【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于单克隆抗体，尤其涉及一种稳定表达可特异性针对casq2的单克隆抗体的杂交瘤细胞株、该特异性针对casq2的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株和该单克隆抗体的具体应用。
技术介绍
1、肌钙集蛋白(calsequestrin 2，casq2)是一种钙离子储存蛋白，通过与兰碱尼受体2形成复合物来调节细胞钙离子水平。目前关于casq2的研究主要集中于心脏，其在肿瘤中的生物学作用研究较少。
2、专利技术人前期研究发现casq2可促进结直肠癌细胞迁移，其在结肠癌患者肿瘤组织中表达上调与结直肠癌患者预后不良密切相关，提示casq2可能成为潜在治疗靶点。因此有必要开发用于检测、靶向casq2的单克隆抗体，为癌症的诊断、治疗提供新的思路和工具，这具有重要的意义及应用价值。
技术实现思路
1、为解决上述技术难题，本专利技术提供了一种针对casq2的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本专利技术中的杂交瘤细胞株为anti-casq2，保藏编号为cgmcc no.46001，产生的抗体为抗casq2重组单克隆抗体，亚型鉴定为igg2b型。本专利技术采用带有his标签的casq2全长蛋白免疫icr小鼠，因为其携带的标签分子量较小，相对于mbp、gst等大分子标签来说免疫原性较低，产生的抗体特异性较好，此外采用的icr小鼠相关融合稳定性高，排异性小，后期产生的抗体稳定性较好。实验发现，本专利技术中的抗体能有效检测结肠癌细胞及结肠癌组织中的casq2，特异性好，此外还可阻断casq2，抑制结肠
2、为达上述目的，本专利技术采用如下的技术方案：
3、本专利技术目的之一是提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为anti-casq2，分类命名为小鼠杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.46001。
4、本专利技术目的之二是提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述杂交瘤细胞株产生，能特异性识别、靶向casq2蛋白。
5、本专利技术目的之三是提供了一种所述单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
6、1)重组表达载体的构建
7、根据casq2开放阅读框序列，设计引物扩增casq2编码区，通过酶切位点插入到pet28a载体，构建pet28a-casq2-his重组表达载体；
8、2)casq2重组蛋白的表达和纯化
9、将所述pet28a-casq2-his重组表达载体转化至细菌，诱导蛋白表达，然后裂解细菌，离心获得蛋白上清，最后经过亲和层析获得纯化的casq2蛋白；
10、3)单克隆抗体的筛选与制备
11、使用所述纯化的casq2蛋白免疫小鼠，免疫完成后，取小鼠的脾细胞和sp2/0细胞融合获得单克隆，筛选出阳性杂交瘤细胞株，即得到能够分泌针对casq2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为抗casq2重组单克隆抗体2d7，亚型鉴定为igg2b型，将所述杂交瘤细胞株接种至小鼠腹腔，收集小鼠腹水，经过纯化即获得所述单克隆抗体。
12、进一步的，所述步骤(1)中设计的引物序列如seq id no.1-seq id no.2所示，使用的酶切位点为ecori和xhoi。
13、进一步的，所述步骤(2)中使用的细菌为bl21(de3)感受态细菌，使用iptg诱导蛋白表达。
14、进一步的，所述步骤(3)中免疫小鼠时使用的是icr雌鼠，免疫包括初次免疫和加强免疫，最后通过proteina/g纯化获得所述单克隆抗体。
15、本专利技术目的之四是提供了一种所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体在casq2蛋白检测产品制备中的应用。
16、本专利技术目的之五是提供了一种所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体在癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品制备中的应用。
17、本专利技术目的之六是提供了一种casq2蛋白检测产品，所述casq2蛋白检测产品中含有所述单克隆抗体，其不仅能特异性识别、靶向casq2，检测casq2含量的多少、变化，而且能阻断casq2的生物学效应。
18、本专利技术目的之七是提供了一种癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品，所述癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品中含有所述单克隆抗体，其不仅能检测、诊断癌变进程，而且能抑制癌细胞迁移。
19、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
20、(1)本专利技术采用带有his标签的casq2全长蛋白免疫icr小鼠，因为免疫蛋白所携带的标签分子量较小，相对于mbp、gst等大分子标签来说免疫原性较低，产生的抗体特异性较好。此外采用的icr小鼠相关融合稳定性高，排异性小，后期产生的抗体稳定性较好。
21、(2)实验发现，本专利技术中的抗体能有效检测结肠癌细胞及结肠癌组织中的casq2，特异性好，此外还可阻断casq2，抑制结肠癌的转移。
22、保藏证明说明：
23、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
24、保藏编号：cgmcc no.46001；
25、保藏日期：2024年06月17日；
26、保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
27、分类学命名：小鼠杂交瘤细胞株。
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1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为anti-CASQ2，分类命名为小鼠杂交瘤细胞株，保藏编号为CGMCC No.46001。
2.一种单克隆抗体，其特征在于，由如权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，能特异性识别、靶向CASQ2蛋白。
3.权利要求2所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中设计的引物序列如SEQID NO.1-SEQ ID NO.2所示，使用的酶切位点为EcoRI和XhoI。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中使用的细菌为BL21(DE3)感受态细菌，使用IPTG诱导蛋白表达。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中免疫小鼠时使用的是ICR雌鼠，免疫包括初次免疫和加强免疫，最后通过ProteinA/G纯化获得所述单克隆抗体。
7.权利要求1所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求2所述的单克隆抗体在CASQ2蛋白检测产品制备中的应用。
8.权利要求
9.一种CASQ2蛋白检测产品，其特征在于，其中含有权利要求2所述的单克隆抗体，其不仅能特异性识别、靶向CASQ2，检测CASQ2含量的多少、变化，而且能阻断CASQ2的生物学效应。
10.一种癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品，其特征在于，其中含有权利要求2所述的单克隆抗体，其不仅能检测、诊断癌变进程，而且能抑制癌细胞迁移。
...【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为anti-casq2，分类命名为小鼠杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.46001。
2.一种单克隆抗体，其特征在于，由如权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，能特异性识别、靶向casq2蛋白。
3.权利要求2所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中设计的引物序列如seqid no.1-seq id no.2所示，使用的酶切位点为ecori和xhoi。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中使用的细菌为bl21(de3)感受态细菌，使用iptg诱导蛋白表达。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王征，王琳，田少博，储亚南，李诺金，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：
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