【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，尤其涉及一种cmv启动子衍生物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、乳动物细胞表达系统，是治疗性蛋白、转基因治疗实验、病毒载体选择的最佳表达系统。该表达系统能够指导蛋白的正确折叠，同时还能提供蛋白分子糖基化、磷酸化等翻译后的修饰，使蛋白分子接近于天然的蛋白。因此哺乳动物细胞表达系统在生物医学和药学研究中具有不可替代的作用。现阶段使用哺乳表达系统制备重组蛋白存在成本高、周期长的缺点，虽然随着分子生物学、细胞生物学的发展，使用哺乳表达系统对增强重组蛋白的表达也进行了一系列的研究，包括信号肽优化、敲除凋亡基因、转染及补料方式优化、添加丙戊酸、丁酸钠等诱导剂等，但已知的哺乳表达系统生产的外源分泌目的蛋白常常不能达到所需程度，因此建立高效表达的哺乳表达系统是亟待解决的问题之一。
2、cmv启动子常用于哺乳动物细胞表达系统的重组蛋白表达，其含有rna聚合酶识别以及结合和开始转录的一段保守的dna序列。cmv启动子决定了下游基因的活动。增强子是远离转录起始点，以及决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的dna序列；因此结合cmv启动子和增强子有望提高哺乳表达系统生产的外源分泌目的蛋白的产量。
3、现阶段增强子和cmv启动子含有多个转录因子结合位点，包括多次重复出现的nf-κb、creb、sp1、srf和elk-1的dna结合位点；现阶段有研究表明nf-κb可调节增强子的活性并控制启动子高效转录，而yy1和rbp-jκ可以降低启动子的转录效率，但是目前针对哺乳动物细胞表达系统分泌表达重组蛋白，这
技术实现思路
1、本申请提供了一种cmv启动子衍生物及其制备方法和应用，以解决如下技术问题：如何提高哺乳动物细胞表达系统分泌表达重组蛋白的表达效率和产量。
2、第一方面，本申请提供了一种cmv启动子衍生物，所述cmv启动子衍生物的核苷酸序列包括增强子序列、cpg岛元件序列和核心启动子序列，其中，所述增强子序列包括yy1人工序列、rbp-jκ人工序列和部分的nf-κb人工序列，所述核心启动子序列包括剩余的所述nf-κb人工序列。
3、可选的，所述nf-κb人工序列包括第一nf-κb人工序列和第二nf-κb人工序列，所述第一nf-κb人工序列位于所述增强子序列内，所述第二nf-κb人工序列位于所述核心启动子序列内。
4、可选的，所述第一nf-κb人工序列具有如seq id no.1所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述第二nf-κb人工序列具有如seq id no.2所示的同源性＞85％的核苷酸序列。
5、可选的，所述yy1人工序列具有如seq id no.3所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述rbp-jκ人工序列具有如seq id no.4所示的核苷酸序列。
6、可选的，所述增强子序列具有如seq id no.5所示的核苷酸序列，所述cpg岛元件序列具有如seq id no.6所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述核心启动子序列具有如seq id no.7所示的核苷酸序列。
7、可选的，所述cmv启动子衍生物的核苷酸序列具有如seq id no.8所示的同源性＞90％的核苷酸序列。
8、第二方面，本申请提供了一种表达载体，所述表达载体包括第一方面所述的cmv启动子衍生物。
9、可选的，所述表达载体还包括目的基因，所述目的基因包括以下至少一种：
10、人dsg2基因片段、人kaag1基因片段和egfp基因片段。
11、可选的，所述表达载体所用的质粒包括psectag2a载体。
12、第三方面，本申请提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白是由第二方面所述的表达载体所表达出的。
13、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
