本发明专利技术涉及一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法。该方法是将鸡蛋样品经过提取、净化、浓缩后，以乙腈－磷酸二氢钠溶液为流动相，采用Ｃ１８柱５μｍ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，流速为１．０～１．２ｍＬ／ｍｉｎ，在激发波长２２５ｎｍ、发射波长为２８５ｎｍ处用荧光检测器检测；所说的乙腈－磷酸二氢钠溶液为０．０１ｍｏｌ／Ｌ，含０．００５ｍｏｌ／Ｌ十二烷基硫酸钠和０．１％三乙胺，乙腈和ＮａＨ２ＰＯ４溶液体积比为３０～３５∶７０～６５。本发明专利技术具有成本低、灵敏度高的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽药残留检测领域，具体涉及一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法。
技术介绍
目前国内外对甲砜霉素、氟苯尼考及代谢产物氟苯尼考胺的残留检测方法虽然有 不少报道，但主要集中在水产品的研究，检测方法主要有高效液相色谱紫外检测法(HPLC/ UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC/FLU)、高效液相色谱质谱联用检测法(HPLC-MS)。 HPLC/UV法样品杂质峰较多，干扰较大，对样品的净化要求较高，而且紫外检测器的灵敏度 较低。HPLC-MS法虽然灵敏度很高，但是其价格昂贵，很难在实际生产中普及。HPLC/FLU法 灵敏度高，样品杂质峰较少，对样品的净化要求较低。HPLC/FLU法同时检测鸡蛋中甲砜霉 素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留国内尚未见报道。
技术实现思路
为了使待测组分峰与杂质峰完全分开，且均为基线分离峰，使检测限低于0. 1个 MRLs，使定量限低于0. 2个MRLs，本专利技术提供了一种高效液相色谱荧光检测法，能同时检测 鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留。 本专利技术所采用的技术方案是一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物 氟苯尼考胺残留的方法，是将鸡蛋样品经过提取、净化、浓縮后，以乙腈_磷酸二氢钠溶液 为流动相，采用〇18柱(5线250mmX4. 6mm)，流速为1. 0 1. 2mL/min，在激发波长225nm、 发射波长为285nm处用荧光检测器检测；其中所说的乙腈_磷酸二氢钠溶液为0. 01mo1/ L，含O. 005mol/L十二烷基硫酸钠和0. 1%三乙胺，乙腈和NaH2P04溶液体积比为30 35 : 70 65。 本专利技术中鸡蛋样品提取、净化、浓縮可采用常规的乙腈、丙酮提取，但因乙腈、丙酮 提的回收率低，所以本专利技术推荐使用体积比49 : 49 : 2的乙酸乙酯-乙腈-氨水提取，具 体操作是将鸡蛋制成匀浆后，加入30%-50%乙腈溶液中混匀，再用体积比49 : 49 : 2的 乙酸乙酯_乙腈_氨水提取振荡萃取，离心，将上清液移出，重复萃取3-4次，合并上清液， 即得提取液；提取液在氮吹仪上吹干，用乙腈溶解残渣，再用经纯乙腈饱和的正己烷重复脱 脂，然后氮吹仪上再次吹干，用30% _35%乙腈溶液溶解残渣，离心，过滤，得滤液，即浓縮 液。浓縮液即可用于HPLC检测。 本专利技术方法与HPLC/FLU法检测水产品中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢产物氟苯 尼考胺的方法相比(l)流动相不同。本方法选择的流动相为乙腈-磷酸二氢钠溶液 (0.01mol/L，含0.005mol/L十二烷基硫酸钠和0. 1%三乙胺)(体积比30 35 : 70 65)，报道的流动相为乙腈-乙酸铵溶液(0. 025mol/L，含0. Olmol/L庚烷磺酸钠)(体 比 15 : 85)，本方法所用离子对试剂十二烷基硫酸钠比庚烷磺酸钠便宜很多；(2)出峰顺序不同。本方法选择的流动相分析出峰顺序为甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺，而报道的流 动相分析出峰顺序为甲砜霉素、氟苯尼考胺、氟苯尼考，相比之下本方法峰形相对较好，分 析时间縮短；(3)检测波长不同。本方法采用荧光检测器检测(激发波长225nm，发射波长 285nm)，报道的方法采用荧光检测器检测(激发波长224nm，发射波长295nm)，相比之下本方法灵敏度高。附图说明 图1是鸡蛋空白对照样品色谱图； 图2是TAP (200 ii g/L) +FF (200 ii g/L) +FFA (40 ii g/L)标准溶液色谱图(25 ii L进 样)； 图3是.TAP(100ii g/kg)+FF(100ii g/kg)+FFA(20ii g/kg)空白鸡蛋添加色谱图(100il L进样)； 图4是口服给药样品色谱图。 