【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗领域。
技术介绍
1、近年来，晚期黑色素瘤的治疗发生了巨大变化，肿瘤免疫治疗显著延长了患者的生存期。肿瘤免疫治疗主要通过改变免疫刺激或免疫抑制分子的信号通路来激活抗肿瘤免疫反应。临床使用免疫检查点抑制剂，如抗pd-1和抗ctla-4抗体，已在大约30-40%的晚期黑素瘤患者中显示出临床疗效。然而，很大一部分患者对这些免疫检查点抑制剂响应率低下。因此，探索新型的免疫检查点分子是目前研究的前沿热点。
2、其中，免疫检查点cd137(4-1bb，tnfrsf9)属于诱导受体肿瘤坏死因子受体超家族，cd137主要表达在活化的t淋巴细胞和自然杀伤细胞上。唯一已知的天然配体4-1bbl(cd137l)在抗原呈递细胞(apcs)表面表达。cd137l是tnf超家族(tnfsf)的ii型跨膜蛋白，以膜形式存在，与t细胞上的受体结合后，随后招募特定的tnf受体相关因子(traf1、traf2和traf3)和启动子。traf2和traf3启动下游信号级联，如nf-κb、erk、jnk和p38 mapk通路，为t细胞激活提供强大的共刺激信号。在过去的几十年里，越来越多的努力使用cd137作为潜在的第二代免疫肿瘤靶点，以进一步刺激肿瘤特异性t细胞。对抗cd137的对抗抗体在小鼠黑色素瘤、胶质母细胞瘤和淋巴瘤模型中有效地减少各种肿瘤。然而，评估两种cd137特异性单克隆抗体(mabs)的临床试验因无法忍受的肝毒性(urelumab, bms)或低疗效(u
3、除了作为cd137的配体外，cd137l还可以接收信号并将其传递给表达信号的细胞，这一过程被称为反向信号。因此，cd137l的表达在不同的细胞中具有不同的功能。近年研究表明cd137l不仅在抗原提呈细胞中表达，在某些癌症中，肿瘤细胞中检测到cd137l的异常表达，并可能影响肿瘤的进展。如在胰腺癌中，促进结肠癌的耐药和转移。因此，在临床应用激动性抗cd137抗体或阻断cd137-cd137l相互作用之前，了解cd137与cd137l相互作用在每种恶性肿瘤中的参与情况是很重要的。然而，cd137l在黑色素瘤中的功能和调控尚未被研究。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。
2、在本研究中，我们发现cd137l在黑素瘤细胞中弱表达，但过表达cd137l可通过促进t细胞活化介导的抗肿瘤免疫从而显著抑制肿瘤增殖。此外，我们通过dna pull down实验，揭示解旋酶样转录因子(hltf)可与cd137l启动子结合并抑制其表达，并且其398位点的ser可被ampk磷酸化。进一步研究还证实了敲除hltf可通过上调肿瘤cd137l促进t细胞杀伤活性，并且抑制免疫正常小鼠黑素瘤增殖，而目前尚无hltf的靶向抑制剂被研发。并且，ampk激动剂aicar与pd-1或ctla4抗体联合在体内对肿瘤生长有协同作用。在本研究中，我们发现了ampk/hltf/cd137l这样一种新的免疫调控机制，为黑色素瘤的治疗提供了一种新的治疗策略。此外，我们还提出了cd137l和pd-l1联合模型可预测抗pd-1治疗黑素瘤患者的疗效，有望成为抗pd-1治疗疗效预测的潜在指标。
3、本专利技术的技术方案如下：
4、检测ampk/hltf/cd137l轴表达水平的制剂在制备pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗用药检测试剂中的应用，所述ampk/hltf/cd137l轴包括ampk、hltf或者cd137l，所述肿瘤为实体肿瘤。
5、基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物在制备pd-l1/pd-1、ctla-4免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用，所述基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物包括ampk的激活剂、hltf的抑制剂、或者cd137l的激活剂，所述肿瘤为实体肿瘤。
6、基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物与pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗药物联用在制备肿瘤免疫辅助治疗策略中的应用，所述基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物包括ampk的激活剂、hltf的抑制剂、或者cd137l的激活剂，所述肿瘤为实体肿瘤。
7、ampk激活剂aicar与pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗药物联用在制备肿瘤免疫辅助治疗策略中的应用。
8、靶向抑制hltf在制备pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用。
9、所述实体肿瘤优选为黑色素瘤。
10、所述ampk的激活剂优选为aicar。
