【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种细胞系，在所述细胞系中DNA片段化受到抑制。
2.细胞系用于生产腺相关病毒(AAV)的用途，在所述细胞系中DNA片段化受到抑制。
3.根据权利要求1所述的细胞系，或根据权利要求2所述的用途，其中所述细胞系是AAV生产细胞系。
4.根据权利要求1或3所述的细胞系，或根据权利要求2或3所述的用途，其中所述DNA片段化是(i)由程序性细胞死亡引起的DNA片段化，或(ii)由胱天蛋白酶3/DFF40诱导的DNA链断裂引起的DNA片段化。
5.根据权利要求1、3或4所述的细胞系，或根据权利要求2-4中任一项所述的用途，其中所述DNA片段化是低分子量DNA片段化。
6.根据权利要求5所述的细胞系或用途，其中低分子量DNA片段化是产生至多20kB长度的DNA片段的DNA片段化。
7.根据权利要求1和3-6中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-6中任一项所述的用途，其中编码生产AAV所需组分的基因在所述细胞系中瞬时表达或稳定整合到细胞基因组中。
8.根据权利要求7所述的细胞系或用途，其中编码生产AAV所
9.根据权利要求7或8所述的细胞系或用途，其中下列基因在所述细胞系中瞬时表达或稳定整合到细胞基因组中：
10.根据权利要求1和3-9中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-9中任一项所述的用途，其中所述细胞系为选自CAP细胞、AGE1.hn、HEK293、PER.C6、NSO1、COS-7、BHK、CHO、CV1、VERO、HeLa、MDCK、BRL3A、W138和HepG2细胞的细胞系。
11.根据权利要求1和3-10中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-10中任一项所述的用途，其中所述DNA片段化是由程序性细胞死亡引起的，并且其中由程序性细胞死亡引起的DNA片段化是细胞凋亡DNA片段化、parthanatotic DNA片段化和/或细胞焦亡DNA片段化。
12.根据权利要求1和3-11中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-11中任一项所述的用途，其中通过直接或间接抑制一种或多种核酸内切酶来抑制所述DNA片段化。
13.根据权利要求12所述的细胞系或用途，其中直接抑制一种或多种核酸内切酶包括：一种或多种核酸内切酶的
14.根据权利要求12所述的细胞系或用途，其中间接抑制一种或多种核酸内切酶包括：一种或多种核酸内切酶的一种或多种上游调节剂的
15.根据权利要求1和4-14中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-14中任一项所述的用途，其中所述DNA片段化通过选自以下的机制来抑制:
16.根据权利要求1、3和5-10中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2、3和5-10中任一项所述的用途，其中通过一种或多种酶的过表达来抑制DNA片段化，所述酶选自参与DNA修复的酶和抑制DFF40的酶。
17.根据权利要求16所述的细胞系或用途，其中所述酶选自PARP1(聚[ADP-核糖]聚合酶1)、DNA连接酶IV、BRCA1、BRCA2、FEN1、连接酶III、MRE11、NBS1和XRCC1。
18.一种生产腺相关病毒(AAV)的方法，包括在权利要求1-17中任一项所定义的细胞系中生产AAV的步骤。
19.一种生产腺相关病毒(AAV)的方法，包括在AAV生产阶段期间将其中生产AAV的细胞暴露于DNA片段化的抑制剂的步骤。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述DNA片段化的抑制剂选自Z-VAD-fmk(Z-Val-Ala-Asp氟甲基酮；CAS号161401-82-7)；Z-IETD-fmk(Z-Ile-Glu-Thr-Asp；CAS号210344-98-2)；Z-DEVD-fmk(Z-Asp-Glu-Val-Asp；CAS号210344-95-9)；PNR-3-80(5-((1-(2-萘甲酰基)-5-氯-1H-吲哚-3-基)亚甲基)-2-硫代二氢-嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮)；PNR-3-82(5-((1-(2-萘甲酰基)-5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)亚甲基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮)；Zn2+离子；EDTA(乙二胺四乙酸)；
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞系，在所述细胞系中dna片段化受到抑制。
2.细胞系用于生产腺相关病毒(aav)的用途，在所述细胞系中dna片段化受到抑制。
3.根据权利要求1所述的细胞系，或根据权利要求2所述的用途，其中所述细胞系是aav生产细胞系。
4.根据权利要求1或3所述的细胞系，或根据权利要求2或3所述的用途，其中所述dna片段化是(i)由程序性细胞死亡引起的dna片段化，或(ii)由胱天蛋白酶3/dff40诱导的dna链断裂引起的dna片段化。
5.根据权利要求1、3或4所述的细胞系，或根据权利要求2-4中任一项所述的用途，其中所述dna片段化是低分子量dna片段化。
6.根据权利要求5所述的细胞系或用途，其中低分子量dna片段化是产生至多20kb长度的dna片段的dna片段化。
7.根据权利要求1和3-6中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-6中任一项所述的用途，其中编码生产aav所需组分的基因在所述细胞系中瞬时表达或稳定整合到细胞基因组中。
8.根据权利要求7所述的细胞系或用途，其中编码生产aav所需组分的基因选自编码aav cap蛋白vp1、vp2和vp3的基因；编码aav rep蛋白rep78、rep68、rep52和rep40的基因；编码腺病毒辅助功能e4orf6、e2a、va-rna和dbp的基因；编码ad5辅助基因e1a和e1b的基因；以及侧接aav反向末端重复序列(itr)的目标基因(goi)。
9.根据权利要求7或8所述的细胞系或用途，其中下列基因在所述细胞系中瞬时表达或稳定整合到细胞基因组中：
10.根据权利要求1和3-9中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-9中任一项所述的用途，其中所述细胞系为选自cap细胞、age1.hn、hek293、per.c6、nso1、cos-7、bhk、cho、cv1、vero、hela、mdck、brl3a、w138和hepg2细胞的细胞系。
11.根据权利要求1和3-10中任一项所述的细胞系，或根据权利要求2-10中任一项所述的用途，其中所述dna片段化是由程序性细胞死亡引起的，并且其中由程序性细胞死亡引起的dna片段化是细胞凋亡dna片段化、parthanatotic d...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·胡松，T·博尼费特，H·克维斯，
申请(专利权)人：塞维克制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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