具体实施例方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。 下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。应理解，这些实施例 只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。 在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相 同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。 本专利技术中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为质量百分浓度。 1.实验鸡的饲养、给药和样品采集 1. l实验鸡选择及分组选取28周龄京海黄鸡175只，体重1. 75 ±0. 20kg，随机分成7组，每组25只，单笼 饲养。A、B、C组为甲砜霉素试验组，D、E、F组为氟苯尼考试验组，G组为空白对照组。给药 前分别称重、编号。试验前预饲1周，饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，自由饮水。 1. 2给药剂量、途径及样品采集 各试验组产蛋鸡投药剂量如表l所示。给药前先将甲砜霉素和氟苯尼考灌注于 空心胶囊中，然后分别直接投入到鸡的嗦囊中。试验组每天给药一次，给药时间均在上午 8:00-9:00，连续5d，自给药日起至停药后15d内收集每天的鸡蛋。 表1给药方案 <table>table see original document page 5</column></row><table> 2 (1)乙酸乙酯_乙腈_氨水提取、净化与浓縮步骤 ①用匀桨机将鸡蛋制成匀桨； ②准确称取2. 0-3. 0g鸡蛋匀浆样品，放于30-50mL具塞离心管中； ③加入1-1. 5mL 30% -50%乙腈溶液置漩涡混合器上混匀； ④加入4-6mL乙酸乙酯-乙腈-氨水(49 : 49 : 2， V/V)，旋涡振荡混匀1-2min，再用超声波振荡萃取15min ; ⑤6000-8000r/min离心10-15min，上清液转移至20_25mL玻璃管中； ⑥重复提取3-4次，合并上清液； ⑦在35-55t:水浴中，用氮气吹干； ⑧加入1. OmL-l. 5mL乙腈溶解，涡旋振荡混匀1-2min ; ⑨加3. 0-5. 0mL饱和正己烷(用纯乙腈饱和)脱脂，弃去上层正己烷，重复脱脂2 次； 在35-55t:水浴中，用氮气吹干；冷冻保存； 上机前用1. 0mL 30% _35%乙腈溶解，转移至1. 5mL离心管中； ⑩12000-13400r/min离心15分钟，上清液经0. 22 y m滤膜过滤，滤液供HPLC测定。 (2)乙腈提取、净化与浓縮步骤 ①用匀桨机将鸡蛋制成匀桨； ②准确称取2. 0g鸡蛋匀浆样品，放于50mL具塞离心管中； ③加入lmL 35%乙腈溶液置漩涡混合器上混匀； 加入4mL乙腈，涡旋振荡混匀l-2min，再用超声波振荡萃取15min ; ⑤6000-8000r/min离心10-15min，上清液转移至25mL玻璃管中； ⑥重复提取3-4次，合并上清液； ⑦在35-55t:水浴中，用氮气吹干； ⑧加入1. OmL乙腈溶解，旋涡振荡混匀1-2min ; ⑨加3. OmL饱和正己烷(用纯乙腈饱和)脱脂，弃去上层正己烷，重复脱脂2次； 在35-55t:水浴中，用氮气吹干；冷冻保存； 上机前用1. OmL 35%乙腈溶解，转移至1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法，其特征在于，是将鸡蛋样品经过提取、净化、浓缩后，以乙腈－磷酸二氢钠溶液为流动相，采用Ｃ↓［１８］柱５μｍ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，流速为１．０～１．２ｍＬ／ｍｉｎ，在激发波长２２５ｎｍ、发射波长为２８５ｎｍ处用荧光检测器检测；所说的乙腈－磷酸二氢钠溶液为０．０１ｍｏｌ／Ｌ，含０．００５ｍｏｌ／Ｌ十二烷基硫酸钠和０．１％三乙胺，乙腈和ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］溶液体积比为３０～３５∶７０～６５。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢恺舟，姚宜林，李洋静，陈书琴，徐东，裴燕，谢星，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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