【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测分析，尤其涉及植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法。
技术介绍
1、鸢尾苷(又称射干苷)和鸢尾黄素(又称鸢尾苷元、射干苷元)为两个主要的异黄酮类化合物，鸢尾苷结构式如下：鸢尾黄素结构式如下：鸢尾苷和鸢尾黄素可从植物中提取得到，与雌激素有相似结构，因此称为植物雌激素，具有类雌激素样或抗雌激素作用，被称为天然的选择性雌激素受体调节剂，对人体健康起重要的保护作用，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤和清除自由基的作用以及细胞保护、降血糖、抗血栓形成等药理作用，应用前景巨大。异黄酮类化合物虽广泛分布于植物界，但其含量变化较大，给其分析鉴定带来很大的困难。
2、现有技术主要是从射干、葛花和蝴蝶花等鸢尾科植物中提取制备鸢尾苷和鸢尾黄素，鲜有从其他植物中提取制备鸢尾苷和鸢尾黄素，其获得途径少；现有技术对同时分析检测鸢尾苷和鸢尾黄素的技术很少，特别是对鸢尾苷和鸢尾黄素含量很少的样品，分析检测困难。
3、卿钦等报到了hplc同时测定射干提取物中的射干苷和鸢尾黄素(《华西药学杂志》2011，26(6)∶595-597)，以水(磷酸调ph3)－甲醇为流动相，线性范围为0.2-10.0μg/ml。赵楠等报到了hplc法测定葛花中鸢尾苷和鸢尾苷元的含量(《药学实践杂志》2012，30(3)：226-228)，其鸢尾苷在2.0-120.0μg/ml呈线性关系，鸢尾苷元在0.8-80.0μg/ml呈线性关系。陈盛余等报到了高效毛细管电泳紫外检测法分离检测射干苷和鸢尾黄素(《分析试验室》2011，30(3)∶80-82)，线
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，本专利技术采用hplc法和lc-ms法同时检测植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的方法，可供不同含量范围的样品分析检测，检出限和定量限更宽泛，普适性更强，可助推含有鸢尾苷和鸢尾黄素植物更广泛的开发利用。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、一种植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，包括以下步骤：
4、(1)将待测植物样品进行预处理，得到植物样品待测溶液；
5、(2)将所述植物样品待测溶液进行hplc或lc-ms分析，得到待测样品的色谱图；
6、(3)根据所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，用外标法以标准方程计算得到植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的含量，所述标准方程是以鸢尾苷和鸢尾黄素的质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程。
7、在本专利技术中，采用hplc方法时，鸢尾苷和鸢尾黄素的可检测浓度独立地为0.05-15μg/ml，鸢尾苷和鸢尾黄素的最低检出限分别为0.05μg/ml和0.10μg/ml，最低定量限分别为0.10μg/ml和0.15μg/ml；采用lc-ms方法时，鸢尾苷和鸢尾黄素的可检测浓度范围独立地为0.1-100ng/ml，鸢尾苷和鸢尾黄素的最低检出限分别为0.2ng/ml和0.1ng/ml，最低定量限分别为0.25ng/ml和0.15ng/ml。本专利技术提供了两种同时检测植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的方法，实现了植物中不同浓度范围的鸢尾苷和鸢尾黄素的同时定性定量测定。hplc法成本更低，普适性更强；lc-ms法检出限和定量限更低，更快捷。两种方法的响应和保留时间的相对标准偏差均很小，方法的精密度、重现性和稳定性均很好。
8、进一步地，所述待测植物包括鸢尾科植物、杜鹃花科植物或其他含有鸢尾苷和鸢尾黄素的植物。
9、进一步地，所述预处理包括：
10、将所述待测植物与提取液混合后超声提取，得到滤液；
11、将所述滤液减压浓缩，得到植物样品提取物；
12、将所述植物样品提取物分散于水中，依次用氯仿、乙酸乙酯各萃取三次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩后，用甲醇溶解，得到植物样品待测溶液；
13、将所述植物样品待测溶液用0.22μm的有机微孔滤膜过滤。
14、进一步地，在待测植物样品预处理过程中，所述提取液为甲酸酸化的甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液中醇的体积百分含量为50-100％(即甲醇溶液中甲醇的体积百分含量为50-100％，乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为50-100％)，所述甲酸的体积分数为0.1-1.0％。
