【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种唐鱼属线粒体全基因组序列的扩增引物及方法。
技术介绍
1、唐鱼，又称白云金丝，隶属于鲤形目、鲤科、唐鱼属，是中国特有的珍稀水生生物资源，主要分布在广东省白云山、花县以及广州附近的山溪中。由于人类活动的影响，唐鱼的自然栖息地遭受破坏，导致其在自然界中的种群数量急剧下降，目前唐鱼已被列入《中国生物多样性红色名录——脊椎动物卷》中的极危保护等级，面临着严峻的生存挑战。
2、随着生物技术的进步，线粒体全基因组序列的研究在物种鉴定、遗传多样性分析和系统发育研究等领域显示出其重要性。线粒体基因组作为生物体内的一种重要遗传物质，以其独特的环状分子结构、较小的分子量和母系遗传特性，成为生物多样性研究中的关键分子标记。
3、唐鱼属的线粒体全基因组序列研究对于揭示其遗传背景、血缘关系以及生物学特性具有重要的科学意义和应用价值。这不仅有助于深入理解唐鱼的生物学特性，而且对于其资源保护和生物多样性的维护具有指导作用。
4、然而，传统的线粒体基因组扩增方法，如引物步移法，存在诸多不足，该方法需要设计大量的引物对，扩增过程繁琐且耗时，同时由于反复扩增测序，增加了错误率，影响了最终序列的拼接结果和注释的准确性。此外，唐鱼属下可能存在未被发现的隐种，而传统的形态学鉴定方法依赖于专业人员，且容易因主观判断导致分类上的混乱。
技术实现思路
1、针对现有方法的不足，本专利技术提供一种唐鱼属线粒体全基因组序列的扩增引物及方法。
2、为实现
3、第一方面，本专利技术提供一种唐鱼属线粒体全基因组序列的扩增引物，包括如下9对引物对，基因序列分别如下所示：
4、(1)第1对上游引物为：seq id no.1所示的核苷酸序列5＇-cccctagaggagcctgttct-3＇，下游引物为：seq id no.2所示的核苷酸序列5＇-gcaattagccatgctctgcc-3＇；
5、(2)第2对上游引物为：seq id no.3所示的核苷酸序列5＇-gcagccgctattaagggttc-3＇，下游引物为：seq id no.4所示的核苷酸序列5＇-ggctaaaggtcatgctggtg-3＇；
6、(3)第3对上游引物为：seq id no.5所示的核苷酸序列5＇-gctacccccattcttgcact-3＇，下游引物为：seq id no.6所示的核苷酸序列5＇-ttcacgtttggcagcgaaag-3＇；
7、(4)第4对上游引物为：seq id no.7所示的核苷酸序列5＇-ggtctagccggaataccacg-3＇，下游引物为：seq id no.8所示的核苷酸序列5＇-tcctagttcgggggtaggtg-3＇；
8、(5)第5对上游引物为：seq id no.9所示的核苷酸序列5＇-tttcgctgccaaacgtgaag-3＇，下游引物为：seq id no.10所示的核苷酸序列5＇-aaccctgtggccacaaagaa-3＇；
9、(6)第6对上游引物为：seq id no.11所示的核苷酸序列5＇-cggcttagcaatctggttcc-3＇，下游引物为：seq id no.12所示的核苷酸序列5＇-agtaggtgttctcgggtgtg-3＇；
10、(7)第7对上游引物为：seq id no.13所示的核苷酸序列5＇-tcttgctcgagggctacaaa-3＇，下游引物为：seq id no.14所示的核苷酸序列5＇-gtttttgcttattcggcggc-3＇；
11、(8)第8对上游引物为：seq id no.15所示的核苷酸序列5＇-gacttgaagtctcaggccct-3＇，下游引物为：seq id no.16所示的核苷酸序列5＇-cggcatgtggggttaatgag-3＇；
12、(9)第9对上游引物为：seq id no.17所示的核苷酸序列5＇-atgaattggaggaatacccg-3＇，下游引物为：seq id no.18所示的核苷酸序列5＇-tacgctacacctcgacctga-3＇。
13、第二方面，本专利技术提供一种利用所述的扩增引物扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，包括如下步骤：以提取的唐鱼属基因组dna为模板，利用所述的扩增引物进行pcr扩增，所得扩增产物进行琼脂糖电泳检测、测序。
14、优选地，所述pcr扩增反应体系包括：dna模板1μl、10μm引物各2μl，premix taq 25μl，余量用ddh2o补齐至50μl。
15、优选地，所述pcr扩增程序为：98℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸60s，共30个循环，最后72℃延伸10min，4℃hold。
16、第三方面，一种扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的试剂盒，包括所述的扩增引物。
17、本专利技术的积极有益效果：
18、1.本专利技术针对唐鱼属设计了9对特异性引物，可以对唐鱼属的线粒体dna进行pcr扩增，并获得线粒体全长基因，本专利技术的扩增体系用更少的引物来完成目的片段的全覆盖，减少了扩增工作量，同时也降低了多次扩增反应造成的扩增错误的概率。
19、2.唐鱼属基因组目前可用的参考基因组较少，扩增方法中每一对引物的反应条件都会有所不同，因此，对于这个类群生物的线粒体基因组的获得会非常有意义，这对于唐鱼属的生物多样性的维护、科学研究以及唐鱼属资源的可持续利用具有重要的实际意义和应用价值。
20、3.本专利技术首次获得唐鱼属下两个新种唐鱼的线粒体基因组全长序列，经分析得出：海南唐鱼、广西唐鱼的线粒体序列全长16544bp和16545bp，均包括13个蛋白质编码基因、22个trna基因和2个rrna基因。
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1.一种唐鱼属线粒体全基因组序列的扩增引物，其特征在于，包括如下9对引物对，基因序列分别如下所示：
2.一种利用权利要求1所述的扩增引物扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：以提取的唐鱼属基因组DNA为模板，利用所述的扩增引物进行PCR扩增，所得扩增产物进行琼脂糖电泳检测、测序。
3.根据权利要求2所述的扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应体系包括：DNA模板1μL、10μM引物各2μL，Premix Taq 25μL，余量用ddH2O补齐至50μL。
4.根据权利要求2所述的扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为：98℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸60s，共30个循环，最后72℃延伸10min，4℃Hold。
5.一种扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的扩增引物。
【技术特征摘要】
1.一种唐鱼属线粒体全基因组序列的扩增引物，其特征在于，包括如下9对引物对，基因序列分别如下所示：
2.一种利用权利要求1所述的扩增引物扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：以提取的唐鱼属基因组dna为模板，利用所述的扩增引物进行pcr扩增，所得扩增产物进行琼脂糖电泳检测、测序。
3.根据权利要求2所述的扩增唐鱼属线粒体全基因组序列的方法，其特征在于，所述pcr扩增反应体系包...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨铁柱，赵良杰，李帆，邹文旭，张文超，郝晓玉，亢佳音，何青青，
申请(专利权)人：信阳农林学院，
类型：发明
国别省市：
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