是proclin 300、硫酸庆大霉素、叠氮钠和硫柳汞。防腐剂的量可以是对应每种防腐剂的可接受水平的量，该可接受水平的量是本领域众所周知的。
8、本专利技术还涉及用于氧化型脂蛋白测定的质控品，其包括本专利技术的合成基质溶液和氧化型脂蛋白分析物，所述的氧化型脂蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种保存氧化型脂蛋白的合成基质溶液，包含10-50mM缓冲液、10-20g/L聚维酮、0.2-1.0mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、1-5g/L蛋氨酸、0.001-0.005g/L甲基红、0.002-0.007g/L柠檬黄、可接受水平的量的防腐剂，调节pH至5.0至10.0之间。
2.权利要求1所述的合成基质溶液，其中缓冲液是磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、羟乙基哌嗪乙烷磺酸缓冲液(HEPES)或吗啉基丙烷磺酸缓冲液(MOPS)，防腐剂是Proclin300、硫酸庆大霉素、叠氮钠或硫柳汞。
3.权利要求1或2所述的合成基质溶液，其中聚维酮浓度为15-20g/L、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)浓度为0.25-0.5mM、蛋氨酸浓度为2-5g/L、甲基红浓度为0.002g/L、柠檬黄浓度为0.005g/L，pH值调节至7.0-8.0之间。
4.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含10mM磷酸盐缓冲液、10g/L聚维酮K30、0.2mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、1.0g/L L-蛋氨酸、1mL/L Proc
5.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含10mM磷酸盐缓冲液、15g/L聚维酮K30、0.25mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、2.0g/L L-蛋氨酸、0.1g/L硫酸庆大霉素、0.002g/L甲基红、0.005g/L柠檬黄，调节pH至7.4。
6.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含20mM磷酸盐缓冲液、20g/L聚维酮K30、0.5mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、5.0g/L L-蛋氨酸、0.2g/L叠氮钠、0.002g/L甲基红、0.005g/L柠檬黄，调节pH至7.4。
7.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含20mM Tris-HCl缓冲液、15g/L聚维酮K30、0.25mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、1.0g/L L-蛋氨酸、1mL/L Proclin 300、0.002g/L甲基红、0.005g/L柠檬黄，调节pH至7.0。
8.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含50mM HEPES缓冲液、15g/L聚维酮K30、0.5mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、2.0g/L L-蛋氨酸、0.1g/L硫酸庆大霉素、0.002g/L甲基红、0.005g/L柠檬黄，调节pH至7.5。
9.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含25mM MOPS缓冲液、20g/L聚维酮K30、1.0mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)、5.0g/L L-蛋氨酸、1mL/L Proclin 300、0.002g/L甲基红、0.005g/L柠檬黄，调节pH至8.0。
10.一种氧化型脂蛋白的质控品，其包含权利要求1-9所述的合成基质溶液和氧化型脂蛋白分析物。
11.权利要求10所述的质控品，其中氧化型脂蛋白分析物是人源氧化型高密度脂蛋白或者人源氧化型低密度脂蛋白。
12.权利要求10或11所述的质控品，其中合成基质溶液是权利要求4所述的合成基质溶液或者权利要求5所述的合成基质溶液。
13.权利要求10-12所述的氧化型脂蛋白质控品在氧化型脂蛋白免疫测定中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种保存氧化型脂蛋白的合成基质溶液，包含10-50mm缓冲液、10-20g/l聚维酮、0.2-1.0mm乙二胺四乙酸二钠盐(edta-na2)、1-5g/l蛋氨酸、0.001-0.005g/l甲基红、0.002-0.007g/l柠檬黄、可接受水平的量的防腐剂，调节ph至5.0至10.0之间。
2.权利要求1所述的合成基质溶液，其中缓冲液是磷酸盐缓冲液、tris-hcl缓冲液、羟乙基哌嗪乙烷磺酸缓冲液(hepes)或吗啉基丙烷磺酸缓冲液(mops)，防腐剂是proclin300、硫酸庆大霉素、叠氮钠或硫柳汞。
3.权利要求1或2所述的合成基质溶液，其中聚维酮浓度为15-20g/l、乙二胺四乙酸二钠盐(edta-na2)浓度为0.25-0.5mm、蛋氨酸浓度为2-5g/l、甲基红浓度为0.002g/l、柠檬黄浓度为0.005g/l，ph值调节至7.0-8.0之间。
4.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含10mm磷酸盐缓冲液、10g/l聚维酮k30、0.2mm乙二胺四乙酸二钠盐(edta-na2)、1.0g/l l-蛋氨酸、1ml/l proclin 300、0.002g/l甲基红、0.005g/l柠檬黄，调节ph至7.2。
5.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含10mm磷酸盐缓冲液、15g/l聚维酮k30、0.25mm乙二胺四乙酸二钠盐(edta-na2)、2.0g/l l-蛋氨酸、0.1g/l硫酸庆大霉素、0.002g/l甲基红、0.005g/l柠檬黄，调节ph至7.4。
6.权利要求3所述的合成基质溶液，其包含20mm磷酸盐缓冲液、20g/l聚维酮k30、0.5m...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈庆全，
申请(专利权)人：北京市华信行生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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