【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于冻存液，具体涉及一种脐带血造血干细胞冻存液及其冻存方法。
技术介绍
1、脐带血造血干细胞是指从新生儿脐带血液中提取的一种特殊类型的干细胞，这些细胞具有自我更新能力和分化为多种血细胞的能力，包括红细胞、白细胞、血小板等，因此在医学上有着极其重要的价值。以下是脐带血造血干细胞的主要特点和应用概述：主要特点：低免疫原性：与成体干细胞相比，脐带血干细胞的免疫原性较低，这意味着在异体移植时发生排斥反应的可能性较小。分化潜能：它们具有高度的增殖能力和多向分化潜能，能够分化为血液和免疫系统的各种细胞。
2、采集便捷：脐带血的采集是在婴儿出生后立即进行的，过程简单安全，对母亲和婴儿都无害。治疗潜力：由于上述特性，脐带血造血干细胞被广泛用于治疗多种疾病，尤其是血液和免疫系统相关疾病，如白血病、再生障碍性贫血、遗传性血液病等。应用范围：血液系统疾病：包括白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等多种恶性及非恶性血液病。
3、免疫系统疾病：对于某些免疫缺陷性疾病，脐带血干细胞移植提供了治疗的可能性。遗传性及代谢性疾病：部分遗传性和代谢性疾病，如镰状细胞病、地中海贫血等，可通过脐带血干细胞移植来治疗。神经系统疾病：虽然此领域的应用还在研究阶段，但已有尝试使用脐带血干细胞治疗如脑损伤、脊髓损伤和某些遗传性神经退行性疾病。再生医学：探索用于组织修复和再生，如心血管疾病的治疗研究。
4、脐带血造血干细胞冻存液是用于长期低温保存脐带血中珍贵的造血干细胞的一种特殊溶液。现有的脐带血造血干细胞冻存液主要成分和作用如下：dms
5、造血干细胞冻存是保证造血干细胞移植成功的关键技术之一，故其冻存方式尤为重要。探索一种操作简便、快速、成本低廉及保存时间更长的干细胞冻存方法，对于临床造血干细胞的储存、应用及造血干细胞移植成功具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种脐带血造血干细胞冻存液及其冻存方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、一种脐带血造血干细胞冻存液，包括如下重量份的原料：二甲基亚砜10-20ml、羟乙基淀粉6-10g、细胞培养基5-10ml、生理盐水5-10ml、聚乙烯吡咯烷酮3-8g、人血清白蛋白5-9ml和人自体血浆6-10ml。
4、进一步地，所述细胞培养基包括以下重量份成分：葡萄糖5-10μg/ml、大米蛋白10-15μg/ml、氨基甲酸乙酯3-8μg/ml、甘露醇5-10μg/ml、维生素c2-7ng/ml、柚皮苷4-9ng/ml、非必需氨基酸3-8μg/ml、l-天门冬酰胺10-13ng/ml、萝卜糖5-10ng/ml、硫酸镁1-5ng/ml、还原型谷胱甘肽3-8μg/ml和胎羊血清5-10μg/ml。
5、进一步地，所述非必需氨基酸为谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸或酪氨酸中的一种或两者以上的混合物。
6、进一步地，所述非必需氨基酸为质量比1:1.2-1.4:0.3-0.8的谷氨酸、甘氨酸和脯氨酸混合。
7、进一步地，羟乙基淀粉的制备方法为：
8、（1）将1l盐酸和500g医用级玉米淀粉混合，在55-60℃水浴下进行水解反应，水解时间控制在3-4小时，水解反应完成后迅速冷却至18-25℃备用；
9、（2）向烧瓶中加入1l蒸馏水和30-40g氢氧化钠混合均匀，制成碱性溶液，恢复至18-25℃备用；
10、（3）在25-30℃条件下，将碱性溶液边搅拌边缓慢加入已水解的玉米淀粉溶液中，将0.5l氯乙醇水溶液边搅拌边缓慢加入上述混合液中，反应3-5小时，并在25-30℃下放置12-15h，生成第二混合液；
11、（4）对第二混合液进行提纯脱色处理，干燥后获得羟乙基淀粉。
12、进一步地，提纯脱色处理的步骤为：用浓盐酸将第二混合液中和，加入到蒸馏水和乙醇的混合液中，搅拌后静置分层，提取上清液；将活性炭加入上清液中搅拌后，再次提取上清液，超滤，喷雾干燥，干得到羟乙基淀粉。
13、进一步地，所述步骤（1）中盐酸的摩尔浓度为2-4mol/l。
14、进一步地，氯乙醇水溶液的质量分数为50％-55％。
15、本专利技术还提供了所述脐带血造血干细胞冻存液的冻存方法，将脐带血造血干细胞加入到脐带血造血干细胞冻存液中混合均匀，得到细胞重悬液，将细胞重悬液分装入冻存袋中，再将冻存袋装入冻存袋盒中，进行程序降温后转至-196℃液氮罐冻存。
16、进一步地，冻存液中脐带血造血干细胞的浓度为2×107-4×107个/ml。
17、进一步地，进行程序降温至-80--82℃后转至-196℃液氮罐冻存。
