【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微生物，具体涉及一种乳杆菌胞外多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
1、胞外多糖(exopolysaccharide,eps)是微生物在生长代谢过程中产生的一类重要的生物大分子，它们可以附着在微生物细胞壁上形成荚膜，或被分泌到周围环境中形成粘液。eps因其独特的物理化学性质、生物安全性和生物活性而备受关注，尤其是在食品、医药和化妆品等领域的存在较大的应用潜力。
2、乳杆菌(lab)产生的eps具有复杂的结构，通常由不同的单糖组成，如葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖等。这些单糖通过特定的糖苷键连接，形成不同的直链状或支链结构，从而赋予eps不同的物理化学特性和生物功能。
3、现有研究表明，乳杆菌产生的eps具有显著的抗氧化活性，能有效清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。这种抗氧化能力使得乳杆菌的eps在抗衰老、抗炎症和免疫调节等方面具有广泛的应用前景。
4、金山醋酸乳杆菌广泛存在于各白酒酿造体系中，在酒醅发酵后期的主要优势菌株之一，在白酒酿造中具有重要功能。对金山醋酸乳杆菌产生的胞外多糖(eps)进行分离纯化，分析其结构特征，探索其潜在生物功能活性，为其在食品、化妆品以及制药方面的应用提供充分的理论基础，具有重要意义。
5、有鉴于此，特提出本申请。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种乳杆菌胞外多糖及其制备方法与应用，该胞外多糖具有抗氧化活性，在医药、食品等领域有良好的应用前景。
2、为实现上述专利技术目的，本申请采用的技
3、第一方面，本申请提供了一种乳杆菌胞外多糖，所述乳杆菌胞外多糖由金山醋酸乳杆菌(acetilactobacillus jinshanensis)发酵产生，所述金山醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cctcc no:m2021419。
4、具体地，所述乳杆菌胞外多糖为金山醋酸乳杆菌的胞外多糖，由保藏号为cctccno:m2021419的金山醋酸乳杆菌bj01株(acetilactobacillus jinshanensis bj01)菌株接种于酸性mrs液体培养基中发酵产生。该菌株保藏日期是2021年4月20日。中国典型培养物保藏中心简称cctcc，位于湖北省武汉市武汉大学校内，邮编430072，电话：027-68752319，email:cctcc@whu.edu.cn。所述金山醋酸乳杆菌从湖北省某白酒酒醅中分离得到，经生理生化和16s rdna序列分析鉴定。
5、在一种可选的实施方式中，所述乳杆菌胞外多糖的分子量为140.919～172.235kda，平均分子量为156.577kda。
6、在一种可选的实施方式中，所述乳杆菌胞外多糖为由甘露糖组成的同多糖。具体地，所述乳杆菌胞外多糖的主链包括相互连接的→2,6)-α-d-manp-(1→糖残基、→2)-α-d-manp-(1→糖残基和→3)-α-d-manp-(1→糖残基，支链包括连接在→2,6)-α-d-manp-(1→糖残基的o-2和/或o-6位置上的α-d-manp-(1→糖残基。在一个实施方案中，所述胞外多糖由式i所示的重复结构单元组成：
7、
8、第二方面，本申请提供了上述乳杆菌胞外多糖的制备方法，所述方法包括如下步骤：
9、在发酵培养基中培养所述金山醋酸乳杆菌(acetilactobacillusjinshanensis)。
10、在一种可选的实施方式中，所述培养的条件包括：
11、培养温度为30℃，培养时间为120h。
12、在一种可选的实施方式中，所述方法还包括从发酵液中分离所述乳杆菌胞外多糖的步骤；
13、可选地，所述从发酵液中分离所述乳杆菌胞外多糖，包括：
14、将所述发酵液水浴后离心取上清液，加入三氯乙酸去除蛋白，再次离心取上清液，经醇沉、复溶、透析和真空冷冻干燥，得到乳杆菌胞外多糖粗品；
15、将所述乳杆菌胞外多糖粗品复溶，依次进行离子交换层析柱分级和琼脂糖凝胶层析柱分离。
16、可选地，经琼脂糖凝胶层析柱分离后，还包括对所得产物进行透析、真空冷冻干燥的步骤。示例性地，离子交换层析柱可以是deae-sepharose fast flow阴离子交换层析柱，琼脂糖凝胶层析柱可以是琼脂糖凝胶cl-6b层析柱。
17、在一种可选的实施方式中，示例性地，所述发酵培养基可以包含以下组分：牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母浸粉5g，葡萄糖20g，无水乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，吐温80 1ml，七水硫酸镁0.2g，一水硫酸锰0.05g，蒸馏水1000ml。添加乳酸和乙酸1：1的混合酸调节ph至3.8。
