【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药鉴别，尤其涉及一种僵蚕药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的特征图谱的构建方法及其应用。
技术介绍
1、僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕bombyx mori linnaeus 4～5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌beauveria bassiana(bals.)vuillant而致死的干燥体。多于春、秋季生产，将感染白僵菌病死的蚕干燥。僵蚕味咸、辛，平。归肝、肺、胃经，具有息风止痉，祛风止痛，化痰散结的功效。用于肝风夹痰，惊痫抽搐，小儿急惊风，破伤风，中风口风热头痛，目赤咽痛，风疹瘙痒，发颐痄腮。现代研究表明，僵蚕还有多种化学成分，包括蛋白质、氨基酸、草胺酸、酶类、核苷碱基、甾体、挥发油、微量元素等，其中蛋白质含量最高。其药理作用主要包括抗凝血、抗血栓及抗惊厥，此外还具有降压、降糖、抗菌、增强免疫等其他作用。
2、目前，中国药典2020年版暂未载入僵蚕药材的特征图谱相关标准，有文献报道僵蚕指纹图谱主要有核苷类、氨基酸类和黄酮类成分，针对核苷类成分，有研究报道采用hplc方法，建立僵蚕指纹图谱，该特征图谱具有14个共有峰，指认了6种化合物，但上述方法的图谱均具有分离度差、某些共有峰峰面积较小的问题。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种僵蚕药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的特征图谱的构建方法，其各特征峰分离度高，信息量丰富。
2、本专利技术还要解决的技术问题在于，提供一种炒僵蚕饮片、标准汤剂及配方颗粒的特征图谱的构建方法，其各特征峰分
3、本专利技术还要解决的技术问题在于，提供一种上述的特征图谱的构建方法在僵蚕与伪品鉴别中的应用。
4、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种僵蚕药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其包括：
5、将第一僵蚕样品采用水或10vol％～50vol％甲醇提取，得到第一供试品溶液；所述第一僵蚕样品包括僵蚕药材、僵蚕饮片、僵蚕标准汤剂或僵蚕配方颗粒；
6、将僵蚕对照药材和/或对照品采用水提取，得到参照物溶液；其中，所述对照品包括尿酸对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、尿苷对照品、腺嘌呤对照品、鸟苷对照品、腺苷对照品；
7、将所述第一供试品溶液、参照物溶液采用液相色谱仪测定，即得；
8、其中，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈为流动相a，以浓度为3mmol/l～10mmol/l的乙酸铵溶液为流动相b进行梯度洗脱，梯度洗脱曲线为：
9、0min～16min，流动相a为0％，流动相b为100％；
10、16min～40min，流动相a从0％→3％，流动相b从100％→97％；
11、40min～47min，流动相a从3％→6％，流动相b从97％→94％；
12、47min～55min，流动相a从6％→15％，流动相b从94％→85％。
13、相应的，本专利技术还公开了一种炒僵蚕饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其包括：
14、将第二僵蚕样品采用水或10vol％～50vol％甲醇提取，得到第二供试品溶液；所述第二僵蚕样品包括炒僵蚕饮片、炒僵蚕标准汤剂或炒僵蚕配方颗粒；
15、将僵蚕对照药材和/或对照品采用水提取，得到参照物溶液；其中，所述对照品包括尿酸对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、尿苷对照品、腺嘌呤对照品、鸟苷对照品、腺苷对照品；
16、将所述第二供试品溶液、参照物溶液采用液相色谱仪测定，即得；
17、其中，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈为流动相a，以浓度为3mmol/l～10mmol/l的乙酸铵溶液为流动相b进行梯度洗脱，梯度洗脱曲线为：
18、0min～16min，流动相a为0％，流动相b为100％；
19、16min～40min，流动相a从0％→3％，流动相b从100％→97％；
20、40min～47min，流动相a从3％→6％，流动相b从97％→94％；
21、47min～55min，流动相a从6％→15％，流动相b从94％→85％。
22、作为上述技术方案的改进，通过ph调节液将所述流动相b的ph调节为4.4～4.6，所述ph调节液为30vol％～98vol％的乙酸溶液；
23、所述固定相的粒径为1.5μm～6μm；
24、所述液相色谱仪的色谱柱的柱长为100mm～300mm，柱径为2mm～6mm，柱温为28℃～32℃，流速为0.9ml/min～1.1ml/min；
25、所述液相色谱仪的检测波长为260nm。
26、作为上述技术方案的改进，所述乙酸铵溶液的浓度为5mmol/l，ph为4.5；
27、所述固定相的粒径为5μm；
28、所述液相色谱仪的色谱柱的柱长为250mm，柱径为4.6mm，柱温为30℃，流速为1ml/min。
29、作为上述技术方案的改进，所述参照物溶液包括对照药材参照物溶液和对照品参照物溶液；
30、所述对照药材参照物溶液的制备方法为：取僵蚕对照药材0.5g～1.2g，加水20ml～30ml，采用频率为20khz～50khz的超声处理20min～40min，在95℃～100℃下加热2min～10min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
31、所述对照品参照物溶液的制备方法为：取尿酸对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、尿苷对照品、腺嘌呤对照品、鸟苷对照品、腺苷对照品适量，加水制成每1ml各含尿酸110μg～130μg、次黄嘌呤10μg～30μg、黄嘌呤20μg～40μg、尿苷10μg～20μg、腺嘌呤10μg～30μg、鸟苷10μg～20μg、腺苷20μg～30μg的混合溶液，即得。
32、作为上述技术方案的改进，所述对照药材参照物溶液的制备方法为：取僵蚕对照药材1.0g，加水25ml，采用频率为40khz的超声处理30min，在100℃水浴加热5min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
