【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗外科，具体涉及一种基于改进的干热交联技术制备的胶原蛋白海绵及其应用。
技术介绍
1、外科及创伤手术中广泛出血及渗血是术中经常遇到的难题，尤其是多血管的实质性脏器，如肝脏外伤的出血，外伤时常伴有大量失血导致的凝血功能障碍，因此，及时有效的止血是降低术后死亡风险及提高术后康复的关键。
2、目前，国内外研究根据材质一般可将止血材料分为三大类：无机类止血材料、合成类止血材料与生物衍生止血材料。无机类止血材料主要包括沸石(zeolite)、高岭土(kaolin)、蒙脱土(montmorillonite)等，其主要通过分子筛作用吸附血液中大量的水分，进而加快血凝块的形成。无机类止血材料的代表是沸石止血材料quikclot，主要用在危及生命的伤害中止血，但其不可降解性和放热性的特征限制了其临床应用。合成类止血材料多为医用黏合剂，主要包括氰基丙烯酸酯类组织胶、聚乙二醇类凝胶等，这类止血材料不具有任何内源性止血功能，主要通过在伤口部位发生交联反应或快速聚合，达到迅速黏合与封闭创伤组织的目的。这种材料虽然对创面形成临时性保护和止血，其缺点也是显而易见的：1、对创面无促愈合作用；2、清创处理不彻底极易引起创面脓性感染，给患者带来新的痛苦并使病情绵延。生物衍生止血材料又可分为蛋白类止血材料和多糖类止血材料两大类，蛋白类止血材料主要来源包括胶原蛋白、明胶、纤维蛋白原等。多糖类止血材料主要来源包括纤维素、淀粉、海藻酸、壳聚糖以及其他多糖类物质。生物衍生止血材料由于其无毒性、良好的生物相容性、生物可降解性以及促凝血活性越来越受到
3、动物源胶原已经广泛应用于医疗器械领域，如止血及组织修复等方面均有较为深入的研究，解决了很多临床问题，造福众多患者。而基因工程法获得的重组仿生型胶原蛋白，近年来也逐渐被更多的科研工作者深入研究，该类胶原蛋白相比于动物源胶原具有无病毒隐患、水溶性佳、更低的免疫原性等优势，故在临床领域具有理论上更安全的应用。
4、此外，凝血开始到形成凝血酶之前为止，是由内源性和外源性两个系统组成。钙离子在凝血机制中被称为凝血因子ⅳ，是多种因子的辅因子，可以同其他凝血因子一起逐级将凝血酶原转化成凝血酶，参与到内外源性凝血途径中的多个环节。
5、专利技术专利zl 202010052422.9中涉及的重组胶原海绵材料采用化学试剂交联，有试剂残留等风险，且在工艺中需要进行试剂残留去除，整个工艺较繁琐、生产周期较长且成本较高，故研究一种更加安全有效，同时价格更为低廉的胶原蛋白海绵迫在眉睫。
6、干热交联技术已在医用材料中普遍使用，如淀粉-壳聚糖干热交联制备的可降解止血材料、类弹性蛋白-蚕丝纤维干热交联制备的多孔复合材料、胶原-壳聚糖干热交联制备的三维多孔支架等。但是其均采用普通烘箱，有氧且高温环境下物质容易氧化发生变性，导致产品品质较差，不符合我们的预期要求。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种双层胶原蛋白海绵及其制备方法与应用，由该方法制得的生物膜具备疏松层和致密层，且批内及批间稳定性好、成品率高，具有良好的机械性能、力学性能、溶胀性能、抗降解性能、生物相容性。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种双层胶原蛋白海绵的制备方法，其包括以下步骤：
3、(1)将胶原蛋白配置成胶原蛋白溶液；
4、(2)对上述胶原蛋白溶液进行冷冻干燥，得到胶原蛋白海绵；
5、(3)将上述胶原蛋白海绵于真空条件下进行干热交联与辐照交联，得到所述双层胶原蛋白海绵；
6、其中，步骤(3)中，在真空干燥箱内超导热板上进行干热交联。
7、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，步骤(1)中，所述胶原蛋白为重组胶原蛋白。
8、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述重组胶原蛋白为cn106554410a所公开的重组人源胶原蛋白，该重组人源胶原蛋白包含下列家族成员中的一种或几种：
9、1)具有序列表中seq id no:1氨基酸残基序列的蛋白质；
10、2)与seq id no:1氨基酸残基序列同源性在90％以上且具有与seq id no:1相同活性的seq id no:1衍生的蛋白质；
11、3)在seq id no:1氨基酸残基序列的n-端增加或删除15个以内氨基酸残基得到的具有与seq id no:1相同活性的seq id no:1衍生的蛋白质；
12、4)在seq id no:1氨基酸残基序列的c-端增加或删除15个以内氨基酸残基得到的具有与seq id no:1相同活性的seq id no:1衍生的蛋白质；
