【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫诊断，具体涉及一种基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法及其检测装置。
技术介绍
1、均相化学发光免疫分析技术是近年来在临床免疫诊断中比较先进的一种诊断分析技术。与常见的免疫诊断分析技术如酶联免疫技术，荧光免疫层析技术，磁微粒化学发光免疫分析技术等非均相免疫分析技术相比，均相化学发光免疫分析技术所采用的反应体系不需要进行体系分离，免除了清洗过程，使得整个检测流程更加简便，适合开发成poct等快检方法。
2、目前市场上比较常见的均相化学发光免疫分析技术是基于loci (luminescentoxygen channeling assay) 技术发展出来的一种新型化学发光分析技术，代表性的产品有perkinelmer公司的alphascreen和alphalisa检测试剂。 这类试剂中包含两种微球：一种是光敏微球，含有在特定波长光照下可以产生单线态氧的化合物比如酞菁分子，其中光敏微球在波长680nm左右的激光照射下可以产生大量单线态氧分子。单线态氧半衰期仅为4us，在水介质中衰减快，最远可传输200nm距离左右；另一种是发光微球，含有能与单线态氧反应的荧光物质比如二甲基噻吩和铕元素；如果发光微球能通过免疫识别等特异性识别的方式接近光敏微球，则发光微球中的荧光物质可以迅速与光敏微球附近产生的单线态氧发生反应，通过能量转移激发铕元素发出波长610nm左右的荧光信号；因此当光敏微球或发光微球上包被有合适配对的抗体、抗原或者其他特异性识别的分子，通过与检测样本中相应的待检物形成桥联，光敏微球和发光微球的距离就可
3、不管是perkinelmer公司的产品还是其他公司生产的类似均相化学发光检测试剂，基本的反应流程都是发光微球与检测样本混合温育一段时间，然后再加入对应的光敏微球温育一段时间，最后照射激光测量荧光信号强度。然而在实际的临床应用中，我们发现当前的均相化学发光分析技术的检测流程中前期的温育步骤还是较长，而且最后的测量也只能在整个反应结束后再进行，无法实现实时检测；这也导致了目前的均相发光的主流产品检测时间都在15分钟以上，与poct的快速检测目标仍然存在一定差距。
4、基于以上现状，申请人希望提出技术方案来对解决以上技术问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法及其检测装置,在确保检测质量的基础上，可以极大地缩短检测时间，整个检测流程可以实现在3分钟内完成。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，至少包括如下操作步骤：
4、s10）、在饱和氧环境下，将待测样本与均相化学发光试剂搅拌混合，得到搅拌混合物；优选地，搅拌混合的时间可以为3-20秒，更优选为5-15秒，进一步更优选为5-10秒；
5、s20）、采用激光对所述搅拌混合物进行照射，记录其荧光信号强度；
6、s30）、在饱和氧环境下，对所述搅拌混合物进行温育，所述温育时间不超过5分钟，温育时间优选为1-3分钟，具体温育时间可以根据待检物的种类来进行实际选择；
7、s40）、再次采用激光对温育后的搅拌混合物进行照射，记录其荧光信号强度；
8、s50）、基于所述步骤s40）与所述步骤s20）记录的荧光信号强度差值，采用荧光信号强度速率变化与校准对照曲线来计算得到所述待测样本中的待检物浓度；
9、所述均相化学发光试剂在激光照射下会进行反应产生荧光信号，且所述均相化学发光试剂含有与所述待检样本中的待检物进行特异性结合的抗体和/或抗原和/或者特异性结合分子。
10、需要说明的是，在本专利技术提供的快速检测方法中，可以采用常温环境进行温育，优选采用37℃温育；当然地，具体温育温度可以根据待检物的种类来进行实际选择。
11、优选地，所述饱和氧环境是指所述待测样本所处检测环境为处于饱和氧状态，其纯氧浓度（包括维护反应所需的高氧浓度）达到了最大可能水平；进一步优选地，在具体实施时，在检测装置的供氧单元中配备了氧气浓度的监测模块，当监测发现检测环境中的氧气浓度低于80%时，会及时补充，用于确保待测样本始终处于饱和氧环境。
12、优选地，所述均相化学发光试剂包括光敏微球、发光微球和缓冲液；其中，
13、所述光敏微球含有在激光照射下产生单线态氧的光敏物质（例如酞菁类物质或其他具有类似光敏效果的光敏物质）；
14、所述发光微球含有与所述单线态氧进行反应产生荧光信号的荧光物质（例如二甲基噻吩类、蒽类、红荧烯类、铕离子类等一种或者多种材料的组合，或其他具有类似荧光效果的荧光物质）；
15、且所述光敏微球的表面或所述发光微球的表面包被有与所述待检样本中的待检物进行特异性结合的抗体和/或抗原和/或其他特异性结合分子。
16、优选地，所述光敏微球和所述发光微球的直径不大于200nm；所述光敏微球和所述发光微球的载体均选用聚苯乙烯微球。
17、优选地，所述激光的波长为680nm，用来激发光敏微球中光敏物质（例如酞菁类物质）产生活性的单线态氧；需要说明的是，单线态氧在水溶液中的半衰期很短，大约4μs左右，在水中最远约能扩散200nm左右；当反应体系中存在待检物时，光敏微球与发光微球通过抗体抗原等特异性识别形成桥联后，光敏微球中产生的单线态活性氧可以扩散桥联的发光微球，与发光微球中的荧光物质反应后产生荧光信号；所述荧光信号波长为520nm到620nm。
