【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学，尤其涉及一种特异性识别细菌的免洗荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、细菌性感染，尤其是食源性和医院获得性感染，对医疗健康领域构成了重大挑战。因此，快速、准确地检测和识别病原细菌对于疾病的预防、诊断和治疗至关重要。传统的细菌检测方法，例如培养法和生化试验，虽然准确性较高，但存在过程繁琐、耗时长等缺点，难以满足临床快速诊断的需求。
2、近年来，基于荧光标记的细菌检测技术因其高灵敏度、操作简便和快速响应等优点而受到广泛关注。然而，现有荧光染料在应用过程中存在荧光信号稳定性差、易受环境因素影响、对细菌生长和代谢产生毒性等局限性。并且，一些荧光染料的标记过程需要复杂的洗涤步骤，这不仅增加了操作的复杂性，还可能导致细菌的损失或荧光信号的减弱。如专利申请cn201911388988.2和cn201911058048.7描述了基于荧光染色的微生物检测方法，尽管提供了有价值的检测手段，但过于复杂的洗涤步骤在操作简便性和检测效率方面仍有改进空间。并且，基于抗生素的探针虽然能在细菌鉴别方面表现出高度的特异性，但它们可能会影响细菌的生物学功能并诱发抗菌素的耐药性。因此，开发一种高度特异性、没有任何洗涤步骤或任何生物干扰的免洗探针是十分有必要的，对于提高细菌检测的准确性和临床应用价值具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种特异性识别细菌的免洗荧光探针，可实现快速且肉眼可视化检测细菌的效果。
2、本专利技术的目的还在于提供
3、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
4、本专利技术提供了一种特异性识别细菌的免洗荧光探针，所述免洗荧光探针的结构式如下所示：
5、
6、其中，n为13～21，x选自i-、cl-、br-中的任意一种。
7、优选的，当n为13时，所述细菌为革兰氏阳性活菌、革兰氏阳性死菌、革兰氏阴性活菌和革兰氏阴性死菌。
8、优选的，当n为17时，所述细菌为革兰氏阳性活菌。
9、本专利技术还提供了一种特异性识别细菌的免洗荧光探针的制备方法，包括以下步骤：化合物b与卤代烷溶解在乙腈中，回流、纯化，得到特异性识别细菌的免洗荧光探针；所述化合物b的结构式如下所示：
10、
11、优选的，所述卤代烷选自溴十四烷、碘十四烷、氯十四烷、溴十五烷、碘十五烷、氯十五烷、溴十六烷、碘十六烷、氯十六烷、溴十七烷、碘十七烷、氯十七烷、溴十八烷、碘十八烷、氯十八烷、溴十九烷、碘十九烷、氯十九烷、溴二十烷、碘二十烷、氯二十烷、溴二十一烷、碘二十一烷、氯二十一烷、溴二十二烷、碘二十二烷、氯二十二烷中的任意一种。
12、优选的，所述化合物b与卤代烷的质量体积比为95～100mg:0.1ml。
13、优选的，所述回流时间为20～26h；所述纯化方法为硅胶柱层析纯化。
14、优选的，所述化合物b的合成步骤包括：4-吡啶甲醛和2,4-二甲基吡咯溶解于二氯甲烷中，在氮气保护下加入三氟乙酸催化反应；反应结束后加入ddq，室温搅拌；在冰水浴条件下加入et3n，搅拌；在冰水浴条件下滴加b f3·et2o，滴加后恢复室温，搅拌；抽滤、旋干、萃取、纯化，得到化合物b。
15、本专利技术还提供了一种特异性检测细菌的方法，将上述免洗荧光探针与样本溶液混合，避光孵育后进行检测。
16、优选的，所述检测方法包括荧光强度检测、激光共聚焦成像和紫外灯照射中的任意一种或几种。
17、本专利技术的有益效果：
18、本专利技术针对性的开发得到特异性识别细菌的免洗荧光探针，所述探针可有效标记细菌，能够实现快速且肉眼可视化检测细菌的效果，且在避光条件下对细菌无毒害作用，不会引起细菌耐药性。
19、本专利技术基于开发得到的免洗荧光探针，进一步提供了一种特异性检测细菌的方法，该方法操作简单，便于观察、检测，可以实现快速且肉眼可视化检测细菌浓度，没有复杂的脱色步骤，抗生物干扰性强。
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1.一种特异性识别细菌的免洗荧光探针，其特征在于，所述免洗荧光探针的结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的免洗荧光探针，其特征在于，当n为13时，所述细菌为革兰氏阳性活菌、革兰氏阳性死菌、革兰氏阴性活菌和革兰氏阴性死菌。
3.根据权利要求1所述的免洗荧光探针，其特征在于，当n为17时，所述细菌为革兰氏阳性活菌。
4.一种特异性识别细菌的免洗荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：化合物B与卤代烷溶解在乙腈中，回流、纯化，得到特异性识别细菌的免洗荧光探针；所述化合物B的结构式如下所示：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷选自溴十四烷、碘十四烷、氯十四烷、溴十五烷、碘十五烷、氯十五烷、溴十六烷、碘十六烷、氯十六烷、溴十七烷、碘十七烷、氯十七烷、溴十八烷、碘十八烷、氯十八烷、溴十九烷、碘十九烷、氯十九烷、溴二十烷、碘二十烷、氯二十烷、溴二十一烷、碘二十一烷、氯二十一烷、溴二十二烷、碘二十二烷、氯二十二烷中的任意一种。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化合物B与卤代烷的质量体积比
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述回流时间为20～26h；所述纯化方法为硅胶柱层析纯化。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化合物B的合成步骤包括：4-吡啶甲醛和2,4-二甲基吡咯溶解于二氯甲烷中，在氮气保护下加入三氟乙酸催化反应；反应结束后加入DDQ，室温搅拌；在冰水浴条件下加入Et3N，搅拌；在冰水浴条件下滴加BF3·Et2O，滴加后恢复室温，搅拌；抽滤、旋干、萃取、纯化，得到化合物B。
9.一种特异性检测细菌的方法，其特征在于，将权利要求1～3任意一项所述的免洗荧光探针与样本溶液混合，避光孵育后进行检测。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述检测方法包括荧光强度检测、激光共聚焦成像和紫外灯照射中的任意一种或几种。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性识别细菌的免洗荧光探针，其特征在于，所述免洗荧光探针的结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的免洗荧光探针，其特征在于，当n为13时，所述细菌为革兰氏阳性活菌、革兰氏阳性死菌、革兰氏阴性活菌和革兰氏阴性死菌。
3.根据权利要求1所述的免洗荧光探针，其特征在于，当n为17时，所述细菌为革兰氏阳性活菌。
4.一种特异性识别细菌的免洗荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：化合物b与卤代烷溶解在乙腈中，回流、纯化，得到特异性识别细菌的免洗荧光探针；所述化合物b的结构式如下所示：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述卤代烷选自溴十四烷、碘十四烷、氯十四烷、溴十五烷、碘十五烷、氯十五烷、溴十六烷、碘十六烷、氯十六烷、溴十七烷、碘十七烷、氯十七烷、溴十八烷、碘十八烷、氯十八烷、溴十九烷、碘十九烷、氯十九烷、溴二十烷、碘二十烷、氯二十烷、溴二十一烷、碘二十一烷、氯二十一烷、溴二十二烷、碘二十二...
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