【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及芽孢促生菌株b3分离筛选方法，具体涉及一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法。
技术介绍
1、盐胁迫是影响作物生长发育和产量的主要非生物因素之一，全球盐渍化土地面积约为8.31×109hm2，严重制约着全球农业生产和生态环境可持续发展，植物根际促生菌在缓解非生物胁迫中也能起到一定作用，它能够在一定程度上提高植物对干旱、盐碱等非生物胁迫的耐受性，接种bacillus subtilis cnbg-pgpr-1可以显著改善了番茄细胞稳态和叶片光合效率，降低了盐对番茄的离子毒性和渗透胁迫，bacillus safensis ts3菌株可以去除部分盐碱化对萝卜和燕麦带了的负面影响。
2、芽孢杆菌是一类分布广泛，能够产生抗逆内生芽孢的革兰氏阳性细菌，主要分布于土壤、水、空气、发酵食品和动物肠道等各种环境中，芽孢杆菌具有较好的环境适应性，在营养缺乏或其他恶劣环境条件下可以通过产生抗逆性内生芽孢的方式使其存活，大多芽孢杆菌均易分离培养，并能够以廉价的碳源为底物，在发酵过程中表现出相对稳定的状态，更重要的是很多芽孢杆菌不致病，不含外部毒素和内毒素，并能分泌多种胞外物质，故芽孢杆菌在工业、农业、食品等多个领域中均有应用。
3、因此分离筛选到具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3，探究在盐胁迫下耐盐芽孢杆菌b3对谷子的促生效果，为盐碱地专用微生物菌肥的开发应用提供依据尤为重要，为解决上述问题，我们提出一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法。
技术实现思路
1
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
3、一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，包括以下步骤：
4、s1、耐盐芽孢杆菌的分离，通过梯度稀释和培养，筛选出能够在高盐环境下生长的芽孢杆菌，以获取具备耐盐能力的菌株；
5、s2、耐盐菌株的鉴定，通过形态学观察、革兰氏染色和16s rrna序列分析对筛选出的耐盐菌株进行鉴定，确定其分类地位和特征；
6、s3、盆栽实验，将鉴定出的耐盐芽孢促生菌株b3应用于盐胁迫条件下的植物实验，评估其在实际农业环境中的促生效果；
7、s4、结果与分析，通过对实验数据的统计和分析，验证芽孢促生菌株b3在盐胁迫条件下对植物生长的促进作用，并得出结论。
8、所述s1步骤包括初筛，其中初筛步骤具体包括：
9、从咸菜样品中取1.0ml样品加入9.0ml无菌水中，稀释成10-1菌悬液；
10、按上述方法继续进行梯度稀释，制成10-2和10-3菌悬液；
11、将不同浓度梯度的菌悬液，80℃处理15min，冷却至室温后取100μl涂布在lb固体培养基上；
12、挑选不同形态的单菌落进行多次划线，得到纯化的细菌；
13、所述s1步骤包括复筛，其中复筛步骤具体包括：
14、用接种环从平板上反复挑取单菌落于盐质量分数在5-15％范围内的lb固体培养基上，30℃培养24h；
15、通过逐级提高盐质量分数，观察菌株的生长情况，选取随盐浓度增加仍然生长的菌株，最终得到最耐盐的细菌；
16、样品采自西省长治市三种不同腌制咸菜汁，以5％nacl的lb固体培养基为选择性培养基，采用稀释平板法进行耐盐细菌的分离；
17、将初筛到的菌株在不同nacl浓度下培养，分析其耐盐能力；
18、最终选取耐盐能力最强的菌种b3进行研究。
19、优选地，所述s2步骤具体包括：
20、对筛选出的耐盐菌株进行形态特征观察和革兰氏染色，观察菌落的颜色、含水状态、边缘、外观形态、隆起程度、与培养基结合程度和透明度；
21、通过16s rrna序列分析对菌株进行分子鉴定，测序结果用blast软件在genebank数据库中搜索相似序列，确认其为芽孢杆菌b3。
22、优选地，所述s3步骤具体包括：
23、将芽孢促生菌株b3制成菌液，用于处理盐胁迫下的谷子幼苗；
24、实验分为b3菌液处理组和对照组，每组设置3个平行样本；
25、处理28天后测量株高、根长、茎粗及生物量。
26、优选地，所述s4步骤具体包括：
27、记录并分析b3菌液处理组与对照组的株高、根长、茎粗及生物量差异；
28、通过统计分析验证芽孢促生菌株b3在盐胁迫条件下对谷子幼苗的促生效果。
29、进一步的，所述初筛步骤中菌悬液的稀释倍数为10-1、10-2和10-3，80℃处理15min，冷却后将稀释液分别涂布在lb固体培养基上，倒置在30℃培养24小时。