11、所述hltf的抑制剂为靶向敲除hltf的制剂，具体为sgrna，进一步优选为seq idno.1和seq id no.2。
12、前面技术方案中：所述肿瘤优先为实体肿瘤。所述肿瘤进一步优先为黑色素瘤。
13、在现有的研究中，pd-1阻断治疗显示出较为良好的抗癌作用，但其整体应答率仍不尽如人意。这种现象产生的部分原因认为可能与肿瘤微环境中免疫细胞浸润及活化状态密切相关，而目前我们对肿瘤免疫微环境的调控机制仍不明确。从我们展现的研究数据来看，如图1所示，通过收集临床上已接受pd-l1/pd-1免疫检查点单抗治疗的黑色素瘤患者的肿瘤组织样本石蜡切片以及临床随访数据，通过免疫荧光法检测肿瘤上cd137l和pd-l1蛋白表达，使用tps（tumor proportion score）法计算肿瘤阳性比例，并关联患者的免疫应答、风险预后及无疾病进展生存时间（pfs），我们发现cd137l或pd-l1高表达的患者接受pd-1单抗的应答效果更好，风险预后更佳，患者pfs更长，并且进一步发现cd137l和pd-l1同时高表达的患者pfs更长，且均有显著统计学差异。如图2所示，通过使用ampk激活剂aicar联合pd-1或ctla-4单抗治疗小鼠肿瘤，我们发现激活ampk可显著增强pd-1或ctla-4单抗抗小鼠肿瘤增殖作用，促进抗肿瘤免疫活化，延长小鼠生存时间，且无显著毒副表现。如图3所示，通过构建黑色素瘤皮下移植瘤免疫小鼠模型，我们观察到敲除肿瘤hltf可使cd137l表达上调，促进抗肿瘤免疫活性，从而显著抑制肿瘤增殖能力。从以上结果均可提示我们针对ampk/hltf/cd137l轴这一新的靶点，可为肿瘤icbs免疫治疗提供新的免疫检测靶点，开发检测试剂或者提供免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。名称解释：pd-l1/pd-1中的“/”代表“和”或者“或”的意思。
14、以下结合附图和具体实施方式对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测AMPK/HLTF/CD137L轴表达水平的制剂在制备PD-L1/PD-1、CTLA-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗用药检测试剂中的应用，所述AMPK/HLTF/CD137L轴包括AMPK、HLTF或者CD137L，所述肿瘤为实体肿瘤。
2.基于AMPK/HLTF/CD137L轴的靶向药物在制备PD-L1/PD-1、CTLA-4免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用，所述基于AMPK/HLTF/CD137L轴的靶向药物包括AMPK的激活剂、HLTF的抑制剂、或者CD137L的激活剂，所述肿瘤为实体肿瘤。
3.基于AMPK/HLTF/CD137L轴的靶向药物与PD-L1/PD-1、CTLA-4等免疫检查点单抗药物联用在制备肿瘤免疫辅助治疗策略中的应用，所述基于AMPK/HLTF/CD137L轴的靶向药物包括AMPK的激活剂、HLTF的抑制剂、或者CD137L的激活剂，所述肿瘤为实体肿瘤。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述应用，其特征是，所述实体肿瘤为黑色素瘤。
5.根据权利要求1-3中任意一项所述应用，其特征是，所述AMP
6.根据权利要求1-3中任意一项所述应用，其特征是，所述HLTF的抑制剂为靶向敲除HLTF的制剂，具体为sgRNA。
7.根据权利要求6所述应用，其特征是，所述HLTF的抑制剂为靶向敲除HLTF的制剂，具体为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
...【技术特征摘要】
1.检测ampk/hltf/cd137l轴表达水平的制剂在制备pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗用药检测试剂中的应用，所述ampk/hltf/cd137l轴包括ampk、hltf或者cd137l，所述肿瘤为实体肿瘤。
2.基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物在制备pd-l1/pd-1、ctla-4免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用，所述基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物包括ampk的激活剂、hltf的抑制剂、或者cd137l的激活剂，所述肿瘤为实体肿瘤。
3.基于ampk/hltf/cd137l轴的靶向药物与pd-l1/pd-1、ctla-4等免疫检查点单抗药物...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪，陈翔，梁龙，匡欣薇，刘静，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：
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