【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于特立帕肽改性，具体涉及一种聚乙二醇定点修饰的特立帕肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术。
2、随着人口老龄化，骨质疏松正逐渐成为全球常见疾病之一。骨质疏松会使患者骨骼强度降低，增大患者骨折的风险。骨质疏松性骨折和骨脆性的增加严重降低了患者的生活质量，给患者和社会都带来了经济负担。据文献报道，在50岁以上的髋部骨折患者中，每年约有20％的患者会死亡，50％的患者会出现残疾。这表明进行有效的骨质疏松症的诊断和治疗对于预防骨折至关重要。根据其作用机制，骨质疏松治疗药物可分为骨吸收抑制剂和骨形成促进剂。目前临床上使用的骨吸收抑制剂主要包括选择性雌激素受体调节剂、降钙素、雌激素、双磷酸盐和rankl抑制剂，骨形成促进剂主要包括甲状旁腺激素类似物(特立帕肽和阿巴帕肽)。一些研究表明，特立帕肽能够改善骨密度和骨的生物力学特性，并加速骨折愈合。
3、特立帕肽是人甲状旁腺激素n端活性片段，由34个氨基酸组成，一般简称pth(1-34)，其皮下注射的半衰期为1h，目前已在世界范围内被批准用于治疗男性骨质疏松以及女性绝经后的骨质疏松。但pth(1-34)存在体内代谢较快，半衰期较短的问题，需要每日注射给药，给患者带来极大不便。
4、peg是一种具有末端羟基的直链或支链聚合物，其结构式为ho-(ch2ch2o)n-ch2ch2-oh。单甲氧基peg因具有单一的反应基团，而常用于蛋白质和多肽的修饰，其结构式为ch3o-(ch2ch2o)n
5、铜催化的叠氮化物-炔烃环加成(cuaac)能够形成1,4-二取代的三唑，反应速率较快，目前已在有机合成、聚合物功能化、药物发现和化学生物学等领域广泛应用，但是，cuaac在生物偶联中的应用仍有一些局限性。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种聚乙二醇定点修饰的特立帕肽及其制备方法和应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
3、第一方面，本专利技术提供一种聚乙二醇定点修饰的特立帕肽，聚乙二醇修饰于特立帕肽的13位、26位或27位中的至少一个位点；
4、聚乙二醇的修饰结构如下所示：
5、
6、第二方面，本专利技术提供所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，包括如下步骤：
7、将4-二苯并环辛醇dibo和甲氧基聚乙二醇发生亲核取代反应，制备dibo-mpeg；
8、特立帕肽衍生物与dibo-mpeg通过生物正交反应，制备聚乙二醇定点修饰的特立帕肽；
9、特立帕肽衍生物中发生生物正交反应的氨基酸侧链的结构为：
10、该侧链位于特立帕肽的13位、26位或27位中的至少一个位点上。
11、4-二苯并环辛醇(dibo)的衍生物具有与含有叠氮基的糖和氨基酸反应迅速的特点，可用于可视化活细胞的代谢标记。因此，通过spaac反应对pth(1-34)进行peg定点修饰，可以有效解决pth(1-34)半衰期较短的问题。
12、在一些实施例中，dibo和甲氧基聚乙二醇亲核取代的催化剂为三乙胺，溶剂为二氯甲烷。
13、优选的，亲核取代的温度为20-30℃，亲核取代的时间为10-15h。
14、在一些实施例中，生物正交反应的温度为1-5℃，反应时间为2-6h。
15、优选的，生物正交反应的温度为3-5℃，反应时间为3-5h。
16、进一步优选的，特立帕肽衍生物与dibo-mpeg的摩尔比为1:0.8-1.2，优选为1:1。
17、在一些实施例中，聚乙二醇的分子量为10-20kda。
18、在一些实施例中，还包括将制备的聚乙二醇定点修饰的特立帕肽进行分离纯化的步骤。
19、优选的，所述分离纯化的方法为离子交换层析或凝胶过滤层析。
20、第三方面，本专利技术提供所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
21、上述本专利技术的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
22、本专利技术的聚乙二醇定点修饰的特立帕肽在大鼠体内的半衰期得到了显著延长，是特立帕肽的5倍，能够减少患者的给药频率。
23、本专利技术的聚乙二醇定点修饰的特立帕肽在相同给药剂量下，治疗骨质疏松的药效学作用优于特立帕肽。
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1.一种聚乙二醇定点修饰的特立帕肽，其特征在于：聚乙二醇修饰于特立帕肽的13位、26位或27位中的至少一个位点；
2.权利要求1所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：DIBO和甲氧基聚乙二醇亲核取代的催化剂为三乙胺，溶剂为二氯甲烷。
4.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：亲核取代的温度为20-30℃，亲核取代的时间为10-15h。
5.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：生物正交反应的温度为1-5℃，反应时间为2-6h；
6.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：特立帕肽衍生物与DIBO-mPEG的摩尔比为1:0.8-1.2。
7.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：聚乙二醇的分子量为10-20kDa。
8.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征
9.根据权利要求8所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的方法为离子交换层析或凝胶过滤层析。
10.权利要求1所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽，或权利要求2-9任一所述制备方法制备得到的聚乙二醇定点修饰的特立帕肽在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇定点修饰的特立帕肽，其特征在于：聚乙二醇修饰于特立帕肽的13位、26位或27位中的至少一个位点；
2.权利要求1所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：dibo和甲氧基聚乙二醇亲核取代的催化剂为三乙胺，溶剂为二氯甲烷。
4.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：亲核取代的温度为20-30℃，亲核取代的时间为10-15h。
5.根据权利要求2所述聚乙二醇定点修饰的特立帕肽的制备方法，其特征在于：生物正交反应的温度为1-5℃，反应时间为2-6h；
6.根据权利要求2所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：娄红祥，刘甜甜，李媛，徐泽军，孙斌，胡富浩，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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