18、与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果为：本专利技术的冻存液通过多种组分复配，协同发挥作用，能有效保护脐带血造血干细胞免受冷冻损伤，安全性高，对细胞的损伤小，可以提高造血干细胞的复苏成活率，并保证了造血干细胞复苏后的生理功能和生物学特性，微生物检测指标符合要求，延长了造血干细胞的存活期。
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1.一种脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，包括如下重量份的原料：二甲基亚砜10-20mL、羟乙基淀粉6-10g、细胞培养基5-10mL、生理盐水5-10mL、聚乙烯吡咯烷酮3-8g、人血清白蛋白5-9mL和人自体血浆6-10mL。
2.根据权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述细胞培养基包括以下重量份成分：葡萄糖5-10μg/mL、大米蛋白10-15μg/mL、氨基甲酸乙酯3-8μg/mL、甘露醇5-10μg/mL、维生素C2-7ng/mL、柚皮苷4-9ng/mL、非必需氨基酸3-8μg/mL、L-天门冬酰胺10-13ng/mL、萝卜糖5-10ng/mL、硫酸镁1-5ng/mL、还原型谷胱甘肽3-8μg/mL和胎羊血清5-10μg/mL。
3.根据权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述非必需氨基酸为谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸或酪氨酸中的一种或两者以上的混合物。
4.根据权利要求3所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述非必需氨基酸为质量比1:1.2-1.4:0.3-0.8的谷氨酸、
5.根据权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，羟乙基淀粉的制备方法为：
6.根据权利要求5所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，提纯脱色处理的步骤为：用浓盐酸将第二混合液中和，加入到蒸馏水和乙醇的混合液中，搅拌后静置分层，提取上清液；将活性炭加入上清液中搅拌后，再次提取上清液，超滤，喷雾干燥，干得到羟乙基淀粉。
7.根据权利要求5所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述步骤（1）中盐酸的摩尔浓度为2-4mol/L。
8.根据权利要求5所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，氯乙醇水溶液的质量分数为50％-55％。
9.一种权利要求1-8任一项所述的脐带血造血干细胞冻存液的冻存方法，其特征在于，将脐带血造血干细胞加入到脐带血造血干细胞冻存液中混合均匀，得到细胞重悬液，将细胞重悬液分装入冻存袋中，再将冻存袋装入冻存袋盒中，进行程序降温至-80--82℃后转至-196℃液氮罐冻存。
10.根据权利要求9脐带血造血干细胞冻存液的冻存方法，其特征在于，所述的冻存液中脐带血造血干细胞的浓度为2×107-4×107个/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，包括如下重量份的原料：二甲基亚砜10-20ml、羟乙基淀粉6-10g、细胞培养基5-10ml、生理盐水5-10ml、聚乙烯吡咯烷酮3-8g、人血清白蛋白5-9ml和人自体血浆6-10ml。
2.根据权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述细胞培养基包括以下重量份成分：葡萄糖5-10μg/ml、大米蛋白10-15μg/ml、氨基甲酸乙酯3-8μg/ml、甘露醇5-10μg/ml、维生素c2-7ng/ml、柚皮苷4-9ng/ml、非必需氨基酸3-8μg/ml、l-天门冬酰胺10-13ng/ml、萝卜糖5-10ng/ml、硫酸镁1-5ng/ml、还原型谷胱甘肽3-8μg/ml和胎羊血清5-10μg/ml。
3.根据权利要求1所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述非必需氨基酸为谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸或酪氨酸中的一种或两者以上的混合物。
4.根据权利要求3所述的脐带血造血干细胞冻存液，其特征在于，所述非必需氨基酸为质量比1:1.2-1.4:0.3-0.8的谷氨酸、甘氨酸和脯氨酸混合。
【专利技术属性】
技术研发人员：李智耀，徐智峰，张新，
申请(专利权)人：广州沙艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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