【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学以及病毒学领域，更具体地，本专利技术涉及基于腺病毒载体的结核疫苗。
技术介绍
1、结核分支杆菌是导致结核病的病原体，结核病是一种慢性消耗性疾病，可入侵人体全身各个器官，但主要侵犯肺脏；人与人之间呼吸道传播是结核病传染的主要方式。结核病也是一种古老的疾病，但自18、19世纪，结核病在欧洲成为流行病；随着公共医疗卫生条件的不断提高，结核病的流行趋势得到扼制。1921年，法国科学家calmette与guérin研发了基于减毒的结核分枝杆菌的卡介苗(bcg)，用来预防肺结核。
2、遏制结核杆菌感染造成的流行病，其预防意义远大于治疗。现有的国内基本药物文本规定抗结核药物(含复合剂)共11种，如异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、对氨基水杨酸钠、乙胺丁醇、利福喷汀、链霉素等。这些抑菌药物在临床治疗中是已得到有效应用，但由于结核杆菌感染后能造成不可逆转的器官损伤和病理改变以及药物造成的不良反应，从个体生活期望和社会经济的角度来看，普及抗结核疫苗是应对结核分支杆菌感染的最优措施。
3、卡介苗是目前世界上针对结核病预防的接种最广泛的疫苗，一般在出生后立即接种。然而，卡介苗所产生的免疫保护是局限的。首先卡介苗产生的免疫保护因人而异，个体差异较大；其次，免疫保护仅为10年左右；另外，由于易感染人群的复杂性：免疫缺陷患者、人口流动的增加、多重耐药结核菌株的出现等原因，研发更有效、更安全的结核病疫苗势在必行。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于腺病毒载体的
2、在本专利技术的第一方面，提供一种制备重组腺病毒载体的方法，包括：在腺病毒骨架载体中引入结核分枝杆菌基因表达盒，从而获得所述重组腺病毒载体；所述表达盒中存在ag85b抗原的编码基因；以及选自下组蛋白的编码基因：pfkb、hspx、hrpⅰ、rv2628c、rv2660c、cfp10、rpib。
3、在本专利技术的另一方面，提供一种制备重组腺病毒的方法，包括：(1)制备权利要求1所述的重组腺病毒载体；和(2)将(1)的重组腺病毒载体转染病毒生产细胞，从而包装获得重组腺病毒。
4、在一种或多种实施方式中，所述的病毒生产细胞是可以实现病毒包装的细胞；较佳地包括：hek293细胞。
5、在一种或多种实施方式中，所述腺病毒骨架载体为黑猩猩型腺病毒adc68载体；较佳地为经改造的adc68xy载体；更佳地为adc68xy3载体。
6、在一种或多种实施方式中，所述经改造的adc68xy载体包括：基于黑猩猩型腺病毒adc68基因组序列，删除其e1序列和e3序列，改造其e4序列；所述改造包括以人血清5型腺病毒adhu5基因组中相应的e4序列或其片段替换adc68基因组中e4序列或其片段。
7、在一种或多种实施方式中，所述编码基因串联于所述表达盒中。
8、在一种或多种实施方式中，所述表达盒中存在ag85b抗原的编码基因，以及下组的编码基因：
9、cfp10、hspx和pfkb；更佳地，其串联如下：cfp10-hspx-pfkb；
10、rpib、hspx和pfkb；更佳地，其串联如下：rpib-hspx-pfkb；
11、cfp10、rpib、hspx和pfkb；更佳地，其串联如下：cfp10-rpib-hspx-pfkb；
12、cfp10、rpib、hspx、pfkb、hrpi、rv2628c和rv2660c；更佳地，其串联如下：cfp10-rpib-hspx-pfkb-hrpi-rv2628c-rv2660c；
13、rpib、hrpi和rv2628c；更佳地，其串联如下：rpib-hrpi-rv2628c；
14、cfp10、rpib和rv2660c；更佳地，其串联如下：cfp10-rpib-rv2660c；
15、cfp10、rpib、hrpi和rv2628c；更佳地，其串联如下：cfp10-rpib-hrpi-rv2628c；或
16、cfp10、hrpi和rv2628c；更佳地，其串联如下：cfp10-hrpi-rv2628c。
17、在一种或多种实施方式中，所述的表达盒中，还包括：位于所述的结核分枝杆菌基因的上游的启动子，和/或位于所述结核分枝杆菌基因下游的终止子；从而构成表达所述蛋白的表达盒。
18、在一种或多种实施方式中，对所述编码基因进行人密码子偏好的优化。
19、在一种或多种实施方式中，所述编码基因的串联按照5’→3’的次序。
20、在一种或多种实施方式中，所述pfkb的氨基酸序列如seq id no:1所示；
21、所述hspx的氨基酸序列如seq id no:2所示；
22、所述hrpⅰ的氨基酸序列如seq id no:3所示；