18、在一个具体的实施方案中，本申请乳杆菌胞外多糖的制备方法可以包括以下步骤：
19、(1)将金山醋酸乳杆菌bj01株(acetilactobacillus jinshanensis bj01)cctccno:m2021419进行活化、扩大培养，得到扩培液；
20、(2)将步骤(1)制得的扩培液接种至发酵培养基中，30℃静置培养120h，获得含有金山醋酸乳杆菌胞外多糖的发酵液；
21、(3)将步骤(2)制得的液体发酵液于40℃水浴4h后离心，收集上清液；
22、(4)将步骤(3)制得的上清液中加入终浓度为5％的三氯乙酸，4℃放置过夜，离心，收集上清液；
23、(5)将步骤(4)制得的上清液中加入三倍体积的95％乙醇，经醇沉24h后，离心，收集沉淀；
24、(6)将步骤(5)制得的沉淀用纯水溶解，透析，真空冷冻干燥后，制得粗胞外多糖；
25、(7)将步骤(6)制得的粗胞外多糖用纯水溶解，制得粗胞外多糖溶液；
26、(8)将步骤(7)制得的粗胞外多糖溶液通过deae-sepharose fast flow阴离子交换层析柱获得胞外多糖分级组分，再经过琼脂糖凝胶cl-6b层析柱分离，收集多糖组分；
27、(9)将步骤(8)制得的胞外多糖溶液经透析、真空冷冻干燥后，制得纯化的胞外多糖。
28、利用上述制备方法制备本申请的乳杆菌胞外多糖时，乳杆菌胞外多糖的产量约为203mg/l。
29、第三方面，本申请提供上述乳杆菌胞外多糖在制备具有抗氧化功效的产品中的应用。
30、第四方面，本申请提供一种具有抗氧化功效的产品，所述产品的原料包括上述乳杆菌胞外多糖。
31、在一种可选的实施方式中，所述产品包括具有抗衰老功效的产品、具有抗炎症功效的产品和具有免疫调节功效的产品中的至少一种。
32、在一种可选的实施方式中，所述产品包括食品、化妆品和药品中的至少一种。
33、基于上述技术方案，本申请至少具有如下有益效果：
34、本申请首次披露了一种结构明确且独特的金山醋酸乳杆菌的胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖由金山醋酸乳杆菌(Acetilactobacillus jinshanensis)发酵产生，所述金山醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CCTCC NO:M2021419。
2.根据权利要求1所述的乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖的分子量为140.919～172.235KDa，平均分子量为156.577KDa。
3.根据权利要求1或2所述的乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖为由甘露糖组成的同多糖；
4.权利要求1至3中任一项所述的乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述培养的条件包括：
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括从发酵液中分离所述乳杆菌胞外多糖的步骤；
7.权利要求1至3中任一项所述的乳杆菌胞外多糖在制备具有抗氧化功效的产品中的应用。
8.一种具有抗氧化功效的产品，其特征在于，所述产品的原
9.根据权利要求7所述的应用或者权利要求8所述的产品，其特征在于，所述产品包括具有抗衰老功效的产品、具有抗炎症功效的产品和具有免疫调节功效的产品中的至少一种。
10.根据权利要求7所述的应用或者权利要求8所述的产品，其特征在于，所述产品包括食品、化妆品和药品中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖由金山醋酸乳杆菌(acetilactobacillus jinshanensis)发酵产生，所述金山醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cctcc no:m2021419。
2.根据权利要求1所述的乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖的分子量为140.919～172.235kda，平均分子量为156.577kda。
3.根据权利要求1或2所述的乳杆菌胞外多糖，其特征在于，所述乳杆菌胞外多糖为由甘露糖组成的同多糖；
4.权利要求1至3中任一项所述的乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制...
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