【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种包膜病毒样颗粒高效展示跨膜蛋白的方法。
技术介绍
1、跨膜蛋白是一类广泛存在于生物体内，能够跨越细胞膜一次或多次的蛋白质，以跨膜蛋白为靶点的创新药研发一直是医药领域的研究热点，其中离子通道、转运蛋白、g蛋白偶联受体和激酶是药物研发中最大的一类药物靶点。然而跨膜蛋白的制备面临着许多瓶颈，例如，跨膜蛋白通常嵌入到脂双层中，因此在溶液中的溶解度往往较低；此外，跨膜蛋白的结构复杂，包含多个跨膜区域、环状结构和糖基化修饰等，这些都增加了跨膜蛋白的制备难度。
2、病毒样颗粒（vlp，virus-like particle）来源于病毒的外层衣壳蛋白，由一种或者多种衣壳蛋白组分自动组装形成的纳米结构的微小颗粒。vlp不含有病毒基因组，无感染性，同时还具有与天然病毒类似的结构，此特殊的空间结构能够引起强烈的免疫应答反应，包括产生抗体和细胞介导的免疫反应。这样的特性使得vlp具有广泛的应用价值。vlp主要分为包膜病毒样颗粒(evlp)和非包膜病毒样颗粒(vlp)。当正确折叠的跨膜蛋白在细胞膜上表达时，包膜病毒的衣壳蛋白形成的病毒样颗粒通过出芽的方式被包裹上携带有跨膜蛋白的细胞膜，形成evlp，将跨膜蛋白展示在evlp的表面，使这些复杂的跨膜蛋白转变为可溶性的、高浓度的evlp形式的蛋白用于免疫和抗体筛选。
3、然而，通过evlp出芽的方式展示跨膜蛋白具有随机性，同时相较于其他类型蛋白，跨膜蛋白通常表达量较低，只有正确地折叠且嵌入细胞膜位点上跨膜蛋白才能通过evlp展示，因此出芽形成的evlp
4、所以目前缺乏能够提高跨膜蛋白展示丰度的evlp技术，而提高evlp上跨膜蛋白的丰度，能够增强实验动物对跨膜蛋白免疫反应应答的效果和抗体筛选的效率，这将助力以跨膜蛋白为靶点的创新药的研发。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种提高包膜病毒样颗粒（evlp）展示跨膜蛋白或其功能片段丰度的方法，用于解决现有技术中的问题。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种evlps展示跨膜蛋白或其功能片段的方法，包含如下步骤：将编码目标蛋白与gp41蛋白胞内区的融合蛋白的基因，以及编码包膜病毒样颗粒骨架蛋白的基因导入宿主细胞，培养宿主细胞以出芽形成展示有跨膜蛋白或其功能片段的包膜病毒样颗粒。
3、所述编码目标蛋白与gp41蛋白胞内区的融合蛋白的基因以核酸构建体的形式导入宿主细胞，和/或，所述编码包膜病毒样颗粒骨架蛋白的基因以核酸构建体的形式导入宿主细胞。
4、本专利技术还提供一种vlp疫苗或vlp制剂，所述vlp疫苗或vlp制剂包含由上述方法获得的已展示跨膜蛋白的病毒样颗粒。
5、本专利技术还提供上述vlp制剂在制备抗体或筛选抗体中的用途。
6、如上所述，本专利技术一种提高包膜病毒样颗粒展示跨膜蛋白或其功能片段丰度的方法，具有以下有益效果：基于evlp骨架蛋白与gp41蛋白胞内区相互作用、目标跨膜蛋白与gp41蛋白胞内区融合提高目标跨膜蛋白的膜定位，进而提高包膜病毒样颗粒展示跨膜蛋白或其功能片段的效率；简单的操作步骤减少了生产过程中的复杂性和成本；增强跨膜蛋白免疫反应应答的效果和抗体筛选的效率，促进以跨膜蛋白为靶点的创新药的研发。
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1.一种包膜病毒样颗粒展示跨膜蛋白或其功能片段的方法，其特征在于，包含如下步骤：将编码目标蛋白与gp41蛋白胞内区的融合蛋白的基因，以及编码包膜病毒样颗粒骨架蛋白的基因导入宿主细胞，培养宿主细胞以出芽形成展示有跨膜蛋白或其功能片段的包膜病毒样颗粒。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述跨膜蛋白为作为药物靶点的跨膜蛋白。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述作为药物靶点的跨膜蛋白为四次跨膜蛋白、七次跨膜蛋白或十一次跨膜蛋白。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述四次跨膜蛋白为Claudin 6蛋白或CD20，或所述七次跨膜蛋白为GPCRs，或所述十一次跨膜蛋白为NaPi2b。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包膜病毒样颗粒骨架蛋白为HIV-1 gag蛋白、MLV gag蛋白、SIV gag蛋白、FIV gag蛋白、HTLV-1 gag蛋白或HTLV-1 gag蛋白中的一种或多种。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标蛋白为跨膜蛋白的胞内区或跨膜蛋白的功能片段的胞内区。
...【技术特征摘要】
1.一种包膜病毒样颗粒展示跨膜蛋白或其功能片段的方法，其特征在于，包含如下步骤：将编码目标蛋白与gp41蛋白胞内区的融合蛋白的基因，以及编码包膜病毒样颗粒骨架蛋白的基因导入宿主细胞，培养宿主细胞以出芽形成展示有跨膜蛋白或其功能片段的包膜病毒样颗粒。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述跨膜蛋白为作为药物靶点的跨膜蛋白。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述作为药物靶点的跨膜蛋白为四次跨膜蛋白、七次跨膜蛋白或十一次跨膜蛋白。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述四次跨膜蛋白为claudin 6蛋白或cd20，或所述七次跨膜蛋白为gpcrs，或所述十一次跨膜蛋白为napi2b。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包膜病毒样颗粒骨架蛋白为hiv-1 gag蛋白、mlv gag蛋白、siv gag蛋白、fiv gag蛋白、htlv-1 gag蛋白或htlv-1 gag蛋白中的一种或多种。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标蛋白为跨膜蛋白的胞内区或跨膜蛋白的功能片段的胞内区。
7.如权利要求6所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张瑜，崔利兰，徐志豪，高凡，石加加，
申请(专利权)人：苏州近岸蛋白质科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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