30、进一步的，所述复筛步骤中盐质量分数的范围为5％-15％，其中nacl的重量在50-150g范围内。
31、进一步的，所述纯化的细菌通过16s rrna序列分析确定为bacillus sp.strainb3，且其16s rrna序列与bacillus proteolyticus mccc 1a00365t的相似性为99.86％。
32、进一步的，所述盆栽实验中b3菌液处理组通过每隔7天灌根处理一次，处理28天后测量谷子幼苗的株高、根长、茎粗及生物量。
33、进一步的，所述结果与分析步骤中通过统计分析验证b3菌液处理组与对照组在株高、根长、茎粗及生物量上的显著差异，证明芽孢促生菌株b3在盐胁迫条件下对谷子幼苗的促生效果。
34、综上所述，本专利技术主要具有以下有益效果：
35、1、b3菌株可以提高植物在盐胁迫下的耐受性，促进植物在盐碱环境中的生长；
36、2、使用b3菌液处理后，谷子的生长显著增加，具体表现为株高、茎粗、总鲜重、总干重、根尖计、根系表面积、根体积和根系长度的增加；
37、3、芽孢杆菌b3具有较强的环境适应性，能在不同温度、ph值和盐浓度下生长，适应范围广，适应性强；
38、4、这种菌株不致病，不含外部毒素和内毒素，并能分泌多种胞外物质，适合在农业中应用，特别是作为盐碱地专用微生物菌肥，能有效提高作物产量和质量。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述S1步骤包括初筛，其中初筛步骤具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述S2步骤具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述S3步骤具体包括：
5.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述S4步骤具体包括：
6.根据权利要求2所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述初筛步骤中菌悬液的稀释倍数为10-1、10-2和10-3，80℃处理15min，冷却后将稀释液分别涂布在LB固体培养基上，倒置在30℃培养24小时。
7.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述复筛步骤中盐质量分数的范围为5％-15％，其中NaCl的重量在
8.根据权利要求3所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述纯化的细菌通过16S rRNA序列分析确定为Bacillussp.strain B3，且其16SrRNA序列与Bacillus proteolyticus MCCC 1A00365T的相似性为99.86％。
9.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述盆栽实验中B3菌液处理组通过每隔7天灌根处理一次，处理28天后测量谷子幼苗的株高、根长、茎粗及生物量。
10.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株B3分离筛选方法，其特征在于，所述结果与分析步骤中通过统计分析验证B3菌液处理组与对照组在株高、根长、茎粗及生物量上的显著差异，证明芽孢促生菌株B3在盐胁迫条件下对谷子幼苗的促生效果。
...【技术特征摘要】
1.一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，所述s1步骤包括初筛，其中初筛步骤具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，所述s2步骤具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，所述s3步骤具体包括：
5.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，所述s4步骤具体包括：
6.根据权利要求2所述的一种具有耐盐能力的芽孢促生菌株b3分离筛选方法，其特征在于，所述初筛步骤中菌悬液的稀释倍数为10-1、10-2和10-3，80℃处理15min，冷却后将稀释液分别涂布在lb固体培养基上，倒置在30℃培养24小时。
7.根据权利要求1所述的一种具有耐盐能力的芽孢促...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。