23、所述rv2628c的氨基酸序列如seq id no:4所示；
24、所述rv2660c的氨基酸序列如seq id no:5所示；
25、所述cfp10的氨基酸序列如seq id no:6所示；
26、所述rpib的氨基酸序列如seq id no:7所示；或
27、所述ag85b的氨基酸序列如seq id no:8所示。
28、在本专利技术的另一方面，提供一种重组腺病毒载体，包括：腺病毒骨架载体以及存在于该载体中的结核分枝杆菌基因表达盒；所述表达盒中存在ag85b抗原的编码基因；以及选自下组蛋白的编码基因：pfkb、hspx、hrpⅰ、rv2628c、rv2660c、cfp10、rpib。
29、在本专利技术的另一方面，提供所述的重组腺病毒载体的用途，用于制备重组腺病毒，所述重组腺病毒诱导机体产生对抗结核杆菌的免疫保护。
30、在一种或多种实施方式中，所述重组腺病毒诱导机体产生细胞免疫，所述细胞包括cd8+t细胞和cd4+t细胞。
31、在一种或多种实施方式中，所述重组腺病毒诱导机体产生抗结核杆菌蛋白的特异性结合抗体。
32、在本专利技术的另一方面，提供一种重组腺病毒，所述的重组腺病毒由权利要求6所述的重组腺病毒载体包装获得。
33、在一种或多种实施方式中，所述的重组腺病毒由所述的制备重组腺病毒的方法制备获得。
34、在本专利技术的另一方面，提供所述的重组腺病毒的用途，用于制备防治结核病的疫苗组合物或药盒。
35、在本专利技术的另一方面，提供疫苗的组合物或药盒，所述的疫苗组合物包括所述的重组腺病毒，以及药学上可接受的载体；或者，所述的药盒中含有所述的重组腺病毒；或者，所述的药盒中含有所述的疫苗组合物。
36、本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
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1.一种制备重组腺病毒载体的方法，包括：在腺病毒骨架载体中引入结核分枝杆菌基因表达盒，从而获得所述重组腺病毒载体；
2.一种制备重组腺病毒的方法，包括：
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述腺病毒骨架载体为黑猩猩型腺病毒AdC68载体；较佳地为经改造的AdC68XY载体；更佳地为AdC68XY3载体。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述编码基因串联于所述表达盒中；
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PFKB的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
6.一种重组腺病毒载体，包括：腺病毒骨架载体以及存在于该载体中的结核分枝杆菌基因表达盒；所述表达盒中存在Ag85B抗原的编码基因；以及选自下组蛋白的编码基因：PFKB、HSPX、HRPⅠ、Rv2628c、Rv2660c、CFP10、RPIB；
7.权利要求6所述的重组腺病毒载体的用途，用于制备重组腺病毒，所述重组腺病毒诱导机体产生对抗结核杆菌的免疫保护；
8.一种重组腺病毒，其特征在于，所述的重组腺病毒由权利要求
9.权利要求8所述的重组腺病毒的用途，用于制备防治结核病的疫苗组合物或药盒。
10.疫苗的组合物或药盒，其特征在于，所述的疫苗组合物包括：权利要求8所述的重组腺病毒；以及药学上可接受的载体；
...【技术特征摘要】
1.一种制备重组腺病毒载体的方法，包括：在腺病毒骨架载体中引入结核分枝杆菌基因表达盒，从而获得所述重组腺病毒载体；
2.一种制备重组腺病毒的方法，包括：
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述腺病毒骨架载体为黑猩猩型腺病毒adc68载体；较佳地为经改造的adc68xy载体；更佳地为adc68xy3载体。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述编码基因串联于所述表达盒中；
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述pfkb的氨基酸序列如seq id no:1所示；
6.一种重组腺病毒载体，包括：腺病毒骨架载体以及存在于该载体中的结核...
【专利技术属性】
技术研发人员：周东明，邢嫚，何芙蓉，
申请(专利权)人：苏州相奕生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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