13、5)将seq id no:1氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与seq id no:1相同活性的seq id no:1衍生的蛋白质。
14、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述胶原蛋白溶液中胶原蛋白的浓度为0.5-15％，更优选为1-10％，进一步优选为1-7％。
15、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液的组成还包括无机钙盐，如无水氯化钙(cacl2)，可促进机体本身内源性止血过程的发生。
16、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，所述胶原蛋白溶液中无水氯化钙的浓度为0.05-0.2％，更优选为0.05-0.1％，进一步优选为0.08-0.1％。
17、根据本专利技术的具体实施方案，配置胶原蛋白溶液具体过程例如：将0.5-15g胶原蛋白及0.05-0.2g无水氯化钙(cacl2)加入纯化水至100毫升，得到含0.05％-0.2％无水氯化钙(cacl2)的浓度为0.5％-15％的胶原蛋白溶液；或不加无水氯化钙(cacl2)，将0.5-15g胶原蛋白加入纯化水至100毫升，得到浓度为0.5％-15％的胶原蛋白溶液。
18、根据本专利技术的具体实施方案，优选地，步骤(2)中，所述冷冻干燥的工艺包括以下步骤：
19、(1)预冻：分两个阶段进行，预冻第一阶段的工艺参数为在30-120min内，温度从室温达到0-4℃，并持续30-180min；预冻第二阶段的工艺参数为在60-180min内，温度达-60℃至-40℃，并持续120-300min；
20、(2)升华：分三个阶段进行，升华第一阶段的工艺参数为在30-120min内，温度达-30℃至-20℃，并持续120-480min，真空度为0.20-0.50bar；升华第二阶段的工艺参数为在10-60min内，温度达-20℃至-15℃，并持续120-480min，真空度为0.10-0.20bar；升华第三阶段的工艺参数为在10-60min内，温度达-15℃至-10℃，并持续120-480min，真空度为0.05-0.10bar；
21、(3)解析干燥：在60-180min内，温度达20-40℃，并持续120-480本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双层胶原蛋白海绵的制备方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述胶原蛋白为重组胶原蛋白；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液的组成还包括无机钙盐，所述无机钙盐优选为无水氯化钙；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(2)中，所述冷冻干燥的工艺包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(3)中，所述干热交联的工艺包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述超导热板的当量导热系数为14MW/m·℃-30MW/m·℃。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述辐照交联为钴60辐照交联；
8.一种双层胶原蛋白海绵，其由权利要求1-7任一项所述的制备方法制得；
9.权利要求8所述的双层胶原蛋白海绵在制备医用材料中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述医用材料为用于口腔颌面外科、神经外科、普外科或骨科医疗中的止血材料、修复材料或充填材料；>...
【技术特征摘要】
1.一种双层胶原蛋白海绵的制备方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述胶原蛋白为重组胶原蛋白；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液的组成还包括无机钙盐，所述无机钙盐优选为无水氯化钙；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(2)中，所述冷冻干燥的工艺包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(3)中，所述干热交联的工艺包括以下步骤：
<...【专利技术属性】
技术研发人员：田珍，侯佳宁，罗琳娜，李元，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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