18、优选地，所述缓冲液包括缓冲剂，还包括无机盐和/或表面活性剂和/或二糖稳定剂和/或蛋白保护剂和/或防腐剂。
19、优选地，所述缓冲剂选自4-羟乙基哌嗪乙磺酸（hepes）缓冲体系、3-(n-吗啉)-2-羟基丙磺酸（mopso）缓冲剂、三羟基氨基甲烷盐酸（tris-hcl）缓冲剂、2-吗啉乙磺酸（mes）缓冲液、甘氨酸缓冲剂中的任意一种或几种的混合；和/或所述缓冲剂的浓度范围为10-100mmol/l；和/或缓冲剂的ph范围为5.5-7.5；所述无机盐选用浓度范围为10-100mmol/l的氯化钠或氯化钾；所述表面活性剂选自质量浓度范围为0.1-1%的tween-20、tween-60、tween-80、triton x-100中的任意一种；所述二糖稳定剂选用质量浓度为0.5-4%的蔗糖或海藻糖；所述蛋白保护剂选自质量浓度为0.5-8%的甘氨酸、精氨酸、牛血清蛋白（bsa）、酪蛋白中的任意一种或几种的混合；所述防腐剂选用质量浓度为0.1-0.4%的 proclin-300。
20、优选地，将所述步骤s20）的荧光信号强度记为i1，对应的时间点记为t1；...
【技术保护点】
1.一种基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，至少包括如下操作步骤：
2.根据权利要求1所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述饱和氧环境是指所述待测样本所处检测环境为处于饱和氧状态，其纯氧浓度达到了最大可能水平。
3.根据权利要求1所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述均相化学发光试剂包括光敏微球、发光微球和缓冲液；其中，
4.根据权利要求3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述光敏微球和所述发光微球的直径不大于200nm；所述光敏微球和所述发光微球的载体均选用聚苯乙烯微球。
5.根据权利要求1或3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述激光的波长为680nm；所述荧光信号波长为520nm到620nm。
6.根据权利要求3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述缓冲液包括缓冲剂，还包括无机盐和/或表面活性剂和/或二糖稳定剂和/或蛋白保护剂和/或防腐剂。
7.根据权利要求6所述基于均相化学发光
8.根据权利要求1所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，将所述步骤S20）的荧光信号强度记为I1，对应的时间点记为T1；
9.一种根据权利要求1-8之一所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法所采用的检测装置，其特征在于，包括反应杯、供氧单元、搅拌单元、光源、温控单元、光信号采集单元和数据处理单元；其中，
10.根据权利要求9所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法所采用的检测装置，其特征在于，所述反应杯为透明反应杯；所述供氧单元为纯氧供应单元；所述光源为激光光源；所述搅拌单元为磁力搅拌单元；所述温控单元为电加热单元。
...【技术特征摘要】
1.一种基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，至少包括如下操作步骤：
2.根据权利要求1所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述饱和氧环境是指所述待测样本所处检测环境为处于饱和氧状态，其纯氧浓度达到了最大可能水平。
3.根据权利要求1所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述均相化学发光试剂包括光敏微球、发光微球和缓冲液；其中，
4.根据权利要求3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述光敏微球和所述发光微球的直径不大于200nm；所述光敏微球和所述发光微球的载体均选用聚苯乙烯微球。
5.根据权利要求1或3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述激光的波长为680nm；所述荧光信号波长为520nm到620nm。
6.根据权利要求3所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述缓冲液包括缓冲剂，还包括无机盐和/或表面活性剂和/或二糖稳定剂和/或蛋白保护剂和/或防腐剂。
7.根据权利要求6所述基于均相化学发光免疫分析的快速检测方法，其特征在于，所述缓冲剂选自4-羟乙基哌嗪乙磺酸（hepes）缓冲体系、3-(n-吗啉)-2-羟基丙磺酸（mopso）缓冲剂、三羟基氨基甲烷盐酸（tris-hcl）缓冲剂、...
【专利技术属性】
技术研发人员：向晖刘，陈胜胜，居金明，黄迎庆，汪春芳，
申请(专利权)人：安徽预炎家生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。