15、进一步地，在待测植物样品预处理过程中，所述待测植物与提取液的固液比为1g∶(2-20)ml。
16、进一步地，在待测植物样品预处理过程中，所述超声提取的条件为：功率320-720w，时间0.25-1.0h，温度0-60℃。
17、进一步地，在待测植物样品预处理过程中，所述减压浓缩的温度为40-60℃。
18、进一步地，在待测植物样品预处理过程中，所述植物样品提取物与水的固液比为1g∶(1-10)ml；所述植物样品提取物的水分散体系与氯仿或乙酸乙酯按(1∶1)-(1∶3)(v:v)萃取三次。
19、进一步地，所述hplc分析的色谱条件为：
20、分析柱：c18柱；流速：0.8ml/min；检测波长：264nm；检测温度：30℃；进样体积：20μl；检测时间：30min；流动相：水相b为0.1v％甲酸-5mmol/l乙酸胺水溶液，有机相a为乙腈；
21、洗脱方式：梯度洗脱；0min，a:b＝25:75(体积比，下同)；5min，a:b＝35:65；10min，a:b＝35:65；15min，a:b＝40:60；20min，a:b＝40:60，25min；a:b＝80:20，30min，a:b＝25:75。
22、进一步地，所述hplc分析过程中所用c18柱为sb-18，规格为5μm，4.6×250mm。
23、进一步地，所述lc-ms分析的色谱条件为：
24、液相色谱条件为：
25、分析柱：c18柱；流速：0.4ml/min；检测温度：40℃；进样体积：3μl；检测时间：4min；流动相：水相b为0.1v％甲酸-5mmol/l乙酸胺水溶液，有机相a为乙腈；
26、洗脱方式：洗脱方式：梯度洗脱；0min，a:b＝90:10(体积比，下同)；0.5min，a:b＝80:20；1.0min，a:b＝60:40；1.2min，a:b＝15:85；3.5min，a:b＝40:60；4.0min，a:b＝90:10；
27、质谱条件为：
28、离子源：电喷雾电离；扫描方式：正离子和负离子切换扫描；检测方式：正负离子多反应监测(mrm)模式；毛细管电压：正离子4000，负离子4000；干燥气温度：300℃；
29、干燥气流速：8l/min；雾化气压力：40psi；鞘气温度：3本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述预处理包括：
3.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述提取液为甲酸酸化的甲醇或乙醇溶液，醇溶液中醇的体积百分含量为50-100％，所述甲酸的体积分数为0.1-1.0％。
4.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述待测植物与提取液的固液比为1g∶(2-20)mL。
5.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述超声提取的条件为：功率320-720W，时间0.25-1.0h，温度0-60℃。
6.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述减压浓缩的温度为40-60℃。
7.根据权利要求1所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述HPLC分析的色谱条件为：
8.根据权利要求7所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄
9.根据权利要求1所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述LC-MS分析的色谱条件为：
10.根据权利要求9所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述LC-MS分析过程所用C18柱为Plus C18，规格为2.6μm，2.1×100mm。
...【技术特征摘要】
1.一种植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述预处理包括：
3.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述提取液为甲酸酸化的甲醇或乙醇溶液，醇溶液中醇的体积百分含量为50-100％，所述甲酸的体积分数为0.1-1.0％。
4.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述待测植物与提取液的固液比为1g∶(2-20)ml。
5.根据权利要求2所述的植物中鸢尾苷和鸢尾黄素的同时检测方法，其特征在于，所述超声提取的条件为：功率320-720w，时间0.25-1.0h，温度0-60℃。
...【专利技术属性】
技术研发人员：徐青，胡晓燕，周元敬，龙尚俊，李金燕，
申请(专利权)人：贵州省生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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