【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药，具体涉及一种从连翘中同时制备对照品级连翘苷和连翘酯苷a。
技术介绍
1、连翘(forsythia suspensa(thunb.)vahl)为木犀科连翘属落叶灌木，秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”，具有清热解毒、消肿散结之功效。现代药理研究表明，连翘具有抗菌、抗病毒、解热抗炎、抗氧化、保肝等多种药理作用。连翘苷和连翘酯苷a为连翘的重要活性物质，是国家药典所规定的连翘质量控制指标成分。连翘苷具有清热、解毒、散结排脓、降血脂等功效；连翘酯苷a对阿尔茨海默症有一定的疗效，对金黄色葡萄球菌等多种致病菌具有抑制作用，而且还能够抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧，两者在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂及天然抗氧化剂均具有广泛的应用前景。
2、目前，对连翘苷和连翘酯苷a的提取及纯化方法均有报道。现有技术中，主要通过热水提取，硅胶柱或柱层析法纯化得到连翘苷和连翘酯苷a。中国专利cn201110209731.3公开了一种从连翘叶中提取连翘苷和连翘酯苷a的方法，其先通过热水提取，沉淀分离，再用有机溶剂萃取，乙醇重结晶等制备连翘苷和连翘酯苷a，但热水提取不完全，耗时太长，得率比较低。
3、现有技术存在的不足：(1)水提取多采用将连翘与水混合浸泡后再加热提取，提取效率低下，有效成分提取不充分；(2)分离还停留在硅胶柱分离的阶段，需要用大量的有机溶剂冲洗，分离周期长，回收率低，分离效果不理想，所用的材料也不能重复使用，成本较高，不符合
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供一种分离、纯化连翘苷和连翘酯苷a的方法，目的在于提供一种快速、高效分离对照品级连翘苷和连翘酯苷a的新方法，尤其是一种采用动态轴向压缩柱分离制备连翘苷和连翘酯苷a的方法。
2、本专利技术解决了现有技术中分离制备连翘苷和连翘酯苷a所存在的纯度及收率低、除杂不彻底、人工成本高、操作复杂和工艺路线不合理以及不适合大生产等弊端。
3、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
4、一种同时制备高纯度连翘苷和连翘酯苷a的方法，包括下列步骤：
5、a、提取：取连翘饮片，加入4-10倍的40％-90％乙醇溶液，加热回流提取4次，每次1-2h，合并醇回流液，减压浓缩至50-60℃时相对密度为1.02-1.05，得浓缩液ⅰ，备用；
6、b、萃取：取浓缩液ⅰ，加入0.5-2倍体积的30-60℃石油醚萃取2次，收集水层，减压浓缩得浓缩液ⅱ；浓缩液ⅱ再加入0.5-2倍体积正丁醇萃取2次，合并正丁醇层，减压浓缩，得干膏，备用；
7、c、冷沉析晶：取步骤b所得干膏用甲醇溶解，加水稀释，冷沉24-48小时，离心，过滤收集上清液得连翘苷和连翘酯苷a混合物粗品溶液；
8、d、高效液相色谱法制备：将连翘苷和连翘酯苷a混合物粗品溶液注入高效液相色谱制备柱，梯度洗脱，紫外检测器在线检测，分别收集含连翘苷和含连翘酯苷a的流出液，收集液减压浓缩，冷冻干燥，即得。
9、优选地，步骤a取连翘饮片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
10、优选地，步骤a取连翘饮片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
11、优选地，步骤b中，浓缩液ⅰ加1倍体积的30-60℃石油醚萃取2次；浓缩液ⅱ加1倍体积的正丁醇萃取2次。
12、优选地，步骤d所述的高效液相色谱制备柱为dac-hb50动态轴向压缩柱。
13、步骤d所述高效液相色谱制备柱填料为反相硅胶基质填料；优选地，所述反向硅胶基质填料为十八烷基键合硅胶；进一步优选填料为华谱粒径为10μm。
14、本专利技术中，步骤d梯度洗脱过程以甲醇-纯化水为流动相。
15、优选地，梯度洗脱按照如下条件进行洗脱：
16、
17、
18、优选地，所述洗脱梯度条件如下：
19、
20、优选地，步骤d所述紫外检测为双波长检测，连翘苷检测波长为277nm，连翘酯苷a的检测波长为330nm。
21、本专利技术的技术方案与现有技术相比，取得了如下的技术优势和有益效果：
22、1)本专利技术通过回流、萃取、冷沉析晶、高效液相色谱法制备，能有效去除杂质，富集、提高有效成分含量、收率，使连翘苷及翘酯苷a纯度达到对照品级别，所得连翘中连翘苷及翘酯苷a纯度高达99.8％，明显优于现有技术，临床应用效果好。
23、2)本专利技术连翘提取过程分别使用85％和50％的乙醇回流提取4次，可以兼顾连翘苷和连翘酯苷a的提取得率，可同时使得连翘苷和连翘酯苷a的提取收率都能达到最高，减少药材资源的浪费。
24、3)本专利技术萃取过程采用选用石油醚萃取，可除去提取液中脂溶性色素，正丁醇萃取，可以除去部分极性较大、水溶性的杂质，纯化样品，使样品满足制备柱上样样品需求，保护制备柱的柱头和填料，适于连续生产。
25、4)本专利技术采用双波长检测法，可在一张色谱图上精准定位连翘苷和连翘酯苷a的色谱峰，同时制备高纯度的连翘苷和连翘酯苷a，保证连翘苷和连翘酯苷a有效成分的准确分离和富集，提高提取物中连翘苷和连翘酯苷a的含量。本制备方法可实现半自动化操作，节约时间，减少生产成本，更适合大生产。
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1.一种同时制备高纯度连翘苷和连翘酯苷A的方法，其特征在于，包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A取连翘饮片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤A取连翘饮片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B中，浓缩液Ⅰ加1倍体积的30-60℃石油醚萃取2次；浓缩液Ⅱ加1倍体积的正丁醇萃取2次。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤D所述的高效液相色谱制备柱为DAC-HB50动态轴向压缩柱。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤D所述高效液相色谱制备柱填料为反相硅胶基质填料；优选地，所述反向硅胶基质填料为十八烷基键合硅胶；进一步优选填料为华谱粒径为10μm。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤D梯度洗脱过程以甲醇-纯化水为流动相。
8.根据权利要求7所述的制备方法
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱梯度条件如下：
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤D所述紫外检测为双波长检测，连翘苷检测波长为277nm，连翘酯苷A的检测波长为330nm。
...【技术特征摘要】
1.一种同时制备高纯度连翘苷和连翘酯苷a的方法，其特征在于，包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤a取连翘饮片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤a取连翘饮片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，浓缩液ⅰ加1倍体积的30-60℃石油醚萃取2次；浓缩液ⅱ加1倍体积的正丁醇萃取2次。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤d所述的高效液相色谱制备柱为dac-hb50动态...
【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，王立友，郝大伟，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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