【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种酶制剂的制备方法，尤其是一种固定化蛋白质谷氨酰胺酶(pgase)复合微球制剂的制备方法。
技术介绍
1、蛋白中富含谷氨酰胺残基，它们通过疏水或氢键相互作用诱导蛋白质的聚集和沉淀，使其溶解度降低，而低溶解度会影响蛋白质的其他加工特性(如起泡性、乳化性和稳定性等)和消化吸收特性，限制了蛋白在食品产业中的应用。采用物理法和化学法对蛋白质脱酰存在随机性和安全性低等问题，而酶法脱酰胺则具有安全高效的优点。蛋白质谷氨酰胺酶(pgase)是一种新型食品工业用酶，它具有很好的脱酰胺作用，且只对蛋白质及大分子多肽的谷氨酰胺残基起作用而不引起蛋白质的交联和水解，目前已广泛应用于蛋白的改性。
2、然而，游离的pgase酶易出现团聚和自脱酰胺，导致酶活性低、稳定性差，且价格昂贵、不能重复使用，进而限制了pgase酶在食品工业中应用。酶固定化是提高酶稳定性和使用效率、降低成本的关键技术之一，但目前对于pgase酶的固定化研究鲜有报道。此外，对于固定化蛋白酶而言，酶分子和作用底物都是蛋白大分子，由于存在结构变化、位阻效应、分配效应以及扩散限制等，都会导致固定化酶的活力损失，如何提高固定化酶的活力是该技术中的瓶颈难题。
3、我们前期研究发现花粉壁微凝胶可以提高pgase酶的活性，从微观结构上看，花粉壁微凝胶具有大量微米级孔洞结构，可以为pgase酶的附着提供天然的空间，有效解决了传质阻力过大或过小的问题；从化学组成上看，花粉壁微凝胶上含有较多的羟基和羧基等基团，可以为pgase酶提供天然的附着位点，避免了复杂的载体修
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种基于花粉壁微凝胶的复合微球固定化pgase酶(负载pgase酶的花粉壁复合凝胶微球)的制备方法，主要是为了达到方便使用和重复回收的目的，其次是为了进一步提高酶活。
2、为实现上述目的，本专利技术使用了以下技术方案：
3、一种复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，包括以下步骤：
4、s1，将向日葵花粉水洗干净后进行脱脂、碱解，使花粉水合并溶胀形成多孔结构的花粉壁微凝胶；
5、s2，配制海藻酸钠水溶液，将花粉壁微凝胶与海藻酸钠水溶液混合，以cacl2为交联剂制备复合空白微球；
6、s3，用edc/nhs对复合空白微球进行活化；
7、s4，将活化后的复合空白微球加入到蛋白质谷氨酰胺酶溶液中，恒温摇床震荡并对溶液进行抽真空处理，过滤，洗涤后得到复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶。
8、其中，所述海藻酸钠水溶液的浓度为1-5％(质量)，优选3％。
9、其中，所述花粉壁微凝胶与海藻酸钠水溶液的体积比为0.5-3:1，优选2:1。
10、其中，所述cacl2的浓度为0.5-5％(质量)。
11、其中，所述edc/nhs混合溶液的浓度为0.025-0.25％(质量)，优选0.05％，即100g溶液中含edc、nhs各0.05g。
12、其中，所述活化的温度是20-40℃。
13、其中，所述摇床震荡的温度为30-50℃，转速为100-500rpm，时间为1-5h。
14、优选地，所述摇床震荡的温度为35℃，转速为200rpm，时间为3h。
15、本专利技术的有益效果是：
16、本专利技术制备的具有很高的负载量和催化脱酰胺活性，能应用于各种蛋白的改性以提高蛋白的加工特性。在对蛋白进行改性时，将固定化pgase直接加入到配好的蛋白溶液中，操作非常方便，并且能通过离心、过滤等方式对固定化pgase进行重复回收。本专利技术制备固定化pgase还易于储藏和运输，从而更好地满足使用需求。
17、本专利技术将花粉壁微凝胶与海藻酸钠凝胶复配作为微球芯材，克服了花粉壁微凝胶无法交联固化成型的缺陷，充分利用了海藻酸钠的凝胶特性提高了pgase的重复使用性，并且所加入的海藻酸钠不影响花粉壁对pgase的吸附，使产品具有较高的负载率和酶活。本专利技术使用物理吸附+化学交联的方式对pgase进行负载，相较常规的包埋工艺或化学交联工艺具有更高的酶学性能。
18、本专利技术使用的原材料均为价廉、天然的生物质材料，具有很高的安全性，在蛋白产业应用方面具有很高的潜力。
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1.一种复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述海藻酸钠水溶液的浓度为1-5％，优选3％。
3.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述花粉壁微凝胶与海藻酸钠水溶液的体积比为0.5-3:1，优选2:1。
4.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述CaCl2的浓度为0.5-5％。
5.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述EDC/NHS混合溶液的浓度为0.025-0.25％，优选0.05％。
6.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述活化的温度是20-40℃。
7.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述摇床震荡的温度为30-50℃，转速为100-500rpm，时间为1-5h。
8.如权利要求7所述的复合微球固
...【技术特征摘要】
1.一种复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述海藻酸钠水溶液的浓度为1-5％，优选3％。
3.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述花粉壁微凝胶与海藻酸钠水溶液的体积比为0.5-3:1，优选2:1。
4.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白质谷氨酰胺酶的制备方法，其特征在于：所述cacl2的浓度为0.5-5％。
5.如权利要求1所述的复合微球固定化蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓乾春，邓紫玙，陈尚文，彭登峰，唐小倩，黄亚文，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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