33、所述对照品参照物溶液的制备方法为：取尿酸对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、尿苷对照品、腺嘌呤对照品、鸟苷对照品、腺苷对照品适量，加水制成每1ml各含尿酸120μg、次黄嘌呤20μg、黄嘌呤30μg、尿苷15μg、腺嘌呤20μg、鸟苷15μg、腺苷25μg的混合溶液，即得。
34、作为上述技术方案的改进，所述第一供试品溶液的制备方法为：取僵蚕药材或僵蚕饮片0.8g～1.5g，加入水或10vol％～50vol％甲醇20ml～40ml，采用频率为20khz～50khz的超声处理15min～45min，在95℃～100℃下加热2min～10min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
35、或
36、所述第一供试品溶液的制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种僵蚕药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：
2.一种炒僵蚕饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：
3.如权利要求1或2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，通过pH调节液将所述流动相B的pH调节为4.4～4.6，所述pH调节液为30vol％～98vol％的乙酸溶液；
4.如权利要求3所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的浓度为5mmol/L，pH为4.5；
5.如权利要求1或2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液包括对照药材参照物溶液和对照品参照物溶液；
6.如权利要求5所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照药材参照物溶液的制备方法为：取僵蚕对照药材1.0g，加水25mL，采用频率为40kHz的超声处理30min，在100℃水浴加热5min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
7.如权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述第一供试品溶液的制备方法为：取僵蚕药材或僵蚕饮片0.8g～1.
8.如权利要求7所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述第一供试品溶液的制备方法为：取僵蚕药材或僵蚕饮片1.0g，加入水25mL，采用频率为40kHz的超声处理30min，置100℃水浴加热5min后冷却至20℃～30℃，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
9.如权利要求2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述第二供试品溶液的制备方法为：取炒僵蚕饮片0.8g～1.5g，加入水或10vol％～50vol％甲醇20mL～40mL，采用频率为20kHz～50kHz的超声处理15min～45min，在95℃～100℃下加热2min～10min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
10.如权利要求9所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述第二供试品溶液的制备方法为：取炒僵蚕饮片1.0g，加入水25mL，采用频率为40kHz的超声处理30min，置100℃水浴加热5min后冷却至20℃～30℃，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
11.如权利要求1或2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述特征图谱共9个峰，其中，峰1为尿酸、峰2为次黄嘌呤、峰3为黄嘌呤、峰4为尿苷、峰5为腺嘌呤、峰7为鸟苷、峰9为腺苷；
12.权利要求1～11任一项所述的特征图谱的构建方法在僵蚕与伪品鉴别中的应用。
13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述伪品包括未感染白僵菌的家蚕、玉米虫、面包虫、金龟子幼虫。
...【技术特征摘要】
1.一种僵蚕药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：
2.一种炒僵蚕饮片、标准汤剂、配方颗粒的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：
3.如权利要求1或2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，通过ph调节液将所述流动相b的ph调节为4.4～4.6，所述ph调节液为30vol％～98vol％的乙酸溶液；
4.如权利要求3所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的浓度为5mmol/l，ph为4.5；
5.如权利要求1或2所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液包括对照药材参照物溶液和对照品参照物溶液；
6.如权利要求5所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照药材参照物溶液的制备方法为：取僵蚕对照药材1.0g，加水25ml，采用频率为40khz的超声处理30min，在100℃水浴加热5min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
7.如权利要求1所述的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述第一供试品溶液的制备方法为：取僵蚕药材或僵蚕饮片0.8g～1.5g，加入水或10vol％～50vol％甲醇20ml～40ml，采用频率为20khz～50khz的超声处理15min～45min，在95℃～100℃下加热2min～10min，冷却至20℃～30℃，滤过，取续滤液，即得；
8.如权利要求7所...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱韵静，童培珍，吴文平，何嘉莹，杨丽，吴妙梨，潘礼业，叶梅霞，邢菊玲，李国卫，孙冬梅，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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