14、本申请实施例提供的一种cmv启动子衍生物，所述cmv启动子衍生物的核苷酸序列包括增强子序列、ei元件序列和核心启动子序列，其中，所述增强子序列包括yy1人工序列、rbp-jκ人工序列和部分的nf-κb人工序列，所述核心启动子序列包括剩余的所述nf-κb人工序列；通过设计包括增强子序列、ei元件序列和核心启动子序列的cmv启动子衍生物，再在增强子序列中引入部分的nf-κb人工序列，以及在核心启动子序列中引入剩余的nf-κb人工序列，可以通过nf-κb人工序列提高增强子序列的活性，并提高核心启动子的转录效率，进而可以通过cmv启动子衍生物提高哺乳动物细胞表达系统分泌表达重组蛋白的表达效率，另外在增强子序列中引入yy1人工序列和rbp-jκ人工序列，相比传统的yy1序列和rbp-jκ序列，该yy1人工序列和该rbp-jκ人工序列都是突变序列，可以避免传统的yy1序列和rbp-jκ序列对启动子转录的影响，从而可以通过yy1人工序列和rbp-jκ人工序列提高增强子序列的转录效率，以通过cmv启动子衍生物提高哺乳动物细胞表达系统分泌表达重组蛋白的表达产量。
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1.一种CMV启动子衍生物，其特征在于，所述CMV启动子衍生物的核苷酸序列包括增强子序列、CPG岛元件序列和核心启动子序列，其中，所述增强子序列包括YY1人工序列、RBP-Jκ人工序列和部分的NF-κB人工序列，所述核心启动子序列包括剩余的所述NF-κB人工序列。
2.根据权利要求1所述的CMV启动子衍生物，其特征在于，所述NF-κB人工序列包括第一NF-κB人工序列和第二NF-κB人工序列，所述第一NF-κB人工序列位于所述增强子序列内，所述第二NF-κB人工序列位于所述核心启动子序列内。
3.根据权利要求2所述的CMV启动子衍生物，其特征在于，所述第一NF-κB人工序列具有如SEQ ID NO.1所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述第二NF-κB人工序列具有如SEQ IDNO.2所示的同源性＞85％的核苷酸序列。
4.根据权利要求1所述的CMV启动子衍生物，其特征在于，所述YY1人工序列具有如SEQID NO.3所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述RBP-Jκ人工序列具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
5.根据权
6.根据权利要求1所述的CMV启动子衍生物，其特征在于，所述CMV启动子衍生物的核苷酸序列具有如SEQ ID NO.8所示的同源性＞90％的核苷酸序列。
7.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求1～6任一项所述的CMV启动子衍生物。
8.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体还包括目的基因，所述目的基因包括以下至少一种：
9.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体所用的质粒包括pSecTag2A载体。
10.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白是由权利要求7～9任一项所述的表达载体所表达出的。
...【技术特征摘要】
1.一种cmv启动子衍生物，其特征在于，所述cmv启动子衍生物的核苷酸序列包括增强子序列、cpg岛元件序列和核心启动子序列，其中，所述增强子序列包括yy1人工序列、rbp-jκ人工序列和部分的nf-κb人工序列，所述核心启动子序列包括剩余的所述nf-κb人工序列。
2.根据权利要求1所述的cmv启动子衍生物，其特征在于，所述nf-κb人工序列包括第一nf-κb人工序列和第二nf-κb人工序列，所述第一nf-κb人工序列位于所述增强子序列内，所述第二nf-κb人工序列位于所述核心启动子序列内。
3.根据权利要求2所述的cmv启动子衍生物，其特征在于，所述第一nf-κb人工序列具有如seq id no.1所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述第二nf-κb人工序列具有如seq idno.2所示的同源性＞85％的核苷酸序列。
4.根据权利要求1所述的cmv启动子衍生物，其特征在于，所述yy1人工序列具有如seqid no.3所示的同源性＞85％的核苷酸序列，所述rbp-jκ人工序列具有...
【专利技术属性】
技术研发人员：于倩，华权高